靶向Ku70基因siRNA對(duì)人肺腺癌細(xì)胞順鉑耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用

黎 萍，張 捷，李亞榮，王 珂，蘇振中

(1.吉林大學(xué)第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春 130041；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院血液腫瘤科，吉林 長(zhǎng)春 130041)

肺癌中80%～85%為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)，化療是NSCLC臨床治療的主要方法之一，以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療是NSCLC的標(biāo)準(zhǔn)化療方案，而肺癌內(nèi)在性或獲得性耐藥嚴(yán)重影響順鉑的臨床化療效果[1]。肺癌順鉑耐藥機(jī)制復(fù)雜，與P-糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶Ⅱ等多藥耐藥因子表達(dá)呈正相關(guān)[2]；與血清p53抗體及谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)[3]。近年研究[4-5]表明：DNA修復(fù)相關(guān)分子以及凋亡信號(hào)途徑的異常是肺癌順鉑耐藥的重要機(jī)制之一。Ku70是DNA結(jié)合蛋白，是DNA磷酸蛋白激酶的重要成分，參與DNA轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，可獨(dú)立參與細(xì)胞DNA修復(fù)并具有抗凋亡作用[6]。研究[7]表明：Ku70的表達(dá)水平與頭頸部腫瘤放、化療后復(fù)發(fā)率呈正相關(guān)，此外Ku70與甲狀腺癌[8]、宮頸癌[9]放療敏感性有關(guān)。本研究比較Ku70在人肺腺癌細(xì)胞系親代(A549)與人肺腺癌耐順鉑細(xì)胞系(A549/DDP)的表達(dá)水平，觀察siRNA靶向沉默Ku70后A549/DDP細(xì)胞在順鉑作用下的增殖、凋亡情況，特別是耐藥性的變化，以期為肺癌順鉑耐藥提供潛在的分子標(biāo)志物，為臨床逆轉(zhuǎn)肺癌順鉑耐藥、提高化療療效尋找有效的分子靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞與主要試劑人肺腺癌細(xì)胞系親代(A549)及其耐順鉑細(xì)胞系(A549/DDP)均購(gòu)自第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院呼吸病研究所。dNTP、MMV逆轉(zhuǎn)錄酶購(gòu)自Promega公司；Ex-Taq、DL-2000 DNA marker為T(mén)akara公司產(chǎn)品；MTT、順鉑購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；Lipofectin 2000及 Trizol為美國(guó)Invitrogen公司產(chǎn)品；胰酶、IMDM培養(yǎng)基為美國(guó)Hyclone公司產(chǎn)品；人Ku70抗體、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的羊抗兔多克隆抗體購(gòu)自Santa-cruz公司；……