黃芪多糖注射液中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類藥檢查方法應(yīng)用

孔曉鋒 古麗曼 木尼熱 盧 琳

(新疆獸藥飼料監(jiān)察所，新疆烏魯木齊830063)

黃芪多糖注射液，又稱抗病毒Ⅰ號(hào)注射液，具有誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，促進(jìn)抗體形成。用于雞傳染性法氏囊等病毒性疾病。現(xiàn)部分獸藥生產(chǎn)企業(yè)，為了提高藥物療效，非法添加解熱鎮(zhèn)痛類藥，致使用戶在不知情的情況下使用了這些產(chǎn)品，從而導(dǎo)致藥物在動(dòng)物源性食品殘留，嚴(yán)重影響動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量安全，進(jìn)而危害人體健康，該試驗(yàn)采用HPLC法，對(duì)黃芪多糖注射液中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類藥，提供了檢查方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀：Agilent 1100型，配二極管陣列檢測(cè)器（DAD），美國(guó)安捷倫公司生產(chǎn)；電子天平：XS 105型，梅特勒－托利多公司生產(chǎn)；酸度計(jì)：FE 20型，梅特勒－托利多公司生產(chǎn)。

1.2 對(duì)照品

對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、安替比林、氨基比林對(duì)照品，含量均為100%，由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。

1.3 試劑

甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

1.4 供試品

取黃芪多糖提取物（中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供）2.5 g，加純化水100 ml，即得含黃芪多糖以葡萄糖計(jì)，每 10 ml約 0.1 g。

2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil（鉆石）C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液(磷酸二氫鈉 6.0 g,加水100 ml使溶解，加三乙胺1 ml，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至 7.0)－甲醇(65：35),流速：1.0 ml/min；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器(DAD),波長(zhǎng)范圍190～400 nm,記錄229 nm波長(zhǎng)處的色譜圖。對(duì)乙酰氨基酚、安乃近、安替比林、氨基比林的分離度應(yīng)符合規(guī)定。

3 方法與結(jié)果

3.1 對(duì)照品溶液

分別精密稱取安乃近對(duì)照品30mg，氨基比林、安替比林、對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品各12.5mg于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液5 ml于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

3.2 供試品溶液

取供試品溶液1 ml，加甲醇稀釋500倍。

3.3 測(cè)定

取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl,分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖及光譜圖。圖1 A為對(duì)照品色譜圖,圖1 B為供試品色譜圖,其中峰1為對(duì)乙酰氨基酚、峰2為安乃近、峰3為安替比林、峰4為氨基比林。

3.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述混合對(duì)照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表1，表明儀器對(duì)多組分進(jìn)行測(cè)定的精密度良好。

3.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)

圖1 對(duì)照品、供試品、空白溶液色譜

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

按80%、100%、120%添加量，分別精密稱取安乃近、氨基比林、安替比林、對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品，分別添加黃芪多糖注射液 0.1、0.2、0.2、0.2 ml，用甲醇作溶媒定容至25 ml量瓶，每個(gè)濃度分別制備3份平行樣，每份樣品至少進(jìn)樣2次，按3.3節(jié)方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

3.6 檢測(cè)限試驗(yàn)

檢測(cè)限溶液：取對(duì)照品工作液適量（2 ml或1 ml或0.5 ml），加黃芪多糖儲(chǔ)備液（取黃芪多糖注射液0.7 ml，加甲醇至 25 ml量瓶，搖勻）5 ml于 25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 ml于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

取黃芪多糖空白溶液(取黃芪多糖儲(chǔ)備液5 ml于25 ml量瓶中，搖勻)、檢測(cè)限溶液各 10 μl,按 3.3 節(jié)方法進(jìn)行測(cè)定，報(bào)告黃芪多糖空白溶液圖譜（見圖1 C）及測(cè)試藥物檢測(cè)限溶液光譜失真的濃度及圖譜，檢測(cè)限結(jié)果為4 μg/ml。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

本文采用HPLC法，可快速、準(zhǔn)確地檢查黃芪多糖注射液中非法添加的解熱鎮(zhèn)痛類藥，對(duì)更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，提供了檢測(cè)依據(jù)，具有一定的實(shí)用意義。

[1]中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典二○一○年版一部[S].

[2]中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典獸藥使用指南二○一○年版[S].