肝細胞中固有干擾素調節因子7的表達及其抗病毒作用

齊 月，金清龍，溫曉玉，牛俊奇

(吉林大學第一醫院肝膽胰內科，吉林 長春 130021)

在針對丙型肝炎病毒(HCV)的體外培養過程中，腫瘤細胞株HuH-7對于基因型2a型的HCV病毒株JFH1的復制容許度要遠遠高于人永生化細胞株HuS-E/2[1-2]。HuH-7和HuS-E/2基因表達的對比顯示：HuS-E/2細胞中存在干擾素調節因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)的固有表達，而HuH-7細胞中不具備這種基因的固有表達[3]。目前對于RNA病毒感染后，尤其是HCV感染后，細胞內部免疫反應的研究多使用HuH細胞株為研究工具，其研究結果表明：病毒感染后，通過激活IRF3，使其形成二聚體，進入細胞核內，誘導IFN 的轉錄，IFN 通過干擾素受體(IFNAR)，誘導IRF7的表達與激活，然后作用于細胞核內，誘導IFN 的轉錄表達，最終達到抑制病毒的作用[4-5]。而人原代肝細胞及永生化肝細胞中均可以檢測到IRF7的固有表達[3]，其作用尚不明確。考慮到固有表達 IRF7在細胞免疫反應中的作用[6]，本文作者擬通過檢測肝細胞中IRF7在病毒感染后相關免疫基因[7-12]誘導表達的作用，以及其對于HCV在HuH-7細胞中的感染復制的作用，評估HuH-7是否可以完全替代肝細胞作為HCV感染體外研究的工具。

1 材料與方法

1.1 細胞培養原代肝細胞凍存液(江陰齊氏)為商業制品，HuS-E/2細胞及HuH-7細胞由北海道大學Hussein Aly博士饋贈，HuS-E/2和原代肝細胞的培養條件為DMEM (Invitrogen)，內含44 mmol·L-1碳酸氫鈉、10 mmol·L-1煙堿、5%小牛血清 (Gibco)、5% AB型人血清(Sigma)、20 mmol·L-1HEPES (Gibco)、0.1 mmol·L-1長效抗壞血酸、5 mg·L-1EGF (Sigma)、100 mg·L-1鏈霉素、1%DMSO、8 mg·L-1脯氨酸、0.25 mg·L-1胰島素 (Sigma)、50 nmol·L-1地塞米松、100 IU·mL-1青霉素及2 mg·L-1兩性霉素B。37℃、CO2孵箱培養。HuH-7的培養條件為DMEM (Invitrogen)，內含100 IU·mL-1青霉素、10%小牛血清 (Gibco)、20 mmol·L-1HEPES (Gibco)及100 mg·L-1鏈霉素。

1.2 抗體及免疫熒光染抗-IRF7抗體(H246,Santa Cruz Biotechnology),Alexa Fluor 488 山羊抗兔 IgG(A11008,Invitrogen)，Alexa Fluor 546 山羊抗人IgG(A11027，Invitrogen)均為商業制品。……