GAL4/UAS系統在果蠅Tisll基因RNA干擾中的應用

劉勇　張梅超　韋有恒　馬維駿

生物體癌癥發生、免疫反應與生長發育中，許多關鍵基因的mRNA具有不穩定性，這些基因的表達除了受到轉錄和翻譯水平的調控外，更多的受到轉錄后水平的調控，在哺乳動物基因的轉錄后調控中起重要作用的是一種被稱為Triste－traprolin(TTP)的蛋白，它具有兩個保守的CCCH鋅指結構，通過該結構TTP蛋白能夠結合到靶基因mRNA的富含AU的元件(AU rich element，ARE)并介導它們的快速降解，Tisll是TTP在果蠅中的同源物，在果蠅細胞中Tisll蛋白參與調節mRNA的穩定性，果蠅的系統簡單、遺傳背景清楚、易于飼養和操作，是研究Tisll功能的良好模式生物，研究基因功能的經典方法是觀察檢測該基因缺失或者表達降低后引起的生理生化反應，但是目前還沒有現成的Tisll基因缺失的果蠅，因此，獲得Tisll基因缺失的果蠅尤為重要，通常利用P因子的不精確剪切制備基因敲除的果蠅，但是此方法具有周期長、工作量較大、基因敲除的特異性不強、基因敲除的效應不可調節等不利因素，而利用GAL4／UAS系統能夠快速、方便地獲得可調控的RNA干擾果蠅，GALA／UAS系統是一種二元轉基因系統，在這個系統中組成型或者調節型啟動子驅動表達的GAL4蛋白能夠特異結合到UAS序列上，激活UAS下游外源序列的表達，這類系統的最大優點是能夠構建大的轉基因庫，研究者能夠根據各自的研究目的，從UAS庫中選取合適的針對靶基因的品系與符合研究要求的GAL4品系雜交，方便地獲得所需的轉基因果蠅，囚此，我們從庫中選擇含Tisll干擾序列的UAS品系，將其分別與肌動蛋白啟動子驅動或熱激蛋白啟動子驅動的GALA品系雜交來獲得Tisll基因干擾的果蠅。