翼狀胬肉組織VEGF、PCNA的表達及相關性研究

張靜輝 陳劍

翼狀胬肉是常見的眼表疾病之一。具體病因不明，可能與紫外線照射、煙塵等有一定關系［1］。大量研究工作表明，翼狀胬肉的發病與細胞增殖密切相關。本研究通過對翼狀胬肉組織中VEGF和PCNA的表達情況及VEGF、PCNA兩者的相關性研究，探討翼狀胬肉與細胞增殖之間的關系，為翼狀胬肉的病因和發病機制的研究提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 35例翼狀胬肉組織標本取自某大學附屬第一醫院眼科住院患者，單眼翼狀胬肉，病變部位均位于鼻側，其中進行期患者16例，靜止期患者19例。其中男19例，女16例;年齡為31～74歲，平均年齡(55.80±11.80)歲。10例正常結膜組織做對照組，標本取自角膜移植供體眼球結膜，其中男8例，女2例;年齡為35～65歲，平均年齡(55.30±8.39)歲。兩組間性別、年齡經統計學處理無差異。所有病例均無其他角膜、結膜疾病。

1.2 方法 將切除后的翼狀胬肉組織標本立即置于10%甲醛固定，分開頭部和體部，石蠟包埋，連續切片，切片厚度為4 μm，進行常規HE染色結合病程鏡檢確定分期后行免疫組化檢查。

1.3 統計學方法 在EXCEL中建立數據庫，應用SPSS 13.0軟件進行統計分析，年齡比較采用t-檢驗，性別分析采用χ2-檢驗，兩組中VEGF和PCNA的差異應用Mann-Whitney秩和檢驗，VEGF、PCNA兩者關系應用Spearman等級相關分析。

2 結果

翼狀胬肉組織VEGF和PCNA的陽性表達率是88.5%，正常結膜組織中VEGF和PCNA的陽性表達率分別20%、40%;VEGF在翼狀胬肉和正常結膜中的表達差異存在統計學意義(P＜0.05);PCNA在翼狀胬肉和正常結膜中的表達差異存在統計學意義(P＜0.05)。VEGF與PCNA在翼狀胬肉組織不同分期的表達有統計學意義(P＜0.05)。VEGF與PCNA在翼狀胬肉組織中的表達呈正相關 r=0.599，P=0.000。

3 討論

3.1 VEGF在翼狀胬肉中的表達 近年來，隨著多種腫瘤相關基因在胬肉中異常表達的發現，以及胬肉的某些與腫瘤類似的生物學行為，促使研究者更傾向于認為翼狀胬肉是眼表的一種異常增生性疾病，由此更加關注對胬肉發病機制的研究［2］。VEGF是目前已知在新生血管形成過程中最重要的刺激因子［3］。本實驗研究結果發現，翼狀胬肉組織上皮層及纖維組織均可見不同程度的增生。翼狀胬肉組織上皮細胞VEGF蛋白較正常結膜增多，陽性表達主要在上皮細胞胞漿及血管內皮，呈棕黃色染色。VEGF在翼狀胬肉靜止期和進行期組織中的表達有明顯差異具有統計學意義。結合本研究實驗結果，認為翼狀胬肉病變發展中可能由于VEGF活性受各種因素的影響，促進了VEGF的表達，促進內皮細胞的分裂增殖，從而促進血管的增生，使正常結膜組織過度增殖及翼狀胬肉纖維血管組織向角膜的侵襲。李海燕等［4］研究報道，翼狀胬肉組織上皮中有Ki-67和VEGF的過度表達，提示翼狀胬肉組織上皮中存在增殖調控的異常，上皮細胞可能發生了轉化，上皮細胞在翼狀胬肉的發生發展中可能起著關鍵的作用。

3.2 PCNA在翼狀胬肉中的表達 本實驗研究結果顯示，PCNA在翼狀胬肉組織中的陽性表達主要在細胞核，呈淺黃色或深棕色顆粒，明顯高于正常結膜組織;PCNA在翼狀胬肉靜止期和進行期組織中的表達有明顯差異，具有統計學意義，提示翼狀胬肉內存在明顯的細胞增殖，細胞的高增殖狀態是組織增生性疾病的生物學標志，因此可將翼狀胬肉視為一種增生性疾病，研究結果提示PCNA可能與翼狀胬肉的發生發展有關。Ueda等［5］用免疫組化方法了解 P53、P21、PCNA 在日本人及突尼斯人翼狀胬肉中的表達，結果發現PCNA在日本人翼狀胬肉陽性率為76.2%，在突尼斯人翼狀胬肉中陽性率為63.1%，兩者差別不明顯。顏美榮等［6］研究發現PCNA在翼狀胬肉中的高表達和Caspase-3在翼狀胬肉中的低表達，提示細胞凋亡和增殖異常，可能與翼狀胬肉的發生、發展有關。

3.3 VEGF和PCNA在翼狀胬肉表達的相關性 本研究結果發現，VEGF和PCNA在翼狀胬肉組織中都有陽性表達，明顯高于正常結膜組織，兩者之間的表達呈正相關性。隨著研究的進展，VEGF和PCNA的陽性表達成為判斷腫瘤診斷、惡性程度、預后的重要指標及輔助指標，VEGF和PCNA在其他疾病中的表達已經有較多的報道。周祥榮等［7］發現胃癌組織中 PCNA、VEGF的陽性表達率分別為85.0%、68.3%，VEGF和PCNA在胃癌中的表達呈正相關。楊宏剛等［8］用免疫組化SP法檢測了40例非小細胞肺癌的VEGF陽性表達率為72.5%，PCNA在非小細胞肺癌中的陽性表達率為62.5%，認為VEGF和PCNA可以作為評價非小細胞肺癌預后的重要指標。鄭琦等［9］用免疫組化法檢測30例翼狀胬肉組織和30例正常結膜中VEGF與PCNA的表達，結果發現翼狀胬肉中VEGF和PCNA的陽性表達均高于正常結膜，VEGF、PCNA在翼狀胬肉中的高表達，提示翼狀胬肉組織血管活性、增殖活性增強。與本研究結果一致，由此可見，翼狀胬肉的形成與腫瘤組織的形成有相似之處，可能是VEGF和PCNA共同作用的結果。

4 小結

本實驗研究結果顯示，VEGF和PCNA在翼狀胬肉組織中均有陽性表達，明顯高于正常結膜組織;VEGF和PCNA在翼狀胬肉中的表達呈正相關，PCNA隨著VEGF表達強度的升高而升高，提示VEGF和PCNA可能通過不同的途徑共同參與了翼狀胬肉的發病過程。

［1］ 惠延年．眼科學．第6版．人民衛生出版社，2004:89．

［2］ Tsai YY，Chang KC，Lee H，et al.Effect of p53 codon 72 polymorphism on p53 protein expression in pterygium．Clin Experiment Ophthalmology，2005，33(1):60-62．

［3］ 朱華鋒，汪春蘭，趙宇.VEGF和FGF-2在血管生成中的協同作用研究進展.中華整形外科雜志，2006，22(1):72-75．

［4］ 李海燕，劉克蘭，袁志剛，等．翼狀胬肉中Ki-67和VEGF的表達．中國實用眼科雜志，2006，24(9):946-948．

［5］ Ueda Y，Kanazawa S，Kitaoka T，etal．Immunohistochemical study of p53，p21 and PCNA in pterygium.Acta Histochem，2001，103(2):159-65．

［6］ 顏美榮，李正賢，劉庚勛，等．PCNA、Caspase23在翼狀胬肉中的表達與細胞增殖的關系．湖南師范大學學報(醫學版)，2007，4(2):20-22．

［7］ 周祥榮，李忠音，楊小東，等．PCNA和VEGF在胃癌組織中表達的關系及意義 華西醫學，2009，24(10):2585-2587．

［8］ 楊宏剛劉建軍，楊敏．VEGF、PCNA在非小細胞肺癌組織中的表達及意義．新疆醫科大學學報，2009，32(2):159-164．

［9］ 鄭琦，王偉剛，鄭根主．VEGF與PCNA在翼狀胬肉中的表達．中國中醫眼科雜志，2010，20(3):159-161．