胚胎移植在德國(guó)美利奴青年羊應(yīng)用的初步研究

阿依努爾·亞森，董 紅，陳靜波，海力切木，霍 飛，鄭新寶

（新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆 烏魯木齊 830000）

胚胎移植在德國(guó)美利奴青年羊應(yīng)用的初步研究

阿依努爾·亞森，董 紅，陳靜波*，海力切木，霍 飛，鄭新寶

（新疆畜牧科學(xué)院畜牧研究所，新疆 烏魯木齊 830000）

為探索青年供體母羊提前擴(kuò)繁的利用效率，本研究選擇12只周歲齡德國(guó)美利奴母羊作為供體羊，分兩組注射不同劑量FSH進(jìn)行超排，兩組分別平均獲可用胚枚1.16枚和4.3枚，組間差異明顯（P＜0.01），總受胎率59.4%。該結(jié)果表明周歲齡德國(guó)美利奴羊?qū)Τ琶舾校捎糜谂咛ドa(chǎn)，建議實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)適當(dāng)提高FSH注射劑量。

德系美利奴青年羊；胚胎移植；

家畜超數(shù)排卵胚胎移植技術(shù)的廣泛應(yīng)用使優(yōu)質(zhì)純種家畜的快速擴(kuò)繁得以實(shí)現(xiàn)，給畜牧業(yè)帶來巨大效益。綿羊相對(duì)與牛繁殖年限要短的多，因此若能在性成熟初期即對(duì)其實(shí)施超數(shù)排卵胚胎移植將極大的提高優(yōu)質(zhì)母羊遺傳資源的利用效率。德國(guó)美利奴是肉毛兼用的優(yōu)質(zhì)綿羊品種，為滿足市場(chǎng)供應(yīng)，本研究選取周歲德國(guó)美利奴羊母羊，用不同劑量的FSH處理，進(jìn)行胚胎移植，取得的較為理想的效果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下，以期為生產(chǎn)實(shí)踐提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

從巴州種畜場(chǎng)45只周歲齡德國(guó)美利奴母羊中選擇12只發(fā)情正常的作為供體，平均體重34.75 kg,健康無疾病。配種公羊?yàn)榈聡?guó)美利奴成年公羊2只。受體羊?yàn)楸镜匕鸵舨剪斂送练N成年母羊，經(jīng)檢疫均為健康。供、受體飼養(yǎng)方式相同，均全年半放牧半舍飼的方式。

1.1.2 試驗(yàn)器材與藥品

孕酮陰道海綿栓；加拿大垂體促卵泡素(FSH)；促黃體素(寧波三生藥業(yè)有限公司)；氯前列烯醇(寧波三生藥業(yè)有限公司)；PMSG（寧波三生藥業(yè)有限公司）；靜松靈；利多卡因；黃體酮（寧波三生藥業(yè)有限公司）；沖卵液：自制。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 同期發(fā)情及超排處理

在試驗(yàn)羊發(fā)情周期的任意一天埋植陰道栓，9 d后撤栓，同時(shí)肌注250 IU的PMSG，12 h后公羊試情。12只供體羊分成兩組減量注射FSH，注射總劑量分別為14mL和16mL。第三天注射FSH時(shí)如發(fā)情注射LH（1mL）促排。

1.2.2 供體羊發(fā)情鑒定及配種

所有供體羊均于撤栓后12 h開始用性欲旺盛的試情公羊進(jìn)行早晚試情，每次試情時(shí)間不少于60 min，連續(xù)試情3 d。母羊開始發(fā)情時(shí)，興奮不安，試情羊跟隨、接受公羊爬跨，供體羊發(fā)情后注射LH同時(shí)立即用種公羊本交或結(jié)合進(jìn)行人工輸精，每10～12 h時(shí)輸一次，輸3～4次。

1.2.3 沖卵及移植

以發(fā)情開始的第一天記為0 d，所有供體均于發(fā)情后第6 d用手術(shù)法經(jīng)子宮角回收胚胎。為防止手術(shù)時(shí)腹壓過大而造成操作困難和生殖器官的損傷,于手術(shù)前24 h將供、受體單獨(dú)圈養(yǎng)，絕食。手術(shù)法沖胚。所回收的沖卵液要立即送入室溫在21℃～26℃的無菌室，鏡檢、計(jì)數(shù)及裝管，手術(shù)法移植。

1.2.4 妊娠檢查

檢查移植后20 d是否返情，40 d結(jié)合B超確定懷孕情況。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS13.0軟件，T檢驗(yàn)的方法分析。

2 結(jié) 果

本試驗(yàn)共回收胚胎41枚（包括透明帶），可用胚胎33枚，其中14mL組獲胚為9枚，可用數(shù)7枚；16 mL組獲胚35枚，可用胚胎數(shù)為26枚，差異極顯著（P＜0.01），總體移植受胎率59.4%，胚胎移植所產(chǎn)羔羊初生重4.07 kg（見表1）。

表1 FSH劑量對(duì)超數(shù)排卵效果的影響

以上數(shù)據(jù)表明：周歲齡德國(guó)美奴母羊?qū)Τ瑪?shù)排處理敏感，所產(chǎn)胚胎移植后妊娠率和成年羊相比無差異，可用于胚胎生產(chǎn)。但在選擇FSH用量時(shí)應(yīng)適當(dāng)提高注射劑量。

3 討 論

3.1 年齡對(duì)超排的影響

供體的年齡是影響超數(shù)排卵效果的一個(gè)重要方面。不同年齡的動(dòng)物對(duì)同種同劑量的激素反應(yīng)不同。動(dòng)物對(duì)超排的敏感性隨年齡的增長(zhǎng)而提高，但高齡動(dòng)物超排效果較差[1]。丁紅等[2]研究顯示，對(duì)2.5～4.5歲供體母羊沖卵時(shí)，可用胚數(shù)隨年齡增長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，而5.5歲供體羊的獲卵數(shù)、可用胚數(shù)均低于2.5、3.5、4.5歲年齡組的結(jié)果。洪瓊花等[3]用3/4劑量的FSH相同的超排方案對(duì)育成羊進(jìn)行超排，結(jié)果顯示，經(jīng)產(chǎn)羊平均回收胚胎數(shù)明顯高于育成羊(P＜0.01)，可用胚胎數(shù)育成羊和經(jīng)產(chǎn)羊間差異不顯著(P＞0.05)，但育成羊的可用胚率高于經(jīng)產(chǎn)羊，分別為86.01%和81.15%。林峰[4]研究表明經(jīng)產(chǎn)母羊排出的卵子質(zhì)量要好于育成母羊，但兩者的同期發(fā)情率、平均獲胚數(shù)及采卵平均數(shù)差異不顯著。趙霞等[5]認(rèn)為性成熟不久的供體羊，初次誘發(fā)排卵時(shí)適當(dāng)降低FSH劑量可與成年經(jīng)產(chǎn)母羊一樣有較好的超排效果。本研究結(jié)果顯示，周歲齡德國(guó)美利奴羊?qū)Τ琶舾校?6mL組平均生產(chǎn)胚胎5.8枚，其中可用胚4.3枚，妊娠率59.4%，均正常產(chǎn)羔，該結(jié)果較成年羊超排效果略差，表明周歲齡綿羊?qū)SH有一定敏感性，盡管其超排效果略差于成年綿羊，但其生胚胎質(zhì)量與成年羊相比無差異。提示12月齡德國(guó)美利奴綿羊可用于超排，建議在實(shí)際生產(chǎn)中提高FSH注射劑量。

3.2 影響青年羊發(fā)情因素

綿羊初次發(fā)情的時(shí)間受遺傳、環(huán)境、出生時(shí)間及營(yíng)養(yǎng)狀況的影響。美利奴綿羊通常情況下18～20個(gè)月齡第一次有發(fā)情表現(xiàn)，體重達(dá)到30～50 kg，占成年羊體重50%～70%[6]。春季出生的綿羊一般發(fā)情年齡要早于秋季出生的綿羊。營(yíng)養(yǎng)狀況影響通過改變體內(nèi)LH的分泌而影響發(fā)情。本次實(shí)驗(yàn)中對(duì)45只平均體重在34.75 kg 12月齡德國(guó)美利奴埋植海綿栓誘導(dǎo)發(fā)情，結(jié)果其中12只表現(xiàn)出了明顯發(fā)情行為，發(fā)情率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于同批次處理成年母羊。造成發(fā)情率低的可能原因是所選擇的大部分羊生殖器官尚未發(fā)育完全，身體條件不具備接受藥物誘導(dǎo)發(fā)情的條件，且實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)間在12月下旬，氣溫低，舍飼條件一般不利于綿羊發(fā)情。

此外，使用的配種公羊的膘情、體況及性欲等在胚胎移植中對(duì)結(jié)果也有很大影響。因此在超排前一段時(shí)間要對(duì)公羊進(jìn)行加強(qiáng)運(yùn)動(dòng)和補(bǔ)飼。本次試驗(yàn)中公羊沒有提前補(bǔ)飼和運(yùn)動(dòng)，在配種過程中因公羊性欲不好注射睪酮，但總體來說公羊性欲，精子活力和精子密度仍然不好，影響到了卵子的受精。

[1] 李建棟，柏學(xué)進(jìn)，吳鐵榮，等.淺析影響奶牛超排效果四項(xiàng)因素的研究[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問,1997，(03):7～9.

[2] 丁紅，瑪依拉，楊冬梅，等.促卵泡素和年齡對(duì)綿羊超數(shù)排卵效果的影響[J].中國(guó)畜牧雜志,1998，(03): 18～20.

[3] 洪瓊花，邵慶勇，馬興躍，等.山羊超數(shù)排卵與胚胎移植技術(shù)的研究與應(yīng)用[J]．生物技術(shù)通報(bào),2004，（4）：39～43.

[4] 林峰.濟(jì)寧青山羊超數(shù)排卵效果研究[J].遼寧畜牧獸醫(yī),2004,(10)：9～10.

[5] 趙霞.綿羊與波爾山羊胚胎移植技術(shù)及其影響的研究[D].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2001碩士論文.

[6] E.S.E.Hafez,Reproduction in farm animals,blackwell seventh edition，2008.

Prelim inary Study on Superovulation in Prim iparous Germany M erino Sheep

AYINUER,CHEN jing-bo*,DONG Hong,HAILIQIEMU,HUO Fei,ZHEN Xin-bao
（Xinjiang Academy of Animal Scinece,Urumqi830000，China）

In this study,12 yearling German Merino ewes were selected as embryo donors,randomly divided into two groups and treated with two different doses of FSH (14ml and 16ml respectively)for superovulation. The transferable embryos collected from the two groups were 9 and 26,respectively,and the difference was significant(P＜0.05).The overall conception rate was 59.4%.The results show that primiparous German Merino sheep are responsive to superovulation with FSH,and can be used for embryo donors;When primiparous sheep are used as embryo donors,it is recommended tomoderately increase the dose of FSH.

primiparous germanymerino sheep;superovulation and embryo transplantation

S814.8

A

1003-6377（2012）04-0034-03

2012-08-18

項(xiàng)目資助：“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國(guó)家科技計(jì)劃項(xiàng)目“西北地區(qū)優(yōu)質(zhì)肉牛肉羊快繁技術(shù)研究與應(yīng)用”（2011BAD19B02-2）

阿依努爾·亞森（1984-），女，維吾爾族，實(shí)習(xí)研究員，從事動(dòng)物繁殖與胚胎移植技術(shù)研究及推廣工作。

陳靜波（1956-），男，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：動(dòng)物遺傳育種與繁殖。