單增李斯特菌多克隆抗體制備及其在乳膠凝集試驗(yàn)中的應(yīng)用

鞠 文，宋秀玲，原 野，張士堯，方 珍，徐 坤，李 娟，孟日增，3

（1.吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生檢驗(yàn)教研室，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.吉林大學(xué)軍需科技學(xué)院食品質(zhì)量與安全教研室，吉林 長(zhǎng)春 130012；3.吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，吉林 長(zhǎng)春 130062）

單增李斯特菌多克隆抗體制備及其在乳膠凝集試驗(yàn)中的應(yīng)用

鞠 文1，宋秀玲1，原 野1，張士堯1，方 珍2，徐 坤1，李 娟1，孟日增1，3

（1.吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生檢驗(yàn)教研室，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.吉林大學(xué)軍需科技學(xué)院食品質(zhì)量與安全教研室，吉林 長(zhǎng)春 130012；3.吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，吉林 長(zhǎng)春 130062）

目的：制備高效價(jià)高純度兔抗單增李斯特菌（LM）多克隆抗體，并初步探討其在乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）中的應(yīng)用。方法：復(fù)蘇并擴(kuò)大培養(yǎng)LM標(biāo)準(zhǔn)菌株，制備滅活疫苗免疫家兔，采用ELISA法測(cè)定耳緣靜脈血抗體效價(jià)。4次免疫后，頸動(dòng)脈采血分離血清，采用辛酸－飽和硫酸銨法粗分離，經(jīng)蛋白親和層析柱HiTrap Protein G HP進(jìn)行IgG純化，采用SDS－PAGE電泳、紫外分光光度法、間接ELISA法分別測(cè)定蛋白純度、蛋白含量及抗體效價(jià)。得到的高效價(jià)提純IgG與乳膠微球進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)，并選擇偶聯(lián)乳膠的IgG含量及偶聯(lián)時(shí)間等條件，建立快速檢測(cè)模擬樣品中LM的方法。結(jié)果：制備并純化的兔抗LM IgG蛋白濃度為23.364g·L－1，效價(jià)為1∶12 800～1∶25 600，與霍亂弧菌、沙門(mén)氏菌、志賀菌等多種菌均無(wú)交叉反應(yīng)，與斯氏李斯特菌有弱交叉反應(yīng)；致敏時(shí)IgG與乳膠微球偶聯(lián)比率為1∶40；利用LAT方法檢測(cè)246份樣品，陽(yáng)性檢出率為87.5%，最低檢出抗原含量為0.039 8g·L－1。結(jié)論：制備了高效價(jià)、高純度的兔抗LM多克隆抗體；……