HPLC法測定薏苡仁不同炮制品中5-羥甲基糠醛及糠醛的含量*

張令志 1，吳 皓2，李 偉 2，文紅梅2，崔小兵 2**

1江蘇宿遷市食品藥品檢驗所，宿遷 223800；2南京中醫藥大學，南京 210029

薏苡仁，禾本科植物薏苡（Coix lacryma-jobi L.）的干燥成熟種仁[1]。《本草綱目》列為上品，性涼，味甘、淡。健脾滲濕，除痹止瀉。麩炒焦香，糠醛又稱麩醛，具有明顯的焦香味。按照中醫理論，薏苡仁炒焦產生焦香味，有健脾作用，但未見科學的實驗證實。根據現代藥物化學和藥理學研究證明，炒焦產生的黃色葡萄糖經熱轉化而成具有毒副作用的5-羥甲基糠醛。所以《中國藥典》對葡萄糖輸液等規定了5-羥甲基糠醛的限量（比色法）。為了進一步全面研究5-羥甲基糠醛的健脾作用和毒副作用，首先要建立一個比較精確的含量測定方法。本文首次通過HPLC法比較了薏苡仁生品、薏苡仁麩炒品、薏苡仁清炒品中5-羥甲基糠醛及糠醛含量的變化，通過測定5-羥甲基糠醛及糠醛含量，可為薏苡仁炮制提供了一個客觀的評價方法，為焦香健脾理論提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

waters-2695液相色譜儀，PDA檢測器。

1.2 藥品與試劑

5-羥甲基糠醛及糠醛對照品（均購于中國藥品生物制品檢定所，批號分別為111626-201007、110709200304）；樣品，薏苡仁經南京中醫藥大學王春根教授鑒定為禾本科植物薏苡（Coix lacryma-jobi L.）的干燥成熟種仁。

甲醇為色譜純，其它試劑為分析純；水為二次蒸餾水。

1.3 樣品制備

樣品依據中藥炮制的相關理論。本實驗將薏苡仁加工為清炒薏苡仁、麩炒薏苡仁。每種炮制方法各平行炮制3份。

清炒薏苡仁:稱取適量干凈薏苡仁，置燒熱的平底鍋中，用文火加熱，炒至深黃色，有香氣，取出放涼。

麩炒薏苡仁:稱取適量麥麩（每100g薏苡仁，用麥麩15 g），置燒熱的平底鍋中，炒至冒煙，放入干凈薏苡仁，不斷翻炒，炒至深黃色，篩去麩皮，薏苡仁和麩皮放冷備用。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:welchrom C18（250 mm×4.6 mm）；流動相:甲醇-0.5%醋酸水溶液（5∶95）；檢測波長:276 nm；流速:1.0 mL·min-1，柱溫:35℃，進樣:10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取對照品5-羥甲基糠醛7.5 mg，用20%甲醇定容至10 mL；對照品糠醛7.5 mg，用20%甲醇定容至100 mL；分別制得對照品儲備液，再吸取上述兩儲備液各1 mL，加20%甲醇定容至50 mL，配制成 5-羥甲基糠醛 15 μg·mL-1、糠醛 1.5 μg·mL-1的對照品混合溶液。

2.2.2 供試品溶液

稱取麩炒薏苡仁樣品細粉約0.5 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加20%甲醇8 mL，超聲處理30 min，加20%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 分別精密吸取上述混合對照品溶液 0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.4 mL 置于 10 mL量瓶中，加入20%的甲醇水溶液定容至10 mL。按上述色譜條件測定峰面積，以對照品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程分別為:5-羥甲基糠醛 Y=7.986×104X+1685.7，r=0.9999；糠醛 Y=3.196×104X+107.44，r=0.9998。表明 5-羥甲基糠醛在 0.15～3.6 μg·mL-1、糠醛在 0.015～0.36 μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.3.2 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測得5-羥甲基糠醛糠、糠醛峰面積，其RSD值分別為0.28%、0.35%。

2.3.3 重復性試驗 取同一批麩炒薏苡仁樣品，平行6份，按“2.2.2”項制備，平行測定兩次，結果5-羥甲基糠醛和糠醛含量的RSD分別為0.98%、1.06%。表明該方法重復性好。

2.3.4 穩定性試驗 取同一份麩炒薏苡仁供試品溶液，在 1、2、4、8、12、24 h 分別進樣，每次進樣 10 μL，測得5-羥甲基糠醛、糠醛峰面積對數的RSD分別為0.21%、0.40%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3.5 回收率試驗 精密稱取麩炒薏苡仁樣品5份，每份約0.25 g，再精密加入對照品儲備液0.2 mL（5-羥甲基糠醛 15 μg·mL-1、糠醛 1.5 μg·mL-1），按照“2.2.2”供試品溶液制備加樣回收樣品溶液，分別進樣，每次進樣10 μL，測定，計算回收率。結果5-羥甲基糠醛、糠醛的平均回收率分別為98.76%、100.84%，RSD分別為1.51%、1.32%。結果見表 1、表 2。

表1 麩炒薏苡仁中5-羥甲基糠醛加樣回收試驗結果（n=5）

表2 麩炒薏苡仁中糠醛加樣回收試驗結果（n=5）

2.3.6 樣品的含量測定 薏苡仁不同樣品按“2.2.2”項制備，取10 μL進樣，以標準曲線計算含量，平行3份，每份進樣2次。結果見表3，色譜圖見圖1。

表3 薏苡仁不同炮制品中5-羥甲基糠醛及糠醛的含量測定（n=5）

圖1 薏苡仁不同炮制品色譜圖

3 討 論

3.1 色譜條件的選擇

比較了甲醇-水、甲醇-0.5%HOAc等不同系統和比例的流動相。先后采用甲醇-水（10∶90），甲醇-水（5∶95），甲醇-0.5%HOAc（8∶92），甲醇-0.5%HOAc（7∶93），甲醇-0.5%HOAc（6∶94），甲醇-0.5%HOAc（5∶95）的流動相進行試驗。結果表明，以甲醇-0.5%HOAc（5∶95）為流動相，能達到滿意的分離效果，且操作簡便。

3.2 樣品提取條件的選擇

稱取樣品0.5 g，置于10 mL量瓶中，加入不同濃度的甲醇水溶液定容至10 mL（20%、40%、50%、70%），超聲不同的時間（15、30、45、60 min），結果表明20%甲醇、提取時間30 min基本提取完全。

3.3 薏苡仁不同炮制品中5-羥甲基糠醛及糠醛的含量分析

根據中醫藥理論，麩炒焦香健脾，糠醛具有明顯的焦香味。由結果可見，炒薏苡仁中5-羥甲基糠醛含量為生薏苡仁的7倍,糠醛含量為生薏苡仁的2倍，說明加熱可促進5-羥甲基糠醛、糠醛的產生；麩炒薏苡仁中5-羥甲基糠醛含量為生薏苡仁的31倍，糠醛含量為生薏苡仁的6倍，說明加熱以及麥麩都可促進5-羥甲基糠醛、糠醛的產生，而5-羥甲基糠醛、糠醛是麩炒過程中麥麩發生梅拉德反應（麥麩中糖與氨基酸）的產物。本文以5-羥甲基糠醛、糠醛含量來評價薏苡仁的不同炮制品，可以很好的控制其質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社，2010:353.