GAL4/UAS系統(tǒng)在果蠅Tisll基因RNA干擾中的應(yīng)用

劉勇　張梅超　韋有恒　馬維駿

生物體癌癥發(fā)生、免疫反應(yīng)與生長發(fā)育中，許多關(guān)鍵基因的mRNA具有不穩(wěn)定性，這些基因的表達(dá)除了受到轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的調(diào)控外，更多的受到轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控，在哺乳動物基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中起重要作用的是一種被稱為Triste－traprolin(TTP)的蛋白，它具有兩個保守的CCCH鋅指結(jié)構(gòu)，通過該結(jié)構(gòu)TTP蛋白能夠結(jié)合到靶基因mRNA的富含AU的元件(AU rich element，ARE)并介導(dǎo)它們的快速降解，Tisll是TTP在果蠅中的同源物，在果蠅細(xì)胞中Tisll蛋白參與調(diào)節(jié)mRNA的穩(wěn)定性，果蠅的系統(tǒng)簡單、遺傳背景清楚、易于飼養(yǎng)和操作，是研究Tisll功能的良好模式生物，研究基因功能的經(jīng)典方法是觀察檢測該基因缺失或者表達(dá)降低后引起的生理生化反應(yīng)，但是目前還沒有現(xiàn)成的Tisll基因缺失的果蠅，因此，獲得Tisll基因缺失的果蠅尤為重要，通常利用P因子的不精確剪切制備基因敲除的果蠅，但是此方法具有周期長、工作量較大、基因敲除的特異性不強、基因敲除的效應(yīng)不可調(diào)節(jié)等不利因素，而利用GAL4／UAS系統(tǒng)能夠快速、方便地獲得可調(diào)控的RNA干擾果蠅，GALA／UAS系統(tǒng)是一種二元轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)，在這個系統(tǒng)中組成型或者調(diào)節(jié)型啟動子驅(qū)動表達(dá)的GAL4蛋白能夠特異結(jié)合到UAS序列上，激活UAS下游外源序列的表達(dá)，這類系統(tǒng)的最大優(yōu)點是能夠構(gòu)建大的轉(zhuǎn)基因庫，研究者能夠根據(jù)各自的研究目的，從UAS庫中選取合適的針對靶基因的品系與符合研究要求的GAL4品系雜交，方便地獲得所需的轉(zhuǎn)基因果蠅，囚此，我們從庫中選擇含Tisll干擾序列的UAS品系，將其分別與肌動蛋白啟動子驅(qū)動或熱激蛋白啟動子驅(qū)動的GALA品系雜交來獲得Tisll基因干擾的果蠅。