p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23在乳腺癌中的表達及臨床意義

劉 健，陶雅君，陳英杰，楊茹虹

(大連大學醫學院病理學教研室，遼寧大連 116622)

p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23在乳腺癌中的表達及臨床意義

劉 健，陶雅君，陳英杰，楊茹虹

(大連大學醫學院病理學教研室，遼寧大連 116622)

［目的］探討p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23在乳腺癌中的表達及臨床意義。［方法］應用免疫組化SP法檢測100例乳腺癌組織及其癌旁正常乳腺組織活性標本中p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23蛋白表達情況。［結果］乳腺癌組織和癌旁正常組織中p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23蛋白陽性表達率分別為86.0%和30.0%、76.7%和25.0%、80.0%和20.0%，30.0%和90.0%;p53和 C -erbB -2蛋白陽性表達在有無淋巴結轉移、不同臨床分期和癌分化程度上差異有顯著性意義(P＜0.05);VEGF-C蛋白陽性表達在有無淋巴結轉移、腫瘤大小和癌分化程度上差異有顯著性意義(P＜0.05);nm23蛋白陽性表達在有無淋巴結轉移上差異有顯著性意義(P＜0.05)。［結論］p53、C-erbB-2和VEGF-C陽性表達是乳腺癌患者預后差的指標，nm23表達則提示乳腺癌患者預后較好，聯合檢測p53、C-erbB-2、VEGF-C和nm23有助于乳腺癌患者的治療和預后判斷。

乳腺癌;p53;C-erbB-2;VEGF-C;nm23

乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤，占女性全部惡性腫瘤的22%［1］，且發病率和病死率呈逐年上升趨勢，其死亡率與腫瘤侵襲和淋巴結轉移密切相關［2］。目前主要采用手術、放療和化療及內分泌治療，近年來靶向治療成為研究熱點。本研究采用免疫組化方法檢測 p53，C-erbB-2，VEGF-C和nm23在乳腺癌中的表達及其與各臨床病理學參數之間的關系，為乳腺癌患者預后判斷及臨床治療提供依據和新的參考指標，也將為乳腺癌治療提供新的靶點和生物標記物。

1 材料和方法

1.1 組織標本

100例經有經驗的病理醫師確診為乳腺癌的活性標本取自大連大學附屬醫院，病人年齡中位數50歲，術前均未做任何放療、化療、內分泌和靶向治療，診斷明確，臨床資料完整，所有患者均行乳腺癌改良根治術，分別取癌組織和癌旁正常組織及相應淋巴結組織以備實驗所需。按WHO乳腺癌臨床TNM分期標準［2］:Ⅰ期25例，Ⅱ期35例，Ⅲ期40例;腫瘤直徑＜2 cm者21例，≥2 cm者79例;有無腋窩淋巴結轉移分別為53例和47例。所有標本經10%中性福爾馬林固定后，石蠟包埋，4 μm厚連續切片，然后免疫組化染色。

1.2 免疫組織化學

單克隆抗體購于Cell Signaling公司，SP試劑盒與DAB顯色液購于福州邁新公司。常規SP法按試劑盒說明書進行，一抗工作濃度為1∶50，用PBS代替一抗為陰性對照，用已知陽性切片做陽性對照。二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，3%雙氧水滅火內源性過氧化物酶，PBS緩沖液沖洗，微波爐進行抗原修復，正常山羊血清封閉，一抗4℃過夜，二抗、三抗各1 h，DAB顯色7～10 min，復染核脫水透明，中性樹膠封片，鏡下觀察。

1.3 結果判定

光學顯微鏡下，以細胞核或胞漿內出現棕色或黃色顆粒為陽性判斷標準，免疫組化結果參考下面標準判定:隨機選擇10個高倍視野，選定1000個細胞，計數陽性細胞百分比，無細胞核陽性信號，0分;陽性細胞數1% ～25%，1分;陽性細胞數26% ～50%，2分;陽性細胞數51% ～75%，3分;陽性細胞數＞75%，4分。按著色細胞的染色強度分:淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。兩次評分乘積為每張切片最后得分:0～1分為陰性(–)，2分為弱陽性(±)，3～4分為陽性(+)，5～6分為中度陽性(++)，6分以上為強陽性(+++)。

1.4 統計學方法

運用SSPS 12.0統計軟件數據包，采用χ2檢驗、Spearman秩相關分析進行統計學分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 p53和C-erbB-2蛋白表達與臨床病理的關系

p53蛋白表達于乳腺癌細胞核，C-erbB-2蛋白表達于乳腺癌細胞膜或胞漿內。p53和C-erbB-2在乳腺癌細胞中的表達在患者年齡、腫瘤大小方面差異無顯著性意義(P＞0.05)，但在有無腋窩淋巴結轉移、不同臨床分期和癌分化程度方面差異均有顯著性意義(P ＜0.05)(表 1、2、5)。

表1 p53蛋白在乳腺癌組織、癌旁正常組織、有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組中的表達Tab 1 The expressions of p53 protein in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

2.2 VEGF-C蛋白表達與臨床病理的關系

VEGF-C陽性細胞為彌漫性細胞漿著色。其在乳腺癌細胞中的表達在患者年齡、不同臨床分期方面差異無顯著性意義(P＞0.05)，但在有無腋窩淋巴結轉移、腫瘤大小和癌分化程度方面差異均有顯著性意義(P ＜0.05)(表3、5)。

2.3 nm23蛋白表達與臨床病理的關系

nm23表達于細胞質內，少數為細胞膜。其在乳腺癌細胞中的表達在患者年齡、腫瘤大小、不同臨床分期和癌分化程度方面差異無顯著性意義(P＞0.05)，但在有無腋窩淋巴結轉移方面差異均有顯著性意義(P ＜0.05)(表4、5)。

表2 C-erbB-2蛋白在乳腺癌組織、癌旁正常組織、有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組中的表達Tab 2 The expressions of C-erbB-2 protein in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

表3 VEGF-C蛋白在乳腺癌組織、癌旁正常組織、有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組中的表達Tab 3 The expressions of VEGF-C in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

表4 nm23蛋白在乳腺癌組織、癌旁正常組織、有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組中的表達Tab 4 The expressions of nm23 protein in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

3 討 論

乳腺癌是來自乳腺導管或終末導管小葉單元上皮的一種雌激素依賴的惡性腫瘤，其發生、發展和轉移是以多個原癌基因激活和抑癌基因失活為基礎的、多步驟、多階段的復雜過程［3］。傳統判斷乳腺癌預后的指標包括腫瘤大小、臨床分期、淋巴結轉移等，將傳統預測指標與分子預測指標相結合預測乳腺癌患者的生存率為國內學者所關注。

p53基因是一種重要的抑癌基因，編碼53 kDa核磷酸蛋白，分野生型(Wtp53)和突變型(Mtp5)［4］。Wtp53 含量低、半衰期短，30 ～60 min，免疫組化無法檢測其抗原成分。Mtp53在組織內半衰期長，含量高，為免疫組化檢測提供了條件。Mtp53蛋白是目前研究最多的抑癌基因之一，它不僅失去了正常的抑癌作用，而且具有促進正常細胞惡性轉化的作用，導致其它基因激活［4］。當Mtp53蛋白在細胞內積聚，則促進細胞轉化和增殖，導致腫瘤發生。許多研究結果顯示，p53蛋白表達與浸潤型增生、腫瘤細胞的分化程度和淋巴結轉移密切相關，浸潤范圍越廣，分化越低的乳腺腫瘤，其p53基因水平越高，提示p53基因蛋白陽性乳腺癌患者預后不良，生存期短［5］。本研究結果顯示，p53蛋白的差異表達與乳腺癌淋巴結轉移、臨床分期和癌分化程度相關，檢測p53蛋白在乳腺癌中的表達對腫瘤惡性程度、腫瘤增殖能力以及預后判斷具有重要指導意義和臨床價值。

表5 p53，C-erbB-2，VEGF-C和nm23蛋白表達與臨床病理的關系Tab 5 The associations of protein expression levels of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 with clinical pathology of breast cancer n(%)

C-erbB-2是生長因子受體類癌基因，編碼分子量為185 kDa的跨膜糖蛋白，該蛋白具有酪氨酸激酶活性［6］。正常情況下，C-erbB-2處于非激活狀態，參與細胞生長、分化調節，當受到某些致癌因素作用后，其結構或表達調控失常，以基因擴增的形式被激活，從而具有腫瘤轉化的活性。研究表明，細胞凋亡是由C-erbB-2分子C-末端介導的，其通過抑制細胞凋亡而促進生瘤。C-erbB-2過表達不僅是乳腺癌發生的早期事件，且在進展、轉移中也起重要作用，與腫瘤惡性程度高、生長快、預后差相關，目前它已被認為是與乳腺癌發生發展密切相關的基因［7］。本研究結果表明，C-erbB-2陽性表達在臨床Ⅱ、Ⅲ期陽性表達率明顯高于Ⅰ期，有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組。故C-erbB-2陽性表達往往提示患者復發率高，死亡率高，預后不良，可作為判斷預后指標。

VEGF-C是血管內皮生長因子受體3(VEGFR-3)的配體，具有調節淋巴管生成以及脈管滲透性的作用［8］，與腫瘤淋巴結轉移密切相關。VEGF-C與VEGFR-3結合后使VEGFR-3二聚體化，并激活酪氨酸激酶活性導致其自身磷酸化，進而激活下游MAPK信號轉導通路，刺激淋巴管內皮細胞增殖，導致淋巴管密度增高，使腫瘤內和腫瘤周圍形成新生淋巴管［9］。VEGF-C與VEGFR-3結合后同時也改變了原有淋巴管免疫防御功能和原有表達于淋巴管內皮細胞的粘附分子，使得淋巴管內皮細胞粘附因子更易于與腫瘤細胞發生作用，便于腫瘤細胞從淋巴管侵入和播散，而發生淋巴轉移［9］。VEGF-C能夠提高血管滲漏性，造成腫瘤組織間質液壓增大，使連接淋巴管內皮細胞和周圍結締組織的開放連接增多、間隙增大，為腫瘤細胞進入淋巴管中轉移起到關鍵作用［9］。乳腺癌細胞中VEGF-C過表達與淋巴管生成程度及淋巴結轉移程度顯著相關，其表達水平與預后密切相關，VEGF-C高表達患者的無復發生存期及總生存期較短［10］。本研究結果表明VEGF-C與淋巴結轉移密切相關，且具有促進腫瘤細胞增殖作用。

nm23是典型的轉移抑制基因，編碼17 kDa的核內及胞漿蛋白，其基因產物NDPK參與通過影響微管聚合而調節細胞運動，并通過影響G蛋白的信號傳遞而發揮負向調節作用，從而抑制腫瘤轉移。一般認為nm23在腫瘤細胞中的表達與轉移潛能呈負相關，而與各臨床病理學的關系報道不一，大部分研究表明該基因產物有預后價值，nm23蛋白高表達與預后好有關，而低表達往往預后差。本研究與之報道結果一致。

p53、C-erbB-2、VEGF-C及 nm23表達與乳腺癌轉移相關，聯合檢測p53、C-erbB-2、VEGFC和nm23有助于乳腺癌患者的治療和預后判斷。

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Expression and clinical significance of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 in breast cancer

LIU Jian，TAO Ya-jun，CHEN Ying-jie，YANG Ru -hong
(Department of Pathology，Medical College of Dalian University，Dalian116622，China)

Abstract:［Objective］To study the expression and clinical significance of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 in breast cancer.［Methods］The expression of p53，C -erbB -2，VEGF -C and nm23 were examined in 100 cases of breast cancer and adjacent normal breast tissue without chemotherapy by using SP immunohistochemical technique.［Results］In 100 cases of breast cancer and adjacent normal breast tissue，the positive rate of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 were 86.0%and 30.0%，76.7%and 25.0%，80.0%and 20.0%，30.0%and 90.0%，respectively.There were significant difference in the positive rates of p53 and C-erbB-2 in different lymphatic metastasis，clinical stages and histological grade(P＜0.05);The expression of VEGF -C was significantly related with lymphatic metastasis，tumor sizes and histological grade(P＜0.05);It showed significant correlations of the positive rate of nm23 in lymphatic metastasis(P＜0.05).［Conclusion］The expression of p53，C -erbB -2，VEGF-C and nm23 were positively related to the metastasis and prognosis of breast cancer，the combined detection of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 is valuable to predicting prognosis and guiding therapy of breast cancer.

Key words:breast cancer;p53;C-erbB-2;VEGF-C;nm23

Q956

A

1671-7295(2012)05-0450-05

2012-05-20;

2012-09-22

劉 健(1973-)，女，遼寧大連人，講師，博士。E-mail:jianliu0607@163.com