高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定骨筋丸膠囊中龍膽苦苷和芍藥苷的含量

李 楠 1，楊燕飛 1，陳 燕 2

1鎮(zhèn)江市藥品檢驗(yàn)所，鎮(zhèn)江 212003；2南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210046

骨筋丸膠囊是由乳香、沒(méi)藥、白芍、延胡索、三七、木香、紅花、郁金、獨(dú)活、牛膝、秦艽、桂枝、血竭、馬錢(qián)子等14味中藥組成的制劑，具有活血化瘀、舒筋通絡(luò)、祛風(fēng)止痛的功效。用于治療肥大性脊椎炎、頸椎病、足跟骨刺、增生性關(guān)節(jié)炎、大骨節(jié)病等[1-3]。收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十三冊(cè)中，為了更好地控制制劑質(zhì)量，采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定骨筋丸膠囊中龍膽苦苷和芍藥苷的含量。

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器、安捷倫科技）。

龍膽苦苷對(duì)照品（批號(hào)為110770-200712，99.1%）、芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)為110736-200934，95.7%）均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；骨筋丸膠囊（黑龍江省濟(jì)仁藥業(yè)有限公司，批號(hào)為090502，貴州康納圣方藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20090905、20110201）；甲醇（色譜純），其它試劑均為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:大連依利特C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流動(dòng)相:甲醇-水梯度洗脫（0～15 min 甲醇 20%～30%，15～16 min甲醇 30%～20%，16～20 min甲醇 20%）；流速:1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

龍膽苦苷對(duì)照品22.32 mg，加甲醇制成1 mL含0.1096 mg的溶液；芍藥苷對(duì)照品20.74 mg，加甲醇制成1 mL含0.09924 mg的溶液，分別作為貯備液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取0.25 g，精密稱(chēng)定，置25 mL量瓶中，加甲醇15 mL，超聲處理30min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

陰性試驗(yàn):按處方稱(chēng)取除白芍、秦艽外的其余中藥，按成熟工藝制備白芍、秦艽陰性樣品溶液，再按“2.3”項(xiàng)下的方法進(jìn)行操作，注入高效液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，其他成分對(duì)龍膽苦苷、芍藥苷含量測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.4.1 線性關(guān)系考察 分別精取貯備液適量，加甲醇稀釋成每1 mL含龍膽苦苷0.08295 mg、芍藥苷0.01489 mg 的混合溶液，分別精密吸取 2、3、5、7、10、15 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，讀取峰面積。以峰面積（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）作線性回歸，龍膽苦苷 回 歸 方 程 :A=821.18C-2.2008，r=1.0000，在0.1659～1.244 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；芍藥苷回歸方程:A=1368.6C+1.1226，r=0.9999，在 0.02978～0.2234 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

圖 1 HPLC色譜圖（A）對(duì)照品；（B）供試品溶液；（C）陰性對(duì)照溶液 1:龍膽苦苷；2:芍藥苷

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取線性關(guān)系考察項(xiàng)下的混合溶液，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，吸取5 μL注入液相色譜儀中，連續(xù)進(jìn)樣6針，記錄色譜圖，讀取峰面積，龍膽苦苷的RSD為0.16%，芍藥苷的RSD為0.31%。本方法進(jìn)樣精密度較好。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品內(nèi)容物0.50 g（貴州康納圣方藥業(yè)有限公司，批號(hào)20110201），按供試品溶液制備方法制備供試品溶液6份，按“2.3”項(xiàng)下的方法提取，吸取5 μL注入液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖，讀取峰面積，計(jì)算含量，龍膽苦苷含量為3.400 mg·g-1，其 RSD為 1.78%，芍藥苷含量為0.5131 mg·g-1，其 RSD 為 1.59%。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品內(nèi)容物0.50 g（貴州康納圣方藥業(yè)有限公司，批號(hào)20110201），按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別于室溫放置0、2、4、8、16、24 h 進(jìn)樣，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，吸取 5 μL注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，讀取峰面積。龍膽苦苷的RSD為1.00%，芍藥苷的RSD為1.47%。表明本品供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 回收率試驗(yàn) 取本品內(nèi)容物0.50 g（貴州康納圣方藥業(yè)有限公司，批號(hào)20110201，其龍膽苦苷含量為 3.400 mg·g-1，芍藥苷含量為 0.5131 mg·g-1）、0.25 g，各6份，精密稱(chēng)定，分別加入龍膽苦苷貯備液7mL、芍藥苷貯備液1 mL，按“2.3”項(xiàng)下的方法操作，測(cè)得龍膽苦苷和芍藥苷的量，平均回收率分別為98.4%和96.8%，RSD分別為1.64%和2.43%。

2.5 樣品含量測(cè)定[4]

取 3 批樣品，按“2.3”方法提取，照“2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果（mg·g-1）

3 討 論

由于處方中白芍和秦艽的處方量較大，故易于控制其質(zhì)量，對(duì)血竭、馬錢(qián)子的相關(guān)檢測(cè)方法已有參考文獻(xiàn)報(bào)道，同時(shí)考慮到對(duì)照品的來(lái)源等綜合影響因素，故最終采用本文方法進(jìn)行骨筋丸的質(zhì)量控制，在實(shí)際工作中可以考慮綜合多種方法對(duì)骨筋丸的質(zhì)量進(jìn)行全面控制。

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥成方制劑[S].第十三冊(cè)，139.

[2]國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].試行標(biāo)準(zhǔn)YBZ05282004.

[3]國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].試行標(biāo)準(zhǔn)YBZ11062005.

[4]吳美香，高洪琳，張 霞，等.骨筋丸膠囊中秦艽的龍膽苦苷的檢測(cè)研究[J]. 中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2011，12（3）:202-5.