蕪菁籽中總黃酮含量測定的方法學研究

馬合木提·買買提明，瑪爾哈巴·吾斯滿，賽力慢·哈得爾，米麗班·霍加*

（1.新疆醫科大學 藥學院，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆師范大學科研處化學化工學院，新疆 烏魯木齊 830054）

蕪菁籽為十字花科（Cruciferous）植物蕪菁（Brassica rapa）干燥成熟的種籽。蕪菁籽具有清肝明目，利濕退黃，破積通淋的功效[1]。蕪菁籽還是維吾爾族醫藥中常用的族藥之一，以蕪菁籽油為藥用，與中醫中藥中蕪菁籽的用法不同，維吾爾族醫中常以蕪菁籽治療黃疸性肝炎，補腎生精，健胃消食，散風利尿，性功能減退，尿路結石，可去除雀斑和皺紋，固法解毒作用等功效，且具有高效，低毒副作用的優勢[2-3]。采用超聲-微波協同提取蕪菁籽中總黃酮，為其開發利用提供參考數據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

超聲-微波聯用萃取儀：上海新拓微波溶樣測試有限公司生產；UV-1100紫外可見分光光度計：上海美譜達儀器有限公司；RE-52A旋轉蒸發儀：上海亞榮生化儀器廠；AR1140電子天平：梅特勒-托利多儀器上海有限公司；FW177型中草藥粉碎機：天津泰斯特儀器有公司。

蕪菁籽采自新疆阿克蘇地區柯坪縣。

蘆丁對照品（批號110080-200707）購自中國藥品生物制品檢定所；95%vol乙醇，氫氧化鈉，亞硝酸鈉，硝酸鋁，石油醚等均為國產分析純。

1.2 方法

1.2.1 標準溶液的配制

精密稱取在120℃干燥至恒重的蘆丁對照品10.00mg，置50mL容量瓶中，加20mL 65%vol乙醇，超聲處理溶解，定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液（0.20mg/mL），放入冰箱備用[4]。

1.2.2 樣品中總黃酮類化合物的提取

將干凈蕪菁籽放入80℃烘箱中烘干，再用粉碎機粉碎，取一定量的粉末于1000mL燒杯中，以1:50比例加入石油醚，攪拌30min后浸泡24h，旋轉蒸餾除去石油醚脫脂，抽濾，濾渣經自然揮干石油醚后，備用。準確稱取濾渣5g，置于具塞三角瓶中，加入一定量65%vol的乙醇，在一定條件下，超聲處理40min，離心分離，過濾除渣，用65%vol乙醇定容至250mL容量瓶中，作為待測儲備液。

1.2.3 最大吸收波長的確定精確[5-6]

量取蘆丁對照品溶液2.0mL（0.20mg/mL），置于25mL容量瓶中，分別加入8mL 65%vol乙醇和1mL 5%亞硝酸鈉溶液，混勻，放置6min；加入1mL10%硝酸鋁溶液，混勻，放置6min；再加10mL 5%氫氧化鈉溶液，搖勻后用65%vol乙醇定容至25mL，放置15min后，用空白試劑作參比，在波長250nm～600nm范圍內進行掃描。

圖1 樣品和蘆丁的吸收曲線Fig.1 Absorption curve of samples and rutin

1.2.4 標準曲線的繪制

依據藥典中規定的測定總黃酮的常規方法進行測定。精確量取蘆丁對照品溶液0、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL分別置于25mL容量瓶中，照“1.2.3”的方法顯色后，在波長510nm處測定其吸光度值，用空白試劑作參比。

表1 蘆丁對照液濃度與吸光度值Table 1 Concentration and absorbency of standard rutin solutions

1.2.5 精密度試驗

精密吸取對照品溶液3.0mL共6份，分別置于25mL量瓶中，按“1.2.3”項下方法操作，測定吸光度值，計算相對標準偏差（RSD）。

1.2.6 穩定性實驗

精密量取“1.2.2”項中配制的待測儲備液10mL轉入100mL容量瓶中乙醇定容，從中取5mL待測液于25mL容量瓶中定容后，按“1.2.3”項上方法顯色，在波長510nm處每隔10min測定一次吸光度值，共測定6次，觀察吸光度的變化情況，計算相對標準偏差（RSD）。

1.2.7 重復性試驗

精密稱取5份“1.2.2”項中油醚脫脂后的濾渣5g，置于5個具塞三角瓶中，各加一定量的乙醇（65%vol），超聲處理40min，離心分離，過濾除渣，用65%vol乙醇定容至5個250mL容量瓶中，作為儲備液備用。每份移取10mL定容于100mL的5個容量瓶中。各取5mL置于25mL容量瓶，按“1.2.3”項上方法顯色后，以空白試劑為參比，在波長510nm處測定吸光度值，計算相對標準偏差（RSD）。

1.2.8 加樣回收率試驗

上一個實驗中配制的已知含量的5份儲備液中，各取1mL置于25mL容量瓶中，每份精確加入0.5mg蘆丁對照品，用65%vol乙醇溶解定容，照“1.2.3”的方法顯色，測定每份樣品的回收率及相對標準偏差（RSD）。

2 結果與分析

2.1 最大吸收波長和標準曲線

從蘆丁對照品溶液和待測液的掃描圖1可知，二者均在波長510nm處有吸收，并此處的干擾小，故以510nm為測定波長較合理。以蘆丁對照品溶液的濃度對吸光度值作圖，可得標準曲線，見圖2。由圖2可知，蘆丁對照品溶液的回歸方程為A=10.089c-0.0019，相關系數為R2=0.9991，表明蘆丁在0.01mg/mL～0.05mg/mL范圍內呈良好的線性關系。

圖2 蘆丁標準曲線Fig.2 Standard curve of rutin

2.2 精密度結果

由表2可知，測定結果的相對標準偏差RSD為0.31%，表明儀器精密度良好。

表2 精密度試驗結果Table 2 Result of precision test

2.3 穩定性結果

圖3 穩定性試驗結果Fig.3 Result of stability test

由圖3可知，10min～40min范圍之內，樣品溶液穩定性較好，相對標準偏差RSD為1.48%。

2.4 重復性結果

表3 重復性試驗結果Table 3 Results of repetitive experiment

從表3可知，該測定方法的重現性良好，測得RSD=1.32%。

2.5 加樣回收率試驗

表4 樣品加樣回收率試驗結果（n=5）Table 4 The average recovery experiment

由表4結果可知，樣品的平均回收率為99.66%且RSD小于1%，故認為用上述方法測定蕪菁籽中總黃酮含量完全可行。

3 結論

本試驗從方法學的角度探討了蕪菁籽中總黃酮含量測定方法的可信性。采用分光光度法分別測定了蕪菁籽中總黃酮的含量，在精密度試驗、穩定性試驗、重復性試驗和回收率試驗結果中相對標準偏差值都符合要求。說明測定儀器精密度良好，測定時間內樣品的穩定性可靠，測量結果的重復性好，加樣回收率試驗的平均回收率達99.66%，方法準確可行，結果表明此方法可適用于蕪菁籽中總黃酮含量測定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業出版社，2005.

[2]尼米吐拉，買買提江，木塔力甫.維吾爾醫常用藥材[M].烏魯木齊：新疆人民衛生出版社，2005：362.

[3]新疆維吾爾自治區衛生廳.維吾爾藥材標準[M].上冊.烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1993（8）：123.

[4]楊國恩.超聲-微波協同輔助溶劑法提取喜樹果中黃酮化合物的研究[J].光譜實驗室，2010，27（1）：27-29.

[5]李 莉，顏 杰.超聲-微波協同萃取桑葉總黃酮的工藝研究[J].安徽農業科學，2010，38（17）：9208-9210.

[6]李 莉，顏 杰.超聲-微波協同萃取桂花葉總黃酮的工藝研究[J].江蘇農業科學，2011（1）：306-308.