江蘇某規模化豬場回腸炎感染狀態監測與防控建議

曲向陽

（1.美國禮來亞洲公司上海代表處，上海 200021；2.南京農業大學動物醫學院，江蘇 南京 210095）

豬回腸炎又名增生性腸炎、增生性出血性腸炎,是由胞內勞森氏菌(Lawsonia intracellularis)感染所致的以回腸、盲腸、結腸黏膜呈腺瘤樣增生為主要特征的一種重要豬腸道疾病。該病易感染生長育肥豬、后備母豬，嚴重影響豬只飼料效率與生長速度，對養豬業的經濟效益影響嚴重[1]。據Jensen報道，在美國每頭回腸炎感染豬的經濟損失至少1.531美元[2]。

依據臨床癥狀差異，本病可分為急性型、慢性型與亞臨床型。急性型多發于后備母豬及17周齡以上的育肥豬，健康豬群似乎更易感染急性型回腸炎[3]。常表現為出血性下痢（圖1），甚至突然死亡。慢性型與亞臨床型回腸、盲腸與結腸增厚（圖3），糞便無成型（圖4），但無典型臨床癥狀，2周齡～20周齡的豬只均易感染[4]，無法依據臨床癥狀進行診斷。

本試驗采用LawsoniaFIRSTtestTM回腸炎診斷試劑盒對該豬場糞便樣品中的胞內勞森氏菌進行了檢測，以期了解回腸炎的感染狀態與感染時間點，為該病的精準化策略性用藥預防或疫苗免疫提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2011年12月，在江蘇省某規模化豬場隨機采集特定周齡的新鮮松軟或水泥樣的糞便樣品，各3 g。樣品主要來自于4、6、8、10、12、14周齡的保育豬、后備母豬與經產母豬，每階段作2～3份重復，采樣后立即檢測。

1.2 檢測試劑

圖1 后備母豬急性出血性下痢

圖2 回腸、盲腸等部位出血

圖3 慢性回腸炎，腸黏膜增厚，呈腦回狀

圖4 慢性回腸炎導致糞便松軟

本檢測采用德國Microcoat公司開發的LawsoniaFIRSTtestTM回腸炎現場診斷試劑盒（免疫磁珠法，美國禮來公司擁有專利權）。其原理與雙抗體夾心ELISA類似。以包被在磁珠上的多克隆抗體捕捉糞便中的胞內勞森氏菌，然后通過連接在多克隆抗體上的過氧化物酶（POD）催化TMB顯色，通過顏色變化，對胞內勞森氏菌的感染狀態進行定性檢測。通過對比顏色變化，對胞內勞森氏菌的感染狀態進行半定量檢測。（圖5）。

圖5 FIRSTtestTM 試劑盒作用原理圖

1.3 檢測方法

依照FIRSTtestTM試劑盒說明書進行檢測。①樣品稀釋與 沉淀：將1 g糞便樣品與5 mL樣品稀釋緩沖液在樣品收集管中混合，搖勻后，放在試管架上靜置5 min；②樣品轉移：分別使用不同的移液管吸取0.5 mL的上清液至分析管（管內含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠）中，設立陽性對照組（陽性對照為0.5 mL勞森氏菌菌液），搖勻后，將分析管放在試管架上孵育30 min；③磁珠分離與洗滌：將分析管轉移至磁體架上進行磁頭分離，然后洗滌2次；④加入抗體－過氧化物酶共軛物：分別向分析管中加入0.5 mL的抗體－過氧化物酶共軛物，搖勻后，將分析管放置在試管架上孵育20 min；⑤磁珠分離與洗滌：同步驟③；⑥加入TMB顯色：分別向分析管中加入0.5 mL的TMB底物顯色液，并設立陰性對照（陰性對照管內含有勞森氏菌多克隆抗體包被的免疫磁珠），搖勻后，孵育7 min；⑦結果判讀：將分析管放置在磁鐵架上，記錄顏色變化，陽性呈藍色，陰性液體透明。

2 檢測結果

FIRSTtestTM是一種定性檢測勞森氏菌的方法，通過待檢樣品與陽性對照、陰性對照間的顏色對比（圖6），將回腸炎在該場的感染狀況匯總于表1。從檢測結果可發現：4周齡與6周齡各有1份樣品（33%）呈陽性，8周齡的樣品胞內勞森氏菌檢測呈陰性，而自10周齡保育仔豬起至14周齡的生長豬及母豬的胞內勞森氏菌檢測均呈陽性，特別是14周齡與母豬樣品呈強陽性。

3 分析與討論

目前回腸炎的主要診斷方法包括利用PCR、免疫過氧化酶法檢測糞便樣品中的勞森氏菌或采用ELISA、IFA等檢測胞內勞森菌抗體[5]。本檢測采用的FIRSTtestTM檢測可在豬場現場快速檢測糞便中是否含有感染劑量的勞森氏菌，適用于規模化豬場回腸炎感染狀態與防控效果的自我評估。

回腸炎多發生于生長育肥階段，但各場間感染時間存在差異[6]，所檢樣品來自于4周齡～14周齡的保育豬、生長豬、后備母豬及經產母豬。本次檢測時未刻意挑選有頑固性腹瀉的糞便進行檢測。但豬群從第10周開始感染，說明該場回腸炎處于亞臨床感染狀態。

圖6 該豬場不同周齡豬糞樣中胞內勞森氏菌的檢測結果

表1 胞內勞森氏菌感染分布狀況

由于該場母豬已感染胞內勞森氏菌（強陽性），母豬通過主動免疫自身可產生抗勞森氏菌的抗體，并通過母乳傳遞給仔豬，使仔豬特別是哺乳仔豬獲得被動免疫，抑制了胞內勞森氏菌在哺乳仔豬腸上皮細胞內的大量增殖。哺乳仔豬于3周齡斷奶，4周齡的糞便樣品胞內勞森氏菌66.7%呈陰性。但斷奶后(3周齡后)，失去了母源抗體的保護。據Guedes等人[7]發現抗體陽性的母豬所產仔豬的母源抗體可持續至5周齡，可保護哺乳仔豬與保育前期豬免受勞森氏菌感染。隨著母源抗體的消退，加之保育轉群應激、環境溫度變化與衛生消毒等生物安全措施不到位等，豬只自身抗病能力下降，促進了胞內勞森氏菌的繁殖，并通過糞便相互傳染，特別是衛生消毒工作不徹底時，往往造成全群帶菌。故該場自4周齡與6周齡開始部分豬只（33%）被感染并排菌。10周以后的豬及母豬勞森氏菌的感染率高達100%。14周齡保育豬與母豬的糞便樣品顏色最深（超過陽性對照的顏色），即說明14周齡以后的糞便中的胞內勞森氏菌濃度最高，豬只感染壓力大。母豬群回腸炎感染壓力大，是回腸炎重要的傳染源。

該場保育階段使用過強力霉素，使得8周齡的仔豬樣品完全呈陰性，此時體內沒有足夠量的抗原使機體形成主動免疫，故不能徹底地阻斷胞內勞森氏菌在該場的傳播。10周齡時，胞內勞森氏菌再次感染，并在14周齡時達到高峰，將嚴重影響飼料的轉化率、豬只生長速度與經濟效益。

4 防控建議

4.1 強化科學良好的飼養管理與衛生消毒工作

1)盡量降低轉群并欄時的應激，減少不良環境因素的影響，如：加強通風，避免豬舍內溫度的波動，合理的飼養密度以提供足夠的飼喂空間與飲水供給。

2)在飼養管理上，實行全進全出，批次管理，加強清潔與消毒工作，特別是轉群后批次間的棟舍的清掃，消毒與干燥等工作。

3)加強生物安全防范。特別應避免因鳥類、工作人員及鼠類傳播病原菌。在引進新的后備母豬或公豬時，應做好隔離適應工作，在確認沒有回腸炎感染時或完成適宜的藥物干預后，尚可混群。

4.2 選擇適宜的藥物與策略性給藥方案

胞內勞森氏菌屬于專一性的細胞內病原菌，在藥物防控方面應注意以下3點：第一，敏感藥物及其藥動學。所選藥物應在腸道上皮細胞內有較高藥物濃度[8],如泰樂菌素、替米考星、泰妙菌素等。第二，用藥周期。用藥周期應在14 d以上，最好可達到21 d；第三，用藥時間。在胞內勞森氏菌感染高峰期到達之前給藥可取得良好效果。若給藥時間“太早”，豬群就無法產生針對胞內勞森氏菌的主動免疫，潛在暴發急性出血性回腸炎的風險。

泰樂菌素在控制回腸炎感染時，既抑制了胞內勞森氏菌在腸壁的大量繁殖，又不影響動物機體針對胞內勞森氏菌形成主動免疫，停藥后能依賴機體的主動免疫進行自我保護，因此泰樂菌素目前是全球控制回腸炎的首選藥物。結合本次檢測結果，對回腸炎的策略性投藥作如下推薦：

方案一，生長育肥期:為了降低生長豬回腸炎的感染壓力，建議在10周齡～12周齡使用磷酸泰樂菌素110 mg/kg拌料，連續3周，以后每月用一周，110 mg/kg拌料，直到上市前5 d。

方案二，分娩母豬群：為了降低環境中的勞森氏菌的感染壓力及阻斷勞森氏菌由母豬傳遞給仔豬，建議在產前1周至產后2周使用磷酸泰樂菌素（110 mg/kg拌料）。

方案三，后備母豬：為防止后備母豬引種時引入胞內勞森氏菌，后備母豬混群后造成母豬群呈持續性高感染壓力狀態，建議在后備母豬群轉入到基礎母豬群前，利用磷酸泰樂菌素（110 mg/kg拌料）連續3周。使母豬群更健康，在降低回腸炎感染的同時，也可防控支原體，萎縮性鼻炎等呼吸系統疾病。

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[2] Jensen M.Health management with reduced antibiotic use-experiences of a Danish pig vet[J]. Anim Biotechnol,2006,17:189-194.

[3] Winkelman N L, Dee S.Ileitis:an update[C].Comp Contin Educ,1996,18:S19-S25.

[4] Jensen T K, et al. Naturally acquired Lawsonia intracellularis infection in pigs studied from weaning to slaughter by indirect immunofluorescence antibody test and polymerase chain reaction on faeces[J]. Res Vet Sci, 2005,79:93-98.

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[7] Guedes R M C, Gebhart C J,Armbruster G A, et al. Serologic follow-up of a repopulated swine herd after an outbreak of proliferative hemorrhagic enteropathy[J].J Vet Res,2002,66 (4):258-263.

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