豬流感疫苗研究進展

崔克,江甜

（海南省動物疫病預防控制中心，海南海口 570203）

豬流感疫苗研究進展

崔克,江甜

（海南省動物疫病預防控制中心，海南海口 570203）

豬流行性感冒(SI）簡稱豬流感，是由正黏病毒科A型流感病毒屬的豬流感病毒(SIV）引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性呼吸道傳染病，臨床以突發、高熱、咳嗽、呼吸困難、反復發作、發病率高、死亡率低為特征。目前導致豬發病的主要有人源H3N2、經典豬H1N1和類禽源H1N13種亞型，在我國主要為H1N1、H3N2兩種亞型。豬流感病毒是豬呼吸道的常見病原，而且不斷通過抗原漂移和轉變實現進化，導致亞型眾多，難以根除。同時豬流感是一種免疫抑制性疾病，經常并發或繼發其他病毒或細菌的感染。豬流感病毒既可以感染人，也可也感染禽，因此，SIV不僅對養殖業危害嚴重，還有著重要的公共衛生意義。

對豬流感的防控重點是預防為主，同時應加強綜合管理措施。疫苗免疫是防控豬流感發生和流行的最佳措施。目前已經商品化和正在研發的豬流感疫苗包括豬流感減毒活疫苗、滅活疫苗、亞單位基因工程疫苗、基因重組活載體疫苗和核酸疫苗等。現就分別介紹，做一綜述。

一、減毒活疫苗

毒力減弱主要通過使流感病毒冷適應的手段，但處于其安全性的考量，各個國家至今仍沒有批準其臨床使用。此外，采用基因工程技術獲得NS-1流感病毒突變缺陷株也可有效減弱流感病毒毒力。Solorzano等以NS-1基因部分缺失的H3N2 SIV免疫豬后，具有對同源病毒的完全保護和非同源病毒的部分保護。目前，已有商品化人流感和馬流感減毒疫苗銷售，但至今并沒有商品化的豬流感減毒活疫苗銷售。

二、滅活疫苗

豬流感全病毒滅活疫苗的制備一般是用甲醛滅活禽流感病毒雞胚增殖的尿囊液， 并輔以佐劑制成的油乳劑疫苗， 制備工藝簡單，具有有安全性好、免疫原性強、免疫效果確實、免疫持續時間長等優點，能有效降低病毒感染后的復制和散播。目前， 該類疫苗在國外已實現商品化供應， 如Intervet公司的HINl亞型豬流感—豬肺炎支原體滅活疫苗和H1N1亞型一H3N2亞型豬流感滅活疫苗等。國內哈爾濱獸醫研究所、華南農業大學等單位也在豬流感油乳劑滅活疫苗研制方面做了大量工作，但同時也存在一些問題：SIV的變異速度較快，傳統疫苗的研制卻明顯滯后，交叉保護能力有限，對免疫耐受性動物及幼年或老年動物免疫效果不佳；經免豬只不僅產生針對于表面蛋白HA 和NA 的抗體， 而且還產生針對流感病毒內部蛋白M1和NP 的抗體，常規的血清學方法難以鑒別診斷自然感染和疫苗接種豬，不利于流感病毒的流行病學監測；會受到母源抗體的影響導致免疫失敗；處于生物安全方面的考慮，利用雞胚增殖病毒，在增加成本的同時，亦會對環境造成污染。

三、亞單位基因工程疫苗

亞單位基因工程疫苗是將HA基因連接到表達載體上，利用酵母表達系統或哺乳類動物細胞表達系統表達相應的蛋白，表達產物在純化后作為疫苗用于免疫。基因工程表達系統顯著提高了外源蛋白的表達水平，從而可以獲得大量的抗原蛋白。由于疫苗中只包含有流感病毒的表面蛋白，產生的抗體不針對病毒的內部蛋白，從而利于流感病毒的血清學調查和鑒別診斷。亞單位疫苗可以有效避免利用全病原體生產疫苗而導致的生物安全風險，安全性良好，但難以維持或恢復天然蛋白的空間結構，同時蛋白純化過程復雜、成本相對較高，而且只包含有病毒的部分蛋白，與傳統疫苗相比存在存在免疫原性低，使用劑量大，免疫水平差等缺點，因此這類疫苗的生產工藝還需進一步改進。

四、核酸疫苗

核酸疫苗亦稱DNA疫苗，可同時誘導細胞免疫和體液免疫產生長期保護效果， 且對不同血清型的毒株具有交叉保護性， 因而受到研究者青睞。它是利用重組DNA技術將SIV的HA基因克隆到真核表達載體中，并將其直接導人體內，使HA蛋白經過內源性表達遞呈給免疫系統，誘導機體產生特異性的體液免疫和細胞免疫反應。

DNA 疫苗具有容易操作、易于構建、穩定、安全的優點，且沒有毒力返祖和不同毒株間重組等風險。利用同一種載體，可以構建表達不同蛋白的核酸疫苗，具有用量少、免疫反應全面的優點，但是目前，核酸疫苗的研制和開發才剛剛起步，載體在動物體內表達效率不高，免疫效力低，降低了核酸疫苗的免疫效果。

豬對哺乳類動物流感病毒和禽流感病毒均易感，不同動物來源的流感病毒對豬群的感染，不僅直接增加了SIV亞型的種類，同時促使各種亞型SIV呈現出越來越復雜的遺傳多樣性。隨著時間的推移，由不同來源的基因組成的重排病毒在歷經自然選擇之后，必然會向著最有利于病毒生存和傳播的基因組合發展，而各種“新”流感病毒的出現和流行，常伴隨著病毒傳播性和致病性的改變。因此，可誘導豬體產生對不同抗原變異毒株或者不同亞型病毒有交叉保護的疫苗，無疑是豬流感疫苗研制的主流方向。對流感病毒感染后免疫學的研究表明，機體感染后，并不是體液中的抗體水平，而是黏膜免疫和細胞免疫水平與攻毒保護有著直接的關聯。有研究表明，病毒攻毒后，只在黏膜表面產生免疫記憶反應，而不是體液免疫。因此，能夠同時誘導機體產生黏膜免疫、細胞免疫和體液免疫反應的可復制性疫苗，如弱毒疫苗、活載體疫苗成為近年來豬流感疫苗的研究熱點。據美國新聞媒體報道，一個由美、英、法等多國科學家組成的國際研究團隊宣布，已經繪出了首個豬的基因組草圖，這項成就將提升豬繁殖、豬肉營養等方面的研究，也有助于豬流感疫苗等涉及人類健康技術的研發。

五、基因重組活載體疫苗

活載體疫苗克服了滅活疫苗和亞單位疫苗的不足，同時具有弱毒疫苗的一切優點。其是將病毒的保護性抗原基因重組到載體病毒中，接種機體后，隨著載體病毒的復制增殖，外源抗原基因將不斷表達，進而誘導機體產生特異性免疫應答反應。目前常用來制備流感病毒活載體疫苗的病毒有：痘病毒、皰疹病毒和逆轉錄病毒等。

近年來，國內也有大量SIV活載體疫苗的研究報告，相比而言，國外相關研究開展的較為成熟，Wesley R D等用人腺病毒5型作為載體表達豬流感病毒H3N2亞型的HA和NP研制的載體疫苗，可有效避免母源抗體的影響， 對仔豬有很好的保護作用。Epstein SL等用人腺病毒5型作為載體表達A型流感病毒的保守NP蛋白， 對小鼠進行疫苗接種， 表明疫苗可誘導機體產生高滴度抗體和大量細胞因子抵抗病毒攻擊，同時對H5N1 亞型流感病毒也有保護效力，為預防變異毒株提供了可行途徑。

活載體疫苗克服了滅活疫苗和亞單位疫苗的不足，利用的是體內表達系統合成免疫原，所表達的蛋白更加真實，同時因為病毒自身有復制能力，所以只需極少劑量的接種就可以產生足夠的外源蛋白。具有免疫用量小，接種方法簡便，生產工藝簡單，生產條件易于控制等特點。此外，它還具有無需添加佐劑，生產成本低，抗體產生迅速，免疫持續時間長以及免疫效果好等優點。重組活載體疫苗可以同時啟動體液免疫和細胞免疫反應，不會出現毒力返強，而且產生的保護性反應同時針對載體病毒和外源蛋白的來源病毒，所以可以達到一針預防多種疾病的目的。

略）