高效液相色譜在糕點添加劑測定中的應用

陳曉珍

(廣州市質量監督檢測研究院 國家加工食品質量監督檢驗中心，廣東 廣州 510110）

隨著食品種類的增多和食品添加劑的大量使用,食品檢驗的分析任務越來越大。大多數糕點因貨架期較短，而容易腐敗、發霉。苯甲酸、山梨酸等防腐劑由于價格低廉防腐效果好，常作為食品添加劑用于糕點等食品的防腐。富馬酸二甲酯（Dimethyl Fumarate，DMF）作為美國20世紀80年代開發出來的一種防霉劑，由于其能抑制多種霉菌、酵母菌及細菌的生長和繁殖，近年來作為防腐劑在食品及飼料工業上得到廣泛的應用。安賽蜜（乙酰磺胺酸鉀）和糖精鈉作為人工合成甜味劑也是糕點中常用的食品添加劑。由于上述添加劑都對人體健康有不同程度的危害，國家對這些食品添加劑的使用量有嚴格的規定，為保證食品質量安全，建立快速有效的檢測方法具有重要的意義。

1.色譜條件的選擇和優化

(1)檢測波長的選擇

將5種物質標準混合溶液進行色譜分離并用二極管陣列檢測器在波長190nm～350nm范圍內進行紫外掃描。結果表明5種物質的紫外吸收波長分別為：安賽蜜226nm，糖精鈉218nm，苯甲酸216nm，富馬酸二甲酯218nm，而山梨酸在252nm和212nm2個波長下具有吸收峰。實驗選用波長220nm作為糖精鈉、苯甲酸、富馬酸二甲酯的檢測波長，230nm作為安賽蜜和山梨酸的檢測波長。

(2)流動相的選擇

試驗分別用乙腈-水、甲醇-水、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-硫酸銨水溶液和甲醇-硫酸銨水溶液作為流動相作等度洗脫，均不能將5種物質完全分離；用甲醇-硫酸鈉水溶液能將目標物質分離，但是富馬酸二甲酯的色譜峰拖尾嚴重。通過篩選驗證，最后采用甲醇和含2.84g/L硫酸鈉+2.60g/L溴化四丁基銨的水溶液（用冰乙酸調節pH至6）為流動相，5種被測組分可以很好的分離，這可能是由于在流動相中加入了帶正電荷的四丁基溴化銨，可以促進帶有弱負電的富馬酸二甲酯分離，改善出峰效果。

2.樣品前處理優化

(1)分散基質的選擇

糕點中常常含大量的油脂和蛋白，利用傳統的溶劑和超聲波輔助提取時會由于蛋白質變形后與油脂一起作用，將目標物質包裹起來，無法有效分散樣品，影響提取效果，回收率較低，且油脂的存在不但會形成干擾、影響結果的準確性，而且還會污染色譜柱，損害儀器的性能。實驗采用改良的基質固相分散技術，分別考察了無水硫酸鈉、中性氧化鋁、無水硫酸鎂作為樣品分散基質對糕點中5種食品添加劑測定的影響。結果表明，用中性氧化鋁作為分散基質不但提取效果好，回收率高，且由于氧化鋁對油脂和蛋白質的吸附作用，樣品中雜質凈化完全，干擾較少，有利于目標物質的定性和定量。

(2)提取溶劑的選擇

分別考察了水、甲醇、乙腈、甲醇-水作為提取溶劑對樣品回收率的影響。當用純水作提取溶劑時，糖精鈉和安賽蜜的提取效果最好，平均回收率接近100%，富馬酸二甲酯由于極性較弱，用水提取效果較差。如果用甲醇和乙腈作為提取溶劑，則富馬酸二甲酯的回收率高，苯甲酸和山梨酸的提取效果比較差。最后選擇甲醇-水作為提取液，并研究其體積比與pH對5種物質提取效果的影響。結果表明當甲醇和水體積比為為7:3，pH為7.5時，5種物質的回收率均可達90%以上。

3.方法的線性范圍、檢出限和定量限

以質量濃度-峰面積作校正曲線，得到線性回歸方程，5種食品添加劑在 1μg/mL～200.00μg/mL范圍內線性關系良好，相關系數均大于0.9995，線性方程見表1。

表1 5種食品添加劑的標準曲線、檢測限(LOD)和定量限(LOQ)

以3倍信噪比為檢出限（LOD），計算得出5種食品添加劑的檢出限分別為0.016mg/kg～0.039mg/kg。以10倍信噪比為定量限(LOQ)，計算出5種食品添加劑的定量限分別為 0.050mg/kg～0.120mg/kg。

4.方法的回收率和精密度

采用在空白樣品中添加標準溶液的方法，對常見的4種糕點：月餅、蛋糕、面包和餅干進行不同濃度的加標回收實驗，每個品種4次重復結果見表2。

由表2可見，5種食品添加劑在添加濃度為20.0mg/kg～120.0mg/kg范圍內平均回收率為89.5%～101.6%，相對標準偏差為0.98%～3.07%，完全滿足食品添加劑分析的要求。

表2 5種食品添加劑樣品加標回收率和RSD（n＝4）

結束語

高效液相色譜法簡便、快速、定量準確、回收率高且精密度好,可以用于含脂糕點中3種防腐劑：苯甲酸、山梨酸和富馬酸二甲酯，2種甜味劑：安賽蜜、糖精鈉的同時測定。樣品運用固相分散萃取技術進行提取凈化，以中性氧化鋁為分散劑以提高回收率并除去樣品中的脂肪等雜質，所得的色譜圖干擾少，峰形尖銳對稱，5種食品添加劑在 1μg/mL～200.00μg/mL范圍內線關系良好。

[1]王春榮.張濟.劉嵐錚；食品中多種合成色素的反相高效液相色譜法測[J].中國公共衛生，2005.03.