乙型肝炎患者血清標志物、HBV-DNA及肝功能指標的聯合分析

蔣淑娟 武利娟 劉艷麗

（1 鄭州市第一人民醫院，河南 鄭州 450004；2 鄭州市第七人民醫院，河南 鄭州450006；3 鄭州大學第三附屬醫院，河南 鄭州450001）

乙型肝炎病毒（HBV）是引起急慢性肝炎、肝硬化和原發性肝細胞癌的重要致病因素[1]，乙型肝炎已成為嚴重威脅到人類健康的全球性問題。據報道，全球約20億人曾感染過HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染者，我國HBv的攜帶者約1.2億[2]，是乙型肝炎高感染的國家。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取在我院門診和住院的患者，共342位進行標本檢測，診斷符合2005年由中華醫學會肝病學分會和中華醫學會感染病學分會聯合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中的病毒性肝炎診斷標準。采用時間分辨熒光免疫分析法檢測HBsAg陽性、HBeAg陽性及HBcAb陽性且熒光定量PCR法檢測HBv-DNA陽性（＞104拷貝/mL）的病例70例，HBsAg陽性、HBeAg陰性、HBeAb陽性、HBcAb陽性且熒光定量PCR法檢測HBv-DNA陽性（＞103拷貝/mL）和陰性（＜103拷貝/mL）的病例各10例，排除甲、丙、丁、戊肝炎或重疊感染的患者。

1.2 標本的采集及處理

要求檢測對象在空腹的狀態下，用一次性真空采血管抽取靜脈血，靜置凝固后以2000rpm 5min分離血清，分裝0.5mL離心管置冰箱-20℃保存備用。

1.3 檢測方法

HBV血清標志物：采用時間分辨熒光免疫分析法（fluorescenee quantitative PCR，TRFIA），時間分辨熒光分析儀Anytest2000及配套試劑由上海新波生物技術有限公司提供，HBsAg值＞0.5ng/mL為陽性，HBeAg＞0.03Ncu/mL為陽性。HBV-DNA的定量檢測：采用熒光定量PCR（fluorescenee quantitative PCR，FQ-PCR），熒光定量PCR儀Applied Biosystems 7300（美國），試劑由廣州中山醫科大學達安基因技術有限公司提供。血清ALT：由美國雅倍AerosetTM全自動生化分析儀檢測，試劑由上海榮盛公司提供。

1.4 統計學處理

采用SPSS 16.0軟件對數據進行χ2檢驗

2 結 果

在HBV血清學標志物陽性的各種模式中，均有不同程度的病毒DNA復制。本組的342例血清標本中，HBV-DNA陽性的為188例，陽性率為58.02%。1，3，5模式（大三陽）和1，3模式中HBV-DNA陽性率分別為87.5%和85.7%，陽性率比較高。1，4，5模式（小三陽）中HBV-DNA的陽性率為60.5%。血清ALT異常有64例。乙型肝炎大三陽HBV-DNA的陽性率明顯高于小三陽的陽性率，差異有統計學意義（χ2=14.35，P＜0.05）。乙型肝炎大三陽ALT異常率明顯高于小三陽，差異有統計學意義（χ2=36.21，P＜0.01）。見表1。

表1 不同HBV-M陽性模式中HBV-DNA及ALT檢測結果

3 討 論

本實驗采用TRFIA和FQ-PCR技術對血清的HBV不同血清標志及HBV-DNA檢測，結果顯示在299例HBsAg（+）血清中，HBV-DNA（+）181例，占60.5%；HBeAg（+）63例中，HBV-DNA（+）55例，陽性率為87.3%，說明用FQ-PCR技術檢測，絕大多數HBsAg（+）或HBeAg（+）血清中均有HBV-DNA存在。部分HBsAg（+）和HBeAg（+）血清中顯示HBV-DNA（-），可能是HBV-DNA整合于宿主細胞基因或基因變異，血清中游離的HBV-DNA很少[3]，或者是由于HBVDNA的消失比HBeAg的消失早以及病毒發生變異有關[4]，乙型肝炎大三陽ALT異常率明顯高于小三陽，與以往觀點相符。

本研究采用的是熒光定量PCR，它可以快速、準確地檢測標本中的HBV-DNA，并能夠真實地反映出HBV感染和復制的狀態，這對于乙型肝炎的診斷、療效觀察以及預后都具有十分重要的指導意義[5]。TRFIA是近年來發展起來的一種新的免疫測定方法，TRFIA提高了乙型肝炎病毒的檢出率，能夠動態觀察療效和對病情進行監測，可以給醫師對病情療效作出合理的解釋提供依據和參考。

綜上所述，隨著新的乙型肝炎病毒亞型以及基因突變不斷出現，綜合多方面的結果，方可更準確、更全面地判斷急慢性乙型肝炎的預后，對臨床的乙型肝炎診斷、指導用藥和治療監測等方面均具有重要價值。

[1] Qian WP,Tan YQ,Chen Y.Rapid quantification of semen hepatitis B virus DNA by real-time poly merase chain reaction [J].World J Gastroenterol,2005,11(34)：5385-5289.

[2] Shi M,Zhang Y,Zhu YH,et al.Comparision of real-time with the COBAS test for quantitation of hepatitis B virus DNA in serum samples[J].World J Gastroenterol,2008,14(3)：479-483.

[3] 駱抗克.HBsAg陽性的HBV感染.乙型肝炎基礎與臨床[M].北京：人民衛生出版社,1997：246-259.

[4] 高桂風,譚文秀,杜志勛,等.PCR檢測HBVDNA與其血清標志物關系及其臨床意義[J].包頭醫學,1999,23(1)：3-4.

[5] 沈宏偉,范敏明,吳育連,等.熒光定量PCR和ELISA檢測外科病人HBV標志物結果的比較[J].臨床檢驗雜志,2002,20(5)：307.