GST與FGF23 C末端 71個(gè)氨基酸融合蛋白的表達(dá)、純化及其免疫原性

陳玉斌，劉孝菊，姚 娜，孫常文，田海山,4，張 鍵，劉 敏，李校堃,3,4

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 生物反應(yīng)器與藥物開發(fā)教育部工程研究中心,吉林 長春 130118;2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,吉林 長春 130118;3.吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 衛(wèi)生部放射生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,吉林 長春 130021;4.溫州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 生物技術(shù)制藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 溫州 325035)

成纖維細(xì)胞生長因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)于2000年被成功鑒定[1]，作為一種調(diào)磷因子，其通過抑制磷的重吸收及增加磷的外分泌在腎臟中發(fā)揮重要的作用[2]。許多研究[2-4]證實(shí)：人類FGF23基因突變可導(dǎo)致常染色體顯性遺傳性低磷血癥(autosomai dominant hypophosphatemic rickets，ADHR)、X-連鎖低磷血癥性佝僂病(X-linked hypophosphatemia，XLH)以及腫瘤誘發(fā)性骨軟化癥(tumor-induced osteomalacia，TIO)等疾病，而且FGF23在慢性腎病伴發(fā)的繼發(fā)性甲狀旁腺亢進(jìn)的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用[5-6]，尤其是在慢性腎病患者(chronic kidney disease，CKD)早期磷穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮重要作用[7]。研究[8]證實(shí)：多數(shù)血液透析患者血清FGF23濃度超過正常人的 100～1 000倍[8]。腎功能下降后血清FGF23水平緩慢升高，CKD和終末期腎病患者血清FGF23的水平增高，而腎移植后可下降到正常水平[9]。Ferrari等[10]通過改變健康人飲食中磷的含量，觀察到血清FGF23的改變與24 h尿磷的清除成正相關(guān)，表明FGF23的代謝水平與CKD患者的患病程度相關(guān)。本研究利用原核表達(dá)載體表達(dá)了FGF23的活性片段(FGF23CTR)與GST的融合蛋白，并做了純化和初步的免疫原性分析，顯示融合蛋白中的FGF23CTR片段能夠在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生較高活性的抗體，為進(jìn)一步制備特異性針對(duì)FGF23的單克隆抗體提供了條件，也為CKD診斷試劑盒的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法……

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