DNA定量分析法在惡性胸腔積液診斷中的應用價值＊

王俊利，潘明志，楊鳳蓮，平 靜，韋葉生，常正義，滕元姬，農樂根

（右江民族醫學院附屬醫院:1.檢驗科；2.《右江醫學》編輯部；3.中醫藥化學實驗室；4.病理科，廣西 百色 533000）

胸腔積液中找到腫瘤細胞是確診惡性胸腔積液的最常用方法，但當脫落到胸腔積液的腫瘤細胞稀少、多種因素引發惡性腫瘤細胞發生破壞、分化良好的腺癌細胞與增生的間皮細胞形態混淆存在時，脫落細胞學診斷的敏感性將降低。1998年Motherby等［1］報道胸腔積液找癌細胞單次檢驗的陽性率僅為58%。細胞DNA已逐步應用于宮頸細胞病理學輔助診斷中，但該技術應用于胸腔積液鑒別診斷則少有報道。本研究應用全自動DNA定量分析技術診斷胸腔積液，并與脫落細胞學檢查進行比較，以探討其在良、惡性胸腔積液鑒別診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院細胞室2009年10月至2010年8月胸腔積液標本324例。男164例，女160例，中位年齡58.2歲（18～82歲），所有病例均經組織病理學、影像學、實驗室檢查或結合臨床明確診斷，其中惡性胸腔積液患者142例，分別為肺癌89例，肝癌18例，胃癌10例，乳腺癌9例，賁門癌6例，卵巢癌4例，胰腺癌3例，惡性胸膜間皮瘤2例，多發性骨髓瘤1例。良性胸腔積液182例，其中結核性102例，漏出液65例（肝硬化52例、尿毒癥8例、心力衰竭5例），炎癥性10例，乳糜胸2例，良性胸膜間皮瘤3例。

1.2 方法 每例胸腔積液標本取200mL離心涂片，制成6張薄層細胞片，3張用于常規巴氏染色，3張用于Feulgen染色。

1.2.1 脫落細胞學檢查 3名細胞學診斷醫師盲法閱片判定結果。如有疑問，3名細胞病理學專家會診判定。診斷結果分為4類:（1）未見到癌細胞；（2）見到少許異型細胞；（3）見到可疑癌細胞；（4）見到癌細胞。

1.2.2 細胞DNA定量分析 采用本院細胞室的全自動細胞圖像分析系統分析Feulgen染色涂片，對染色片中的每一個細胞核進行掃描分析，根據每個細胞核的123個核特征參數值自動進行分類和計數，并綜合分析。參照文獻［2－3］制訂結果判斷標準:細胞核DNA含量以DNA指數（DNA Index，DI）表示，當二倍體細胞DI為1，G2／M期的四倍體細胞DI為2時，DI在1.1～1.9之間 細胞數超過15%或存在3個以上DI＞2.5時診斷為惡性胸腔積液。

1.3 統計學處理 采用SPSS11.5軟件進行數據分析，率的比較應用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 脫落細胞學檢查結果 324例胸腔積液脫落細胞學檢查發現，142例惡性胸腔積液檢出癌細胞患者87例，182例良性胸腔積液檢出癌細胞患者10例，細胞學檢查敏感性為61.27%，特異性為94.51%，準確率為79.94%。

2.2 細胞DNA定量分析結果 182例良性胸腔積液中182例呈現二倍體為良性；142例惡性胸腔積液中細胞DNA定量分析后達到惡性胸腔積液診斷標準的有135例。細胞DNA定量分析檢測良、惡性胸腔積液的敏感性為95.07%，特異性為100%，準確率為97.84%。

2.3 細胞DNA定量分析系統與脫落細胞學診斷比較 脫落細胞學準確率為79.94%，細胞DNA定量分析檢測的準確率為97.84%，兩種方法的準確率比較差異有統計學意義（χ2＝4.87，P＝0.027）。經脫落細胞學診斷為惡性的87例胸腔積液標本經DNA定量分析均達到惡性診斷標準，兩者有很高的符合率。細胞學漏診的55例惡性胸腔積液標本經DNA定量分析法找到癌變細胞48例，經過細胞學重復檢查有30例發現少數可疑癌變細胞。142例惡性胸腔積液DNA定量分析有7例（7／142，4.93%）為正常二倍體，故細胞DNA定量分析也存在一定的假陰性。

3 討 論

脫落細胞學診斷是細胞診斷醫師根據細胞形態的變化對細胞性質作出判斷，帶有一定的主觀性。此外，如果胸腹腔積液內存在細胞數量少、細胞形態不典型等問題時，常難以判定其良、惡性。雖然借助免疫細胞學方法可輔助診斷其良、惡性，但由于該方法敏感性不高而易出現誤診的問題［4－6］。

DNA是細胞生長、分化和繁殖的基礎，正常細胞核內均有23對染色體。當出現核增大、染色質變粗、深染、核形態不規則等形態學改變時，提示細胞DNA的含量發生改變。絕大多數實體腫瘤細胞DNA為非整倍體，即異倍體，所以DNA異倍體細胞的出現可視為惡性腫瘤細胞的標志之一。另外，在細胞發生惡變過程中其核形態學改變一般要晚于細胞DNA含量的改變。惡性胸腔積液中一般都有處在分裂時期的癌細胞，即存在異倍體，因此通過細胞DNA定量分析可及早發現細胞是否癌變。細胞DNA定量分析系統是通過檢測胸腔積液脫落細胞的核內DNA含量來判定細胞良、惡性質的。本研究中87例經脫落學檢查檢測到癌細胞的惡性標本胸腔積液，DNA定量分析均達到惡性診斷標準，兩者有很高的符合率。此外，在細胞學漏診的55例惡性胸腔積液中經DNA定量分析法找到癌變細胞48例，經過細胞學重復檢查有30例發現少數癌變細胞。故而DNA定量分析技術可快速識別胸腔積液中存在的少數惡性腫瘤細胞，其診斷結果較脫落細胞學檢查方法更客觀和準確。由此可見，部分的胸腔積液癌變細胞標本在常規的臨床細胞學檢查中往往會產生漏診，DNA定量分析技術在一定程度上可以減少假陰性的發生。

DNA定量分析系統對142例惡性胸腔積液分析，存在7例假陰性結果，經過仔細分析原因如下:（1）其中有5例出現假陰性原因是胸腹腔積液中癌變細胞含量較少，同時因胸膜炎并存導致大量的白細胞和間皮細胞數量增加后掩蓋癌變細胞，這與吳麗娟等［7］運用FCM 細胞DNA分析胸腹腔積液良、惡性的研究中出現假陰性的原因一致；（2）其中有2例出現假陰性原因是在實驗操作過程中由于標本抗凝不佳，出現凝塊，這2例標本經重新取樣并抗凝送檢后DNA定量分析檢測為陽性。

綜上所述，細胞DNA定量分析系統對鑒別診斷良性及惡性胸腔積液具有很好的診斷價值，較脫落細胞學檢查更敏感和客觀。將兩種方法聯合應用可有效地提高胸腔積液良、惡性性質判定的準確率，為臨床治療及判斷預后提供依據。

［1］Motherby H，Nadjari B，Remmerbach T，et al.Static DNA cytometry as a dignosic acid in effusion cytology:DNA aneuploidy for identification of neoplastic cells in equivocal［J］.Anal Quant Cytol Histol，1998，20（3）:162－168.

［2］Palcic B，Carner DM，MacAulay CE，et al.Oncometrics imaging corporation and xillix technologies corpration［J］.Acta Cytol，1996，40（1）:67－72.

［3］Doudkine A，MacAulay C，Poulin N，et al.Neclear texture measurements in image cytometry［J］.Pathological，1995，87（3）:286－299.

［4］王俊利，韋葉生.良惡性胸腹腔積液鑒別診斷的研究進展［J］.右江醫學，2010，38（6）:763－765.

［5］孫小蓉，汪建.脫落細胞學診斷［M］.武漢:湖北科學技術出版社，2006:234－235.

［6］吳禮國，曾曉華，趙芝蓉.聯合檢測生存素CEA、CA125對胸腹腔積液性質鑒別的價值［J］.重慶醫學，2011，40（4）:337－338.

［7］吳麗娟，陳偉，張雪瑩，等.流式細胞術DNA分析用于良惡性胸腹腔積液鑒別診斷的回顧性研究［J］.重慶醫學，2007，36（10）:896－898.