喉鱗癌組織中PTTG1表達變化及意義

(承德醫學院附屬醫院，河北承德067000)

垂體腫瘤轉化基因(PTTG1)是從垂體瘤組織中分離出的原癌基因，研究證明其高表達在促進細胞增殖轉化以及體內腫瘤形成方面具有重要作用。2010年5月～2011年12月，我們觀察了喉鱗癌組織中的PTTG1蛋白及其mRNA的表達變化，并探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源 喉鱗癌組織以及癌旁組織(距離腫瘤切緣至少＞0.5 cm)取自手術治療的62例原發喉鱗癌患者，術前均未接受放、化療。標本獲得后分為2份，一份立即凍存于－80℃液氮中，另一份標本經10%甲醛固定、石蠟包埋、4μm厚度連續切片。所有標本均經過病理學檢查確診。

1.2 方法

1.2.1 PTTG1蛋白檢測方法 取石蠟切片，采用免疫組化SP法檢測，按說明書操作。以PBS代替一抗作為陽性對照，以已知喉癌陽性組織切片為陽性對照。PTTG1陽性細胞為細胞質出現棕黃色顆粒。在染色均勻的腫瘤區域選取5個高倍鏡視野(×200)，計算陽性細胞百分率＜25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分;不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。二者得分相加＞1分判為陽性表達。

1.2.2 PTTG1 mRNA檢測方法 采用RT-PCR法，按說明書操作。Trizol法抽提總RNA，氯仿及異丙醇純化，加無 Rnase水20μL溶解，測 OD值定總RNA量。將反應產物在1%瓊脂糖凝膠上電泳，經EB染色后，在紫外熒光數字成像儀下照像，并進行光密度半定量分析。以每例PTTG1與相應β-actin擴增產物條帶累積光密度(IOD)的比值作為PTTG1 mRNA的相對表達量。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。數據比較用χ2檢驗、t檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 喉鱗癌及其癌旁組織中PTTG1蛋白及mRNA表達情況 在62例喉鱗癌組織中，PTTG1蛋白陽性表達率及其mRNA表達量分別為67.74%、0.74±0.134，顯著高于癌旁組織中的 23.08%、0.47 ±0.10(P 均 ＜0.01)。

2.2 PTTG1蛋白表達與喉鱗癌臨床病理參數的關系 PTTG1蛋白表達與喉鱗癌的淋巴結轉移、臨床分期、分化程度有關(均P＜0.05)，與喉鱗癌的腫瘤大小、臨床分型、年齡及性別無關(均P＞0.05)。見表1。

3 討論

PTTG作為一種新近發現的原癌基因，在大多數正常組織中表現為弱表達甚至不表達，在多種惡性腫瘤細胞［1～6］中高表達。其高表達可促進腫瘤細胞的增殖、分化，在腫瘤發生中發揮了重要作用。PTTG(hPTTG)家族包括 PTTG1、PTTG2和 PTTG3。已有研究發現，PTTG2和PTTG3在細胞增殖活性高的正常組織中有表達，但在腫瘤中主要為PTTG1表達。PTTG1基因位于5q33，含5個外顯子和4個內含子［7］。其DNA序列由787 bp組成，含有609 bp的完整閱讀框架，編碼一個含有202個氨基酸殘基，相對分子質量約為22 kD。PTTG1蛋白在多種腫瘤細胞和腫瘤細胞系中高度表達，與大多數腫瘤的發生密切相關。其促進腫瘤發生的機制可能有:①PTTG1通過激活轉染細胞中的C-myc原癌基因，從而發揮轉錄因子的作用［8］;②PTTG1在腫瘤組織中的高表達，可促進堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)轉錄和分泌，導致細胞轉化，從而促進腫瘤中出現有絲分裂，調控血管生成及激素分泌;③PTTG基因調控區的突變引起PTTG1調控失常，從而導致其高表達，引起腫瘤細胞轉化;④PTTG1通過反式激活作用激活原癌基因、生長因子等，間接致癌［9］;⑤PTTG1蛋白抑制姊妹染色體單體分離，破壞細胞分裂導致染色體不穩定，非整倍體形成，并賦予其成瘤活性，進一步發展成為腫瘤［10］。因其表達具有腫瘤特異性，因此被認為是一種極具潛在價值的腫瘤標志，有可能成為腫瘤治療的靶點。

表1 PTTG1蛋白表達與喉鱗癌臨床病理參數的關系

腫瘤的發生取決于腫瘤細胞凋亡和增長的動態平衡是否被破壞，細胞的過度增殖、異常分化和正常凋亡減少在惡性腫瘤的發生發展中具有重要意義。而喉癌的起源目前認為是多因素相互作用的結果，近幾年發現和明確了由于原癌基因調控引起細胞凋亡和細胞增殖異常，是喉癌發生的重要機制之一。原癌基因PTTG的高表達在促進腫瘤細胞增殖、分化中有重要作用，PTTG作為一種原癌基因，已有研究提示其過度表達可能引起細胞周期調控紊亂致細胞增殖異常及細胞凋亡異常。本研究結果顯示，喉鱗癌組織中PTTG1蛋白及其mRNA高表達，且與腫瘤的臨分期、分化程度及淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。因此，PTTG1對喉癌發生收展具有一定作用，但具體機制還需進一步研究。

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