精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚的溶出度測定

屈 蓉（泰州市食品藥品檢驗所，江蘇泰州 225300）

精制銀翹解毒片收載于《衛生部藥品標準（中藥成方制劑）》第三冊[1]，是由對乙酰氨基酚、桔梗、連翹、淡豆豉、甘草、淡竹葉、金銀花、牛蒡子、荊芥穗、薄荷腦等組成的中西復方制劑，具有清熱散風、解表退熱的功效。用于治療流行性感冒、發冷發熱、四肢酸懶、頭痛咳嗽、咽喉腫痛。對乙酰氨基酚為其主要成分之一，標準中仍以崩解時限作為該藥的檢查項之一，而崩解時限合格并不說明生物利用度合格。為了穩定和提高產品質量，確保藥效的充分發揮，本文建立了該品種中對乙酰氨基酚含量的高效液相色譜（HPLC）測定方法，并參照日本“藥品品質再評價”工程在溶出度研究中所擬定的模擬人體消化道內體液的4中基本介質[2]，采用漿法，轉速為75 r·min-1，測定國內3個廠家不同包衣片劑的體外溶出度，以為改進其生產工藝，評價其內在質量提供方法和參考依據。

1 儀器與試藥

RC-3B藥物溶出儀（天津市天大天發科技有限公司）；1260 HPLC儀（美國安捷倫科技有限公司）；AG135電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；pHS-25型酸度計（北京華瑞博遠科技發展有限公司）；對乙酰氨基酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100018-200408）；精制銀翹解毒片（A廠：糖衣片，批號：20100101；B廠：糖衣片，批號：10215001；C廠：薄膜衣片，批號：091101）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對乙酰氨基酚含量測定方法建立

2.1.1 色譜條件與系統適用性試驗色譜柱：島津C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（20∶80）；檢測波長：249 nm；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。對乙酰氨基酚的保留時間為6.788 min，陰性對照在對乙酰氨基酚色譜峰相應的保留時間處無吸收峰。理論板數按對乙酰氨基酚色譜峰計算應為6 500。色譜見圖1。

2.1.2 溶出介質的制備[2]溶出介質Ⅰ（pH 1.2人工胃液）：取氯化鈉2.0 g，加水適量使溶解，加鹽酸7 mL，再加水稀釋至1 000 mL，即得；溶出介質Ⅱ（pH 4.0醋酸鹽緩沖液）：0.05 mol·L-1醋酸-0.05 mol·L-1醋酸鈉（16.4∶3.6）；溶出介質Ⅲ（pH 6.8磷酸鹽緩沖液）：取磷酸二氫鉀3.4 g和無水磷酸氫二鈉3.55 g，加水適量使溶解，定容至1 000 mL，再用水稀釋1倍，即得；溶出介質Ⅳ（水）：純化水。

2.1.3 標準曲線的制備 取對乙酰氨基酚對照品約25 mg，精密稱定，置200 mL量瓶中，分別用上述4種介質溶解后定容，作為貯備液。分別精密量取各貯備液0.1、0.5、2.5、10、25、50、75、100 mL，置100 mL量瓶中，加各溶出介質稀釋至刻度，配成濃度約為0.125、0.625、3.125、12.500、31.250、62.500、93.750、125.000 μg·mL-1的系列溶液，按上述色譜條件分別進樣測定。以不同溶出介質中乙酰氨基酚檢測濃度（c）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標，制備標準曲線，得對乙酰氨基酚在溶出介質Ⅰ～Ⅳ中的回歸方程分別為A＝36.465c－0.196 5（r＝0.999 9）、A＝36.282c+2.132 4（r＝0.999 9）、A＝35.940c－3.384 3（r＝0.999 9）、A＝36.419c+3.427 3（r＝0.999 9）。結果表明，對乙酰氨基酚檢測濃度在0.125～125.000 μg·mL-1范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.1.4 供試品溶液的制備 取供試品10片，除去包衣，研細，取約1/3片重量，精密稱定，置200 mL量瓶中，加各溶出介質適量，超聲（功率：200 W，頻率：53 kHz）處理20 min，放冷，用相應的溶出介質定容，取干燥濾紙迅速過濾，棄去初濾液，取續濾液，即得。

2.1.5 精密度試驗 取“2.1.3”項下各溶出介質中濃度為93.750 μg·mL-1的對照品溶液，分別重復進樣6次，測定對乙酰氨基酚的峰面積。結果，RSD分別為0.1%、0.1%、0.5%、0.4%（n均為6），表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復性試驗 取C廠樣品適量，按“2.1.4”項下方法分別加4種溶出介質制得供試品溶液各5份，照“2.1.1”項下色譜條件進樣分析。結果，RSD分別為1.1%、0.8%、1.3%、1.5%（n均為5），表明方法重復性良好。

2.1.7 穩定性試驗 取“2.1.4”項下供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，分別于0、2、4、8、12 h進樣，測定對乙酰氨基酚峰面積。結果，RSD分別為0.1%、0.3%、1.0%、0.5%（n均為5），表明供試品溶液均在12 h內穩定。

2.1.8 加樣回收率試驗 稱取1/6片樣品（C廠，每片中對乙酰氨基酚標示量為44 mg）約50 mg，共6份，精密稱定，分別精密加入對乙酰氨基酚對照品約8 mg，按“2.1.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率。結果，4種介質下對乙酰氨基酚的平均回收率分別為100.4%、100.9%、100.1%、100.9%，RSD分別為1.6%、2.1%、1.7%、2.0%（n均為6）。

2.1.9 定量限 以信噪比10∶1為指標，測得定量限為0.015 μg·mL-1。

2.1.10 樣品含量測定 取A、B、C廠家的樣品各10片，按“2.1.4”項下方法制備供試品溶液，照“2.1.1”項下色譜條件進樣分析，以外標法計算樣品中對乙酰氨基酚的含量（按標示量計算），結果見表1。

表1 樣品含量測定結果Tab 1 Results of content determination of sample

2.2 溶出度考察

2.2.1 溶出介質的制備[1]同“2.1.2”項下方法制備。

2.2.2 溶出介質體積的選擇 以水為溶出介質，選用漿法測定，介質體積選用600、900 mL[3]，轉速為75 r·min-1，分別對3個廠家的樣品進行考察。結果，A、B廠樣品在取樣時間為10 min時的供試品溶液濃度未能達到儀器的定量限，故溶出介質體積選用600 mL。

3.1.3 溶出度測定 根據2010年版《中國藥典》（二部）附錄溶出度測定法，選用第二法漿法測定。取A、B、C 3個廠家的樣品各6片，分別以不同溶出介質Ⅰ～Ⅳ各600 mL為溶出介質，轉速為75 r·min-1，溫度為（37±0.5）℃，依法測定。取樣時間為10、20、30、45、60、90、120、150、180 min，每次取樣5 mL，經0.45 μm微孔濾膜濾過，同時補充同體積同溫度的溶出介質。取供試品溶液按HPLC法分別測定，計算出每片的累積溶出率。溶出曲線見圖2。

2.3 數據處理及分析

采用美國FDA推薦使用的相似因子法。相似因子法的基本假設是試驗制劑與對照制劑的累積溶出度差的平方和最小，相似因子（f2）的數學表達式為：

式中：f2為相似因子；Rt為t時間參比制劑累積溶出百分率；Tt為t時間受試制劑累積溶出百分率；n為取點數目。

f2值在50～100之間時可以認為樣品與參比制劑之間的溶出行為具有相似性，其值越接近100，相似性越高；越接近0，相似度越低；f2值＜50時，則說明樣品與參比制劑的溶出度不相似。選用A廠的產品為對照，評價其他兩家藥廠的產品在各個溶出介質條件下的溶出度，統計分析結果見表2；以溶出介質Ⅰ為對照，評價各藥廠制劑在其他3個溶出介質中的溶出度，統計分析結果見表3。

圖2 不同廠家精制銀翹解毒片在不同溶出介質中的溶出曲線A.A廠；B.B廠；C.C廠Fig 2 Dissolution curve of Prepared yinqiao jiedu tablets produced by different manufacturers in different medium factoryA.factoryA；B.factory B；C.factory C

從HPLC圖中可看出，除對乙酰氨基酚峰外，其余僅檢出1～2個色譜峰，說明在本文所考察的4種溶出介質中，樣品大部分成分未能溶出。由于本文僅對對乙酰氨基酚的溶出指標進行測定，未考察其余成分適宜的溶出介質，故該方法下一步可繼續深入研究。

試驗中考察了轉籃法和漿法兩種方法，采用轉籃法時，發現制劑的包衣會附著于轉籃的籃網上，影響片劑的溶出，因此選用漿法。

在進行溶出度測定時，B廠制劑在溶出介質Ⅳ中一開始出現倒溶現象，10 min時溶出率為0.6%，而20 min時溶出率為0.2%，在溶出介質Ⅲ中也存在此現象，可能是藥物中添加的輔料導致了藥品釋放的不穩定，尚有待進一步研究，但仍建議該廠對影響制劑溶出度的輔料及生產工藝進行改進，以進一步提高產品質量。

試驗中發現，A廠和B廠制劑在60 min后對乙酰氨基酚的溶出率才能達到40%以上，120 min達到85%以上，而C廠制劑在30 min后溶出率已能達到40%以上，90 min后能達到85%以上，說明薄膜衣較糖衣體外溶出快，但是否會引起體內生物利用度及臨床療效不同，有待進一步研究證實。

中藥制劑生產多為傳統工藝，產品質量參差不齊，出現的問題也比化學藥品多。因此，藥品標準中有必要增加溶出度檢查項目，對制劑質量進行控制。

表2 以A廠制劑為對照的其他各藥廠制劑的相似因子Tab 2 f2of preparations from different factories using factoryAas control

由表2可看出，以A廠制劑為對照，僅僅B廠產品在溶出介質Ⅰ中的f2值＞50，其余所得f2值均＜50，說明各藥廠制劑質量水平存在顯著性差異。由表3看出，以溶出介質Ⅰ為對照，A藥廠制劑在溶出介質Ⅱ、Ⅳ中f2值均＞50，在溶出介質Ⅲ中f2值也接近50，說明A廠制劑在患有該疾病的各種體質人群中溶出情況相似，其質量較穩定；而B藥廠和C藥廠制劑在溶出介質Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中的f2值均＜50，說明B藥廠和C藥廠制劑在不同體質人群中的溶出情況存在顯著性差異。

表3 以溶出介質Ⅰ為對照的其他各溶出介質中的相似因子Tab 3 f2of different mediums using mediumⅠas control

3 討論

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑（第三冊）[S].1991：198.

[2]謝沐風.簡介日本“藥品品質再評價”工程（溶出度研究系列一）[J].中國藥品標準，2005，6（6）：42.

[3]張 波，李清箐，潘慶東.益肝靈滴丸溶出度測定[J].中國藥房，2010，21（43）：4 103.