免疫金標試紙法與正向間接血凝試驗檢測豬口蹄疫免疫效果探討

李艷

中圖分類號：Ｓ８５２．５＋３文獻標識碼：B文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０12）09-0022-01

當前國內檢測豬口蹄疫抗體水平的方法有ＥＬＩＳＡ法、豬口蹄疫正向間接血凝法和免疫金標試紙法等。前兩種方法雖然都具有微量、特異、準確的優點，但需要比較完備的試驗儀器和經驗豐富的技術人員，且檢測時間較長。而免疫金標試紙檢測法是新開發的一種全新的豬口蹄疫抗體檢測方法，檢測一個樣品只需８～１５ｍｉｎ，操作簡便、快速、直觀，結果容易判定，但其檢測結果的準確性尚待驗證。鑒于此，為了選擇一種切合遠安縣動物疫病防控實際的檢測方法，我們采用兩種常用的檢測方法（免疫金標試紙檢測法和正向間接血凝試驗法）對遠安縣農村散養戶的２００份豬血清樣品進行了口蹄疫免疫效果對比檢測試驗，這對于本中心能夠及時準確掌握生豬口蹄疫免疫效果具有一定的指導意義。

１材料與方法

１．１材料

被檢樣品采自全縣７個鄉鎮的農村散養戶。２００份豬血清均為免疫口蹄疫疫苗后１８～２０ｄ所采的全血樣品，免疫疫苗均為中牧實業股份有限公司蘭州生物藥廠提供的豬口蹄疫滅活疫苗。

豬口蹄疫正向間接血凝抗原（包括稀釋液）購自深圳市康百得生物科技有限公司，試劑盒批號：２０１２０２１８；豬口蹄疫抗體免疫金標試紙條購自深圳市康百得生物科技有限公司，生產批號：２０１１０９０８；儀器：Ｖ型９６孔１１０度血凝板，臺式離心機，精密移液器（５～５０μL），微量振蕩器。

１．２方法

將２００份全血樣品放入離心機離心，５ｍｉｎ后吸取上層血清液，置于試管架上備用。向金標試紙檢測卡的橢圓形加樣孔內加入２～３滴（５０～１００μＬ）待檢豬血清，室溫下靜置８～１５ｍｉｎ判定結果。加樣后８～１５ｍｉｎ與金標試紙附帶的參照卡的色帶滴度進行對照比較，當被檢樣品檢測線（Ｔ）條帶的色澤大于或等于參照卡中１∶３２效價時，說明檢測樣品中豬口蹄疫抗體的滴度較高，如果低于１∶３２則表示被檢豬的口蹄疫抗體水平過低，應及時進行豬口蹄疫疫苗接種。正向間接血凝試驗操作程序如下：加稀釋液５０μＬ→加被檢血清５０μＬ→在血凝板上倍比稀釋被檢血清→加血凝抗原→振蕩搖勻→３７℃下靜置３０ｍｉｎ→結果判定。以５０％紅血球出現凝集的血清最大稀釋倍數為該血清的血凝效價。血凝效價達１∶３２為免疫合格，１∶３２以下為免疫不合格。

２結果與分析

由表１、表２可見，免疫金標試紙檢測豬口蹄疫抗體效價合格率為８２．５％，正向間接血凝試驗檢測其合格率為８１．０％。通過數據比較表明，免疫金標試紙檢測與豬口蹄疫正向間接血凝試驗的結果基本符合，試驗結果可靠。

３討論

（１）從上述檢測結果中可以看出，遠安縣農村散養戶中有一部分豬只免疫不合格，造成這種現象的原因可能與基層防疫員的技術水平、操作水平、疫苗用量及疫苗質量等有關；也可能是廣泛存在的豬繁殖與呼吸障礙綜合征、豬圓環病毒感染而破壞了豬的免疫系統，造成免疫抑制。

（２）從操作方法上看，免疫金標試紙檢測法操作簡便，更重要的是檢測時間短，能快速做出疾病診斷。而間接血凝試驗是通過紅血球凝集程度來判斷結果的，操作者的判斷能力不一樣，就很有可能出現不同的結果，即便同一操作者每次的試驗判斷結果都可能有一定的偏差。

（３）從經濟成本上看，免疫金標試紙檢測也能體現出一定的優勢，既能批量檢測，也能單獨進行檢測，且不造成浪費。而間接血凝試驗所需抗原一經開啟就必須一次用完，在檢測量較小的情況下就會造成很大的浪費。

４結論

綜上所述，豬口蹄疫抗體免疫金標試紙檢測法具有操作簡便、結果直觀、反應時間短等優勢，非常符合遠安縣的實際工作需要，鄉鎮畜牧獸醫服務中心及養殖場均可推廣應用，對提高遠安縣應對重大動物疫病時的應急反應能力將起到舉足輕重的作用。