高效液相色譜法同時測定丁苯乳膏中兩組分的含量

姬懷雪，王 艷，邵珠民，惠 慧

徐州醫學院附屬醫院藥劑科，徐州 221002

丁苯乳膏是我院研制的復方制劑，分別含0.1%丁酸氫化可的松和0.5%鹽酸苯海拉明。丁酸氫化可的松是一種中效糖皮質激素藥物，療效適中而副作用相對較低，具有抗炎、免疫、抗增生作用[1]；鹽酸苯海拉明為抗組胺藥，具有抗變態反應、止癢消腫作用[2]；兩藥合用能起到明顯的協同作用，且不增加不良反應，主要用于治療神經性皮炎、脂溢性皮炎、慢性濕疹，亦用于蟲咬、過敏性濕疹等，療效確切，臨床效果好。為了更好地控制該制劑的質量，采用高效液相色譜法（HPLC）同時測定了兩組分的含量[3]，克服了乳膏基質中羥苯乙酯的干擾，結果表明本法簡便、準確。

1 材 料

1.1 儀器

美國Waters高效液相色譜儀（包括1525二元高壓梯度泵、717自動進樣器、2487雙波長紫外檢測器、Empower操作平臺）；UV-2401PC（日本島津公司）；FA1004B型電子天平（上海精密科學儀器有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸苯海拉明原藥（遼源市百康藥業有限公司，批號:090307）；丁酸氫化可的松原藥（浙江仙琚制藥有限公司公司，批號:20120101）；丁酸氫化可的松對照品（批號:100303-200101，純度:98.57%）、鹽酸苯海拉明對照品（批號:110728-200806，純度:99.7%）均購自中國食品藥品檢定研究院；丁苯乳膏（自制樣品，批號:20120309、20120316、20120320）；乳膏基質（天津市天驕制藥有限公司，批號:20110807）；乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑為分析純；所用輔料均為藥用規格。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:XTerra RP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相:甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨溶液（35∶27∶38）；流速:1.0 mL·min-1；檢測波長:232 nm；柱溫:30℃；進樣量:20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取丁酸氫化可的松對照品25 mg、鹽酸苯海拉明對照品125 mg，分別用流動相溶解并稀釋至50 mL，用過濾器過濾，作為對照品儲備液；精密吸取對照品儲備液0.8 mL加入10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密稱取兩成分置于同一量瓶中，同法制得對照品混合溶液。

2.2.2 樣品溶液 精密稱取本品2 g置于小燒杯中，加流動相40 mL，超聲處理5 min，再于冰浴中冷卻1 h，取出后用孔徑0.45 μm微孔濾膜快速過濾，濾液置于50 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 精密稱取空白基質2 g，按“2.2.2”項下方法制備成陰性樣品溶液。

2.3 方法專屬性

分別取陰性樣品溶液、對照品溶液、樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。結果顯示基線平穩，兩主藥之間及與其他雜質成分分離度良好，柱效高，峰形理想。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 標準曲線的制備

分別精密量取對照品混合溶液 0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，進樣，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積（Y）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程（n=6）:丁酸氫化可的松為Y=3.348×104C-3.427×104（r=0.9999），線性范圍為 25～50 μg·mL-1；鹽酸苯海拉明為 Y=1.157×104C+2.918×104（r=0.9999），線性范圍為 125～250 μg·mL-1。結果表明，丁酸氫化可的松在25～50 μg·mL-1范圍內、鹽酸苯海拉明在125～250 μg·mL-1范圍內，峰面積與濃度的線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取同一對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣5次，測得丁酸氫化可的松、鹽酸苯海拉明峰面積的RSD分別為0.86%、0.95%，表明精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一份樣品溶液，分別在 0、2、4、6、8 h 按“2.1”項下色譜條件分別測定峰面積并計算含量，結果無明顯變化，RSD為0.78%，說明樣品液在8 h內穩定，能滿足含量測定要求。

2.7 回收率試驗

分別精密稱取丁酸氫化可的松、鹽酸苯海拉明的對照品，模擬處方比例按“2.2.1”項下配制對照品溶液，按“2.2.2”項方法制備樣品溶液，在“2.1”項下色譜條件測定峰面積，以回歸方程計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果

2.8 重復性試驗

取同一批號樣品6份，精密稱定，按照樣品溶液制備的方法制備供試液，按“2.1”項下色譜條件分別測定峰面積，計算丁酸氫化可的松和鹽酸苯海拉明的含量，RSD分別為0.95%、0.83%，表明本法重復性較好。

2.9 樣品含量測定

分別精密稱取3種不同批號的樣品，按樣品溶液的制備方法制備相應批號的樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，將測定峰面積代入回歸方程，計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n=3）

3 討 論

3.1 波長的選擇

為排除干擾，準確地進行兩主藥的含量測定，分別對丁酸氫化可的松、鹽酸苯海拉明進行紫外掃描。發現兩者紫外圖譜的交叉點波長為232 nm。綜合分析和實驗驗證結果表明，選擇此波長能兼顧兩主藥的測定。

3.2 流動相的選擇

高效液相色譜法的難點在于流動相的選擇，對于本品含量測定的研究，曾試驗過許多不同的流動相，如:甲醇-水、乙腈-水、乙腈-1%三乙胺（29∶71）（用冰醋酸調節pH至6.5）等，效果都不理想，尤其是乳膏基質中的防腐劑——羥苯乙酯影響最大，比較難和鹽酸苯海拉明分離。通過反復試驗，最終選擇甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨溶液；此外，由于不同比例的流動相對分離效果的影響很大，通過反復試驗發現，甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨溶液的比例為（35∶27∶38）最為合適，分離度、峰形、保留時間均適宜。

3.3 樣品溶液的制備

大量的參考文獻報道，在制備乳膏的樣品溶液時采用加熱振搖的辦法提取被測成分，但此方法比較費時。本試驗采用超聲波處理制備供試品溶液的方法，測定結果滿意，耗時短。經試驗，選擇超聲5 min的時間，即可使兩成分完全溶出。

3.4 標準曲線的建立

本試驗分別對對照品溶液、對照品混合溶液進行測定，結果顯示兩個回歸方程基本一致，因此選擇測定對照品混合溶液，這樣能夠同時得到兩種成分的標準曲線，節約了試驗時間。本乳膏劑含量測定的允許范圍為標示量的90.0%～110.0%。

綜上，本實驗建立了簡便、準確的HPLC法測定丁苯乳膏中兩組分的含量方法，有利于基層醫院該類制劑的快檢。

[1]張建中.幾種新的外用糖皮質激素[J].中國藥物應用與監測，2005，2（5）:30-3.

[2]張廣求，張美祥，鄭錦秀.鹽酸苯海拉明凝膠的制備及質量控制[J]. 中國藥房，2005，16（14）:1065-7.

[3]吳 畏，陳 雅，余 穎.復方更昔洛韋乳膏的質量控制與穩定性考察[J]. 醫藥導報，2011，30（12）:236-8.