蛋白激酶CK2抑制劑TBB對甲狀腺鱗癌細(xì)胞株SW579CK2β和Akt表達(dá)的影響

劉 超，劉 洋，趙 頌，王翠瑤，肖建英

(遼寧醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室,遼寧 錦州 121001)

蛋白激酶2(CK2)是一種生存性激酶，全酶以異構(gòu)四聚體形式存在，由2個催化亞基(ɑ或ɑ′)和2個調(diào)節(jié)亞基(β)構(gòu)成，作為底物和與其相互作用蛋白的接頭蛋白發(fā)揮重要作用。CK2持續(xù)激活并普遍存在于腫瘤組織中，因此被認(rèn)為是藥物治療的潛在靶點(diǎn)[1]。有許多證據(jù)支持CK2的抗凋亡作用[2]，其作用機(jī)制是多方面的，因?yàn)镃K2有眾多底物。此外，CK2的許多靶蛋白參與細(xì)胞的生存和死亡，CK2和一些其他的生存途徑密切相關(guān)，尤其是與PI3K/PDK1/Akt途徑密不可分[3]。Akt，又叫蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)，是調(diào)節(jié)細(xì)胞死亡、增生、生長和代謝的重要蛋白激酶，是PI3K的重要下游分子，其活性依賴于PDK1 和mTORC2分別對Thr308 和Ser473的磷酸化，只有這2個關(guān)鍵性亞基聯(lián)合磷酸化才能使Akt完全激活[4-5]。高選擇性膜通透性CK2抑制劑四溴苯三唑(4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole，TBB)的應(yīng)用為認(rèn)識CK2激酶的特殊細(xì)胞功能提供了一個很好的工具。但TBB抗腫瘤的具體機(jī)制尚不清楚，尤其TBB對甲狀腺癌的作用機(jī)制知之甚少。本研究旨在探討TBB對甲狀腺鱗癌SW579細(xì)胞株增殖及CK2β與Akt表達(dá)的影響，進(jìn)而探討TBB的抗癌機(jī)制，為TBB的臨床開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器TBB、L15培養(yǎng)液( Sigma公司)；RNA PCR Kit (AMV)Ver.3.0試劑盒 (Takara 公司)；CK2β(兔抗人多克隆抗體)、β-actin抗體(兔抗人多克隆抗體)(Santacruz公司)、Akt(兔抗人多克隆抗體)、Phospho-Akt (Ser473) 抗體、Phospho-Akt (Thr308) 抗體(Cell Signaling Technology)，Western細(xì)胞裂解液、BCA蛋白濃度測定試劑盒(碧云天生物技術(shù)公司)；HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG (北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(Piece Biotechnology公司)；預(yù)染蛋白Marker(MBI公司)；……