3種梅毒血清學篩選試驗的方法學評價

劉 敏 陳其忠 鄧安彥 周守蓉 吳春磊 穆萬洋

1 四川省南充市中心醫院輸血科 607600； 2 四川省涼山彝族自治州第一人民醫院

近年來，我國的梅毒患者呈逐年增多之勢，這一現象已引起人們的高度重視。梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性性傳播疾病，它的臨床可見癥狀僅見于一期顯發階段、二期顯發階段和晚期，非顯發階段不僅無可見癥狀，患者也無自覺癥狀，梅毒螺旋體（TP）不能在體外培養，只能在活體內繁殖，主要對兔睪丸和眼前房敏感。因此，檢測病原體只能直接在病灶中采集標本后立即做暗視野顯微鏡觀察（RF），因為成本、操作復雜和檢測時效等原因，除研究外，一般不做R－F和兔睪丸感染試驗（RIT）。梅毒是由梅毒螺旋體（TP）所引起的一種性傳播疾病，臨床診斷梅毒常需要血清學檢驗的結果來支持，根據TP感染機體后的特殊的免疫反應規律，其實驗室篩查檢查方法分2類：（1）檢測非特異性梅毒螺旋體抗體，其標準化抗原均為心磷脂、卵磷脂和膽固醇，它們敏感性相同；（2）檢測特異性梅毒螺旋體抗體。現在有少數實驗室在用PCR技術檢測TP－DNA和采用梅毒抗體蛋白印跡法（Western－blot）檢測TP特征蛋白條帶，但是一般都是做研究［1］。正確的認識與評估梅毒血清學檢測方法，對于指導臨床診斷具有非常重要的意義，本報告通過分析酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、螺旋體明膠凝集試驗（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）3種方法在梅毒診斷中的應用，分析其各自應用特點，現報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象 本院2011年4－12月期間住院及門診患者12 960例，其中年齡在70歲以上的老年患者2 120例。

1.2 檢測方法 采靜脈血，分離血清。用TPELISA進行 TP－Ab篩查，所有ELISA法 TP－Ab陽性標本再用TPPA進行確證試驗且同時進行甲苯胺紅不加熱血清學試驗（TRUST），出現凝集反應者判定為TRUST陽性；以ELISA法和TPPA法均陽性者判斷為TP－Ab陽性標本。上述檢測均嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3 試劑來源 ELISA法檢測試劑盒由珠海麗珠試劑有限公司提供；賽樂迪（SeIDdia）TPPA診斷試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社提供；TRUST試劑盒由上海榮盛生物技術有限公司提供。1.4 儀器 洗板機，酶標儀。

1.5 統計學方法 采用χ2檢驗進行統計學處理，P＜0.05表示有統計學意義。

2 結果

12 960 例患者用ELISA法篩查共檢出TP－Ab陽性334例，陽性率2.6%；經TPPA確診277例陽性，陽性率2.1%；其余均為假陽性。再用TRUST試劑進行定性和定量試驗，有98例陽性，陽性率0.8%；滴度1∶1～1∶4。表明TP－ELISA試劑檢測靈敏度高于TPPA法，其假陽性率為0.45%（57／12 683），TRUST 方法檢測漏檢率為64.62%（179／277）。數據分析見表1、2。

表1 12 960例患者用ELISA法檢測TP－Ab結果的年齡分布

表2 12 960例患者標本TPPA和ELISA檢測結果

3 討論

人體感染梅毒后，會產生兩類抗體，一類是直接針對梅毒螺旋體的抗體，另一類則是針對類脂質的抗體。TP－ELISA是一種基于基因工程的特異性檢測技術，特異性抗體在梅毒的潛伏期（約感染后2周）產生，對二期、潛伏期和治療后的梅毒的敏感性和特異性均較高［2］。TP－ELISA的主要缺點：該法檢測的是梅毒Ig M及Ig G的混合抗體，梅毒Ig G抗體治愈后相當長的時間內仍然存在較高的陽性率，甚至終身陽性，因此，TP－ELISA陽性只說明正在感染或曾經感染過，不能判斷梅毒疾病活力與否，所以不能作為療效監測手段。且國內外TP－ELISA試劑盒包被的TP分子抗原一般沒有經過純化，而且用人血清清蛋白增加吸附性。這樣有可能出現假陽性抗原位點。老年人，特別是70歲以上，常伴有心腦血管疾病，或者其他老年性疾病，容易出現機體免疫功能異常，易產生一些針對連接用的清蛋白抗體或異常的蛋白質。從而干擾TP－ELISA反應，出現假陽性結果。本組資料結果顯示：70歲以上老年患者假陽性率為0.97%，而70歲以下老年患者假陽性率只有0.35%，兩組經統計學處理，表示差異有統計學意義（P＜0.05），與有關報道相符［3］。故對梅毒的診斷必須結合臨床表現，否則，可能導致臨床誤診，同時增加患者的不必要治療、用藥和心理負擔。TPPA法檢測的是梅毒特異性抗體，以明膠顆粒為載體，吸附梅毒螺旋體－Niohols株菌體抗原，克服了TPH A血細胞自溶而造成漏檢的弊端，臨床實驗室常以TPPA法陽性作為確診梅毒的依據，而梅毒螺旋體試驗檢出的抗體可持續終生，但是在患者伴硬下疳或生殖器官潰瘍疑為TP感染時，首次檢查可以為陰性，需隔1～2周重新復查。人體被梅毒螺旋體感染后，可產生Ig G和Ig M類抗體，僅僅憑借TPPA陽性就診斷為梅毒，尤其是無癥狀的老年人，顯然是不正確的［4］。由于TRUST操作方便、價格低廉，許多醫院及血站將其作為梅毒抗體的初篩試驗，陽性標本再用TPPA作確證試驗。但TRUST檢測梅毒的陽性率較低，假陽性較高，不適于作為梅毒的初篩方法。TRUST方便測定反應素滴度，反應素在初期梅毒病灶出現后1～2周就可測出，在二期梅毒滴最高，三期梅毒較低。由于反應素對機體無保護作用，未經治療的患者，其血清內的反應素可長期存在。經適當治療后，抗體可以逐漸減少至轉為陰性，其滴度變化與梅毒的治療情況呈正相關，因此適合用于療效觀察、隨訪和復發的輔助診斷以及基層醫院應用［5］。某些疾病可引起假陽性，如紅斑狼瘡、麻風、類風濕關節炎、混合結締組織病等［6］。所以TRUST用于梅毒螺旋體的診斷有很大的局限性。筆者認為對輸血前患者梅毒抗體的檢測應采用敏感性和特異性較高的TP－ELISA法進行初篩，可提高梅毒抗體的檢出率；因TP－ELISA在對老年患者的梅毒篩查中，可出現一定數量的假陽性，需用TPPA作確證試驗，可排除假陽性患者；最后用TRUST法進行檢測，可判斷其是否為現癥患者，對疾病嚴重程度的判斷、療效觀察、是否復發或再感染的判斷有非常重要的意義。三種方法相互補充，為臨床提供更為科學和準確的結果。

綜上所述，三種方法每一種方法在臨床上的意義不同。ELISA法是門診、住院患者梅毒篩查的理想方法。對于ELISA陽性的標本最好同時做TRUST和TPPA檢測，另外對梅毒的診斷必須結合臨床表現，否則可能導致臨床誤診，同時增加患者的心理及經濟負擔。

［1］ 馬開富，劉勝武.梅毒血清學診斷實驗方法研究進展〔J〕.國際檢驗醫學雜志，2012，11（33）：63－65.

［2］ 程艷杰，王廣杰，王旭梅，等.梅毒螺旋體血清學檢測方法的實驗室評價〔J〕.中國皮膚性病學雜志，2005，19（8）：503－504.

［3］ 何杜.輸血前患者血清梅毒螺旋體抗體檢測結果分析〔J〕.檢驗醫學與臨床，2012，47（8）：736－737.

［4］ 王柳溪.TP－ELISA法檢測老年人梅毒抗體易產生假陽性原因分析〔J〕.醫學理論與實踐，2008，21（9）：1085－1086.

［5］ 黨倩麗，馮捷，張小艷，等.梅毒螺旋體特異性抗體對梅毒早期診斷和治療的評價〔J〕.臨床皮膚科雜志，2005，34（2）：90－92.

［6］ 陳雪.三種梅毒血清學檢測方法應用評價〔J〕.實用醫技雜志2011，99（18）：948－949.