金黃色葡萄球菌甲氧西林耐藥輔助基因femB的克隆和原核表達(dá)

鄒明祥　武文君　李軍　鄔國軍　張寧潔　劉文恩　范學(xué)工

摘要：金黃色葡萄球菌femB基因與甲氧西林高水平耐藥密切相關(guān)，可能成為開發(fā)抗MRSA藥物的新靶位以金葡菌基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增femB全長基因，所得片段與pGM-T載體連接并轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH5a，陽性克隆以PCR、雙酶切及測序鑒定，將鑒定正確的目的片段定向克隆到pGEX-4T-1表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)GST／FemB融合蛋白；采用SDS-PAGE及Westrn blot對融合蛋白進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示，重組質(zhì)粒在宿主菌中獲得了高效表達(dá)，融合蛋白相對分子質(zhì)量為75 kD，該融合蛋白可與抗GST－tag抗體特異結(jié)合；表明femB基因的原核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功，為進(jìn)一步研究其生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。