藍(lán)圓肌肉組織蛋白酶B的純化與性質(zhì)分析

鐘 嬋，沈建東，蔡秋鳳，翁武銀，曹敏杰

(集美大學(xué)生物工程學(xué)院，福建廈門 361021)

鐘 嬋，沈建東，蔡秋鳳，翁武銀，曹敏杰*

(集美大學(xué)生物工程學(xué)院，福建廈門 361021)

在魚糜制品生產(chǎn)過程中，凝膠劣化現(xiàn)象是引起魚糜品質(zhì)下降的重要原因。研究表明，溶酶體中的內(nèi)源性組織蛋白酶B會(huì)促進(jìn)肌原纖維蛋白的降解，進(jìn)而導(dǎo)致魚糜凝膠劣化。迄今為止，多種魚體肌肉中的組織蛋白酶B已有研究，但海水經(jīng)濟(jì)低值魚藍(lán)圓鲹中該酶的情況卻尚未報(bào)道。本研究采用硫酸銨沉淀和柱層析相結(jié)合的方法，從藍(lán)圓鲹肌肉中分離純化得到分子量約為27ku的組織蛋白酶B。酶學(xué)性質(zhì)結(jié)果顯示，該酶最適溫度和最適pH分別為55℃和5.5，半胱氨酸蛋白酶抑制劑E－64能有效抑制其活性。對(duì)肌原纖維蛋白的降解實(shí)驗(yàn)表明，在最適條件下，藍(lán)圓鲹組織蛋白酶B對(duì)肌原纖維蛋白有一定的降解作用。因此，組織蛋白酶B參與肌原纖維蛋白的降解，更可能參與在低pH條件下魚糜凝膠劣化。

藍(lán)圓鲹，組織蛋白酶B，性質(zhì)，肌原纖維蛋白

魚糜制品因口感和風(fēng)味良好受到國內(nèi)外消費(fèi)者的歡迎，2009年我國魚糜制品的總產(chǎn)量為84.7萬t，占總水產(chǎn)加工品總量的5.7%［1］。魚糜制品在生產(chǎn)過程中常在55～60℃的溫度帶內(nèi)產(chǎn)生因肌肉結(jié)構(gòu)蛋白分解，導(dǎo)致的凝膠形成能力明顯下降的現(xiàn)象(凝膠劣化)。凝膠劣化不僅影響魚糜制品的彈性，更影響其商品價(jià)值。目前研究表明，酸性半胱氨酸蛋白酶［2－3］和堿性肌原纖維結(jié)合型絲氨酸蛋白酶［4－5］是導(dǎo)致魚糜劣化的主要內(nèi)源性蛋白酶。其中半胱氨酸蛋白酶主要指存在于肌肉細(xì)胞溶酶體中的組織蛋白酶L、B和H，在魚糜凝膠劣化中起著一定的作用。李樹紅［6］等人認(rèn)為，鰱魚(Hypophthalmichthys molitrix)魚肉經(jīng)漂洗后仍殘留組織蛋白酶L、B和H的活性，其中組織蛋白酶L的殘留率為25.79%，組織蛋白酶B為11.46%，而組織蛋白酶 H只有 6.86%。Jiang等人［2，7］的研究表明，組織蛋白酶 B與 L對(duì)鯖魚(Scomber australasicus)的肌原纖維蛋白有著明顯的降解作用。Liu等人［8］發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶B和L能夠破壞鰱魚魚糜凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，進(jìn)而引起凝膠劣化現(xiàn)象。藍(lán)圓鲹作為一種重要的經(jīng)濟(jì)海水魚類，據(jù)統(tǒng)計(jì)，2009年的總量為54.0萬t［1］。由于海洋魚類資源的持續(xù)減少，海水紅色肉魚已成為有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的魚種。但因其肌肉中紅色肉含量多，脂肪含量高，蛋白酶活性強(qiáng)，鮮度下降快等問題，紅色肉魚類的資源一直沒有得到合理的利用。因此，研究該魚類肌肉中的組織蛋白酶，尤其是探討導(dǎo)致魚體肌肉軟化的組織蛋白酶的性質(zhì)及其與肌原纖維蛋白降解的關(guān)系，可為解決魚糜生產(chǎn)過程中凝膠劣化問題提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮藍(lán)圓鲹(Decapterus maruadsi)、羅非魚(Oreochromis niloticus) 福建省廈門市集美菜市場; SP－Sepharose、Sephacryl S－200 HR層析樹脂 瑞典Amersham Biosciences公司;Z－Phe－Arg－MCA、Z－Arg－Arg－MCA等熒光底物 日本Peptide Institute公司;反－環(huán)氧丁二酰基－L－亮氨酰胺基(4－胍基)(E－64)

美國Amresco公司;Chymostatin、Leupeptin 德國Roche公司;乙二胺四乙酸(EDTA)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、N，N，N＇，N＇－四甲基乙二胺(TEMED)、溴酚蘭 美國Sigma公司;標(biāo)準(zhǔn)蛋白 立陶宛Fermentas公司;十二烷基硫酸鈉(SDS，電泳純)、二硫叔糖醇(DTT)、丙烯酰胺 美國Bio－Rad公司;其他試劑

均為國產(chǎn)分析純。

Avanti JA－25大型高速冷凍離心機(jī) 美國Beckman公司;BioPhotometer紫外分光光度計(jì) 德國Eppendorf公司;FP－6200熒光分光光度計(jì) 日本Jasco公司;G:BOX凝膠成像儀 英國Syngene公司; WB－14恒溫水浴鍋 德國Memmert公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 組織蛋白酶B的分離純化 藍(lán)圓鲹肌肉中組織蛋白酶B的分離純化主要參考Jiang等人［9］的方法，純化過程中的溶液均含有5mmol/L L－半胱氨酸。取新鮮的藍(lán)圓鲹骨骼肌加入4倍魚肉重量的50mmol/L乙酸鈉緩沖液(pH4.5)(緩沖液A)進(jìn)行組織搗碎，在8，000×g離心30min，用四層絹布過濾取其上清液。上清液經(jīng)過30%～70%硫酸銨鹽析后，沉淀用少量的緩沖液A溶解，在相同的緩沖液中充分透析脫鹽。將透析后的樣品上樣于事先用緩沖液A平衡的SP－Sepharose陽離子交換層析柱(2.5cm× 15cm)，緩沖液A流洗去除未吸附的蛋白，再用含0～1mol/L NaCl鹽濃度的緩沖液A進(jìn)行線性洗脫，收集活性峰，用10ku截留膜超濾濃縮。將濃縮后的樣品上樣于用含有0.15mol/L NaCl的20mmol/L Tris－HCl緩沖液(pH7.0)(緩沖液 B)平衡的 Sephacryl S－200 HR凝膠過濾層析柱，收集活性峰，檢測純度及酶活力。

1.2.2 組織蛋白酶B活力的測定 組織蛋白酶活力測定主要參考Barrett等人［10］的方法。組織蛋白酶B以Z－Phe－Arg－MCA和Z－Arg－Arg－MCA為熒光底物，在0.1mol/L的乙酸鈉緩沖液(pH5.5)中進(jìn)行酶活測定，反應(yīng)緩沖液中含1mmol/L EDTA和2mmol/L DTT。

具體步驟如下:在 900μL反應(yīng)緩沖液中，將50μL酶液與50μL濃度為10μmol/L的熒光底物充分混合，在55℃水浴反應(yīng)10min后立刻用1.5mL終止液終止反應(yīng)。反應(yīng)釋放出的7－氨基－4－甲基香豆素(7－amino－4－methycoumarin，AMC)用熒光分光光度計(jì)在激發(fā)光波長為380nm和發(fā)射光波長為450nm下進(jìn)行測定。對(duì)照組的反應(yīng)條件一致，除用緩沖液代替熒光底物。酶活力單位(Units)定義為每分鐘釋放1nmol AMC所需要的酶量。

1.2.3 組織蛋白酶B的性質(zhì)分析

1.2.3.1 溫度對(duì)酶活力的影響 溫度對(duì)酶活力的影響是在0.1mol/L的乙酸鈉緩沖液(pH5.5)中，將組織蛋白酶B在不同溫度(20～70℃)下反應(yīng)10min后，測定其酶活力。以反應(yīng)溫度為橫坐標(biāo)，組織蛋白酶B的相對(duì)酶活力為縱坐標(biāo)作圖。

1.2.3.2 pH對(duì)酶活力的影響 pH對(duì)酶活力的影響是在0.1mol/L不同pH緩沖液(pH3.0～8.0)中，組織蛋白酶B在55℃下反應(yīng)10min，測定其酶活力。以反應(yīng)pH為橫坐標(biāo)，組織蛋白酶B相對(duì)酶活力為縱坐標(biāo)作圖。其中所用不同pH緩沖液為:0.1mol/L乙酸鈉緩沖液(pH3.0～5.5)、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.0～7.0)和0.1mol/L Tris－HCl緩沖液(pH8.0)。

1.2.3.3 底物特異性研究 底物特異性是在0.1mol/L的乙酸鈉緩沖液(pH5.5)中，組織蛋白酶 B與10μmol/L的不同類型的熒光底物混合均勻，按酶活測定方法測定其對(duì)不同類型底物的水解程度。以水解Z－Phe－Arg－MCA熒光底物為對(duì)照。所用熒光底物有:Z－Phe－Arg－MCA，Z－Arg－Arg－MCA，Arg－MCA，Boc－Phe－Ser－Arg－MCA，Boc－Gln－Arg－Arg－MC，Boc－Leu－Arg－Arg－MCA，Suc－Ala－Ala－Pro－Phe－MCA，Suc－Leu－Leu－Val－Tyr－MCA。

1.2.3.4 不同抑制劑對(duì)酶活力的影響 抑制劑對(duì)酶活力的影響是在0.1mol/L的乙酸鈉緩沖液(pH5.5)中，組織蛋白酶B與不同類型的抑制劑混合均勻，在4℃下孵育30min后，測定其剩余的酶活力。對(duì)照樣品的反應(yīng)條件一致，但不加任何抑制劑。所用抑制劑有:E－64、Chymostatin、Leupeptin、EDTA和PMSF。

1.2.4 組織蛋白酶B對(duì)肌原纖維蛋白的作用

1.2.4.1 肌原纖維蛋白的制備 由于藍(lán)圓鲹肌肉肌原纖維蛋白(myofibrillar protein，MF)在55℃下，其自身會(huì)發(fā)生明顯的降解［11］，因此，選擇自身降解較慢的羅非魚肌原纖維為蛋白降解底物更為合理。肌原纖維的制備主要參照Yanagihara等人［12］的方法。具體如下:新鮮藍(lán)圓鲹取其背部肌肉，加入4倍魚肉重量的20mmol/L Tris－HCl緩沖液(pH7.0)進(jìn)行組織搗碎。在8，000×g離心10min，取沉淀部分重復(fù)上述步驟 4次后，沉淀部分用含 0.5mol/L NaCl的20mmol/L Tris－HCl緩沖液(pH7.0)充分溶解，懸濁液在12，000×g離心20min，用絹布過濾，取上清部分，即為肌原纖維蛋白。

1.2.4.2 組織蛋白酶 B對(duì)肌原纖維蛋白降解的影響 在含有0.5mol/L NaCl和5mmol/L L－半胱氨酸的0.1mol/L乙酸鈉緩沖液(pH5.5)中，將50μL濃度為6mg/mL的藍(lán)圓鲹 MF與30μL酶活力單位為20U/mg的組織蛋白酶B充分混合，在55℃下反應(yīng)不同時(shí)間。時(shí)間梯度為:0、15、30、60、120、180、240、300min。孵育不同時(shí)間后，樣品與上樣緩沖液和5%巰基乙醇充分混合，于95℃加熱10min。樣品進(jìn)行SDS－PAGE電泳分析，觀察肌原纖維蛋白的降解情況。

2 結(jié)果與討論

2.1 組織蛋白酶B的分離純化

樣品經(jīng)過預(yù)處理和硫酸銨鹽析后，上樣于SPSepharose陽離子交換層析柱。由圖1(A)可知，目的蛋白吸附于SP－Sepharose層析柱，而大量的雜蛋白未被層析柱吸附，因此該層析柱能有效地將雜蛋白與目的蛋白分開。吸附部分的蛋白質(zhì)用含0～1mol/L NaCl的緩沖液進(jìn)行線性洗脫，有2個(gè)水解Z－Phe－Arg－MCA的酶活峰被洗脫下來。其中，前者為組織蛋白酶B，后者為組織蛋白酶L。在底物特異方面，組織蛋白酶B與L有著明顯的區(qū)別，組織蛋白酶L只分解熒光底物Z－Phe－Arg－MCA，而組織蛋白酶B不僅水解Z－Phe－Arg－MCA，同是也分解Z－Arg－Arg－MCA熒光底物。因此，本研究的目的蛋白組織蛋白酶B約在0.2mol/L NaCl的鹽濃度下被洗脫下來。將活性峰超濾濃縮后上樣于Sephacryl S－200 HR凝膠過濾層析柱，結(jié)果如圖1(B)所示。對(duì)活性部分進(jìn)行電泳分析，由SDS－PAGE電泳圖譜結(jié)果(圖2)可知純化得到分子量約為27ku左右的單一蛋白條帶。有研究結(jié)果表明，魚類肌肉中的組織蛋白酶B的分子量約為24～29ku，比組織蛋白酶L的分子量相對(duì)低。如花腹鯖魚為 28ku［9］，白腹鯖魚(Scomber japonicus)為23ku［13］。根據(jù)分子量和底物特異性的結(jié)果推測本研究純化得到的單一條帶為組織蛋白酶B。從藍(lán)圓鲹肌肉650g中可純化得到0.4mg組織蛋白酶B，得率約為3%，純化倍數(shù)為2619.3倍。

表1 藍(lán)圓鲹組織蛋白酶B的純化表Table 1 Summary of purification of cathepsin B from blue scad(Decapterus maruadsi)

圖1 藍(lán)圓鲹組織蛋白酶B純化柱層析圖Fig.1 Chromatographic purification of cathepsin B from blue scad(Decapterus maruadsi)

2.2 溫度和pH對(duì)酶活力的影響

圖2 藍(lán)圓鲹組織蛋白酶B純化過程的SDS－PAGE圖譜Fig.2 SDS－PAGE of cathespin B from blue scad (Decapterus maruadsi)in the purification processing

如圖3(A)所示，藍(lán)圓鲹肌肉中組織蛋白酶B的最適溫度為55℃。當(dāng)溫度為20℃時(shí)，組織蛋白酶B僅表現(xiàn)出最適溫度時(shí)30%左右的酶活力;當(dāng)溫度為70℃時(shí)，由于高溫引起的蛋白變性，組織蛋白酶B的活性下降很快，僅為最適溫度時(shí)的10%左右。該結(jié)果與Jiang等人［9］從鯖魚中分離出組織蛋白酶B的溫度性質(zhì)表現(xiàn)相似。

如圖3(B)所示，組織蛋白酶B的最適pH為5.5。當(dāng)pH為4.0時(shí)，組織蛋白酶B酶活力相對(duì)較弱，僅有最適pH時(shí)50%的活性;當(dāng)pH大于7.0時(shí)，組織蛋白酶B酶活性下降很快，直至pH8.0時(shí)，該酶幾乎不表現(xiàn)酶活力。鯖魚［9］和大馬哈魚(Oncorhynchus keta)［14］中都得到相似的結(jié)果。因此，魚糜經(jīng)過清水或者堿水漂洗后，組織蛋白酶B的活性有大部分的損失，但是仍然有部分的殘留［6］。由于魚糜凝膠劣化常常發(fā)生在55～60℃的溫度區(qū)域，組織蛋白酶B的最適溫度與該溫度區(qū)域一致，因此，推測殘留的組織蛋白酶B可能在該溫度下表現(xiàn)出一定的酶活力，從而促進(jìn)肌原纖維蛋白的降解。

2.3 底物特異性研究

組織蛋白酶B對(duì)熒光底物的水解作用表現(xiàn)專一。如表2所示，其僅對(duì)組織蛋白酶底物中的Z－Phe－Arg－MCA和Z－Arg－Arg－MCA產(chǎn)生強(qiáng)烈分解，而對(duì)其他類型的熒光底物，包括胰蛋白酶類底物Boc－Glu－Arg－Arg－MCA、Boc－Leu－Arg－Arg－MCA和Boc－Phe－Ser－Arg－MCA、胰凝乳蛋白酶底物Suc－Ala－Ala－Pro－Arg－MCA和Suc－Leu－Leu－Val－Tyr－MCA以及氨肽酶和組織蛋白酶H的底物Arg－MCA都表現(xiàn)出不分解或者分解程度很低。

圖3 藍(lán)圓鲹組織蛋白酶B的最適溫度(A)和最適pH(B) Fig.3 Optimal temperature(A)and pH(B)of cathepsin B from blue scad(Decapterus maruadsi)

底物特異性是區(qū)別組織蛋白酶B與組織蛋白酶L的重要區(qū)別之一。2種組織蛋白酶對(duì)底物的水解作用都十分專一，只分解組織蛋白酶類的底物。但組織蛋白酶L僅分解在P2位為芳香族氨基酸殘基的Z－Phe－Arg－MCA熒光底物［15－16］，而組織蛋白酶B不僅對(duì)Z－Phe－Arg－MCA熒光底物有強(qiáng)烈的分解，對(duì)Z－Arg－Arg－MCA也有明顯的水解作用［9，13］。

表2 組織蛋白酶B的底物特異性Table 2 Substrate specificity of cathepsin B

2.4 不同抑制劑對(duì)酶活力的影響

蛋白酶抑制劑E－64、Leupeptin和Chymostatin對(duì)組織蛋白酶B有強(qiáng)烈的抑制效果。如表3所示。當(dāng)E－64濃度為0.01mmol/L、Chymostatin和 Leupeptin濃度為0.1mmol/L時(shí)，幾乎可以完全抑制組織蛋白酶B的酶活力。Chymostatin和Leupeptin不僅是半胱氨酸蛋白酶抑制劑，同時(shí)也分別是胰凝乳蛋白酶和絲氨酸蛋白酶抑制劑。絲氨酸蛋白酶抑制劑PMSF對(duì)組織蛋白酶B沒有表現(xiàn)明顯的抑制作用。金屬蛋白酶抑制劑EDTA的濃度為20mmol/L時(shí)，對(duì)組織蛋白酶B有微弱的抑制，但當(dāng)其濃度為5mmol/L時(shí)表現(xiàn)出部分激活的作用。EDTA是巰基活性劑，因此證明組織蛋白酶B是一種巰基蛋白酶，該結(jié)果與Masahiro等人［13］對(duì)白腹鯖魚的研究結(jié)果相似。

2.5 組織蛋白酶B對(duì)肌原纖維的作用

本實(shí)驗(yàn)室之前的研究表明，藍(lán)圓鲹肌原纖維蛋白在55℃下自身降解較快［11］，難于判斷外加組織蛋白酶B對(duì)其降解的影響，因此選擇自身降解較慢的羅非魚肌原纖維為實(shí)驗(yàn)原料更為合理。如圖4所示，組織蛋白酶B與羅非魚肌原纖維蛋白在55℃，pH5.5下反應(yīng)，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為120min時(shí)，肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain，MHC)發(fā)生明顯的降解作用。當(dāng)反應(yīng)時(shí)間延長到300min時(shí)，MHC幾乎降解80%。相比于對(duì)MHC的降解，組織蛋白酶B對(duì)肌動(dòng)蛋白和原肌球蛋白的作用并不明顯。因此，組織蛋白酶B較容易作用于MHC的降解，進(jìn)而影響肌原纖維蛋白的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。Jiang等人對(duì)鯖魚的組織蛋白酶B［9］的研究也指出，該蛋白酶對(duì)于鯖魚肌原纖維中的MHC的降解有明顯的促進(jìn)作用［2］，與本研究的結(jié)果相似。

表3 抑制劑對(duì)組織蛋白酶B活力的影響Table 3 Effect of inhibitor on cathepsin B

圖4 藍(lán)圓鲹組織蛋白酶B對(duì)肌原纖維蛋白降解的影響Fig.4 Effect of cathepsin B from blue scad (Decapterus maruadsi)on degradation of myofibrillar proteins

據(jù)報(bào)道，魚糜的凝膠劣化常常發(fā)生在溫度55～60℃。因此，魚體中最適溫度為55～60℃的酶類應(yīng)該受到更多的關(guān)注。組織蛋白酶B與L相似，其最適溫度為55℃［9，16］，該酶是一種熱穩(wěn)定的蛋白酶。在魚糜的生產(chǎn)過程中，魚肉通常在冰水或者低濃度的堿水中反復(fù)漂洗，去除肌漿中的蛋白酶及色素等其它物質(zhì)。組織蛋白酶B不僅是水溶性的蛋白酶，同時(shí)也是酸性蛋白酶。雖然經(jīng)過反復(fù)的漂洗，但是組織蛋白酶B仍不能完全被去除，李樹紅等人［6］的研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過2次清水和1次鹽水漂洗后，鰱魚肌肉中的組織蛋白酶B殘留率為11.46%。這些殘留的組織蛋白酶B仍可能促進(jìn)肌原纖維的降解。雖然眾多研究認(rèn)為組織蛋白酶L在魚體肌原纖維的降解和魚糜凝膠劣化中起著重要的作用［16－17］，但是組織蛋白酶B與L的性質(zhì)相似，該酶在魚體中的作用也十分的重要。Jiang等人［2］研究鯖魚中的肌原纖維降解時(shí)，發(fā)現(xiàn)添加一定量的組織蛋白酶B時(shí)，對(duì)肌原纖維蛋白的降解有著明顯的促進(jìn)作用，因此，認(rèn)為組織蛋白酶B與肌原纖維蛋白的降解也有著密切的關(guān)系，該結(jié)論與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相似。盡管組織蛋白酶B在中性pH下對(duì)蛋白的分解作用比肌原纖維結(jié)合型絲氨酸蛋白酶［4－5］弱，但在其酶學(xué)最適條件下，對(duì)肌原纖維蛋白的分解，尤其是對(duì)MHC，有著明顯的促進(jìn)作用。因此，在魚糜制品生產(chǎn)過程中，抑制殘留的組織蛋白酶B的活性，將有可能減少魚肉肌原纖維蛋白的降解作用，部分解決魚糜凝膠劣化的問題。

3 結(jié)論

從藍(lán)圓鲹肌肉中分離純化得到組織蛋白酶B，其分子量約為27ku，得率約為3%，純化倍數(shù)為2619.3倍。純化的組織蛋白酶B能夠被半胱氨酸蛋白酶抑制劑E－64、Leupeptin和Chymostatin強(qiáng)烈抑制。同時(shí)，低濃度的EDTA可以激活組織蛋白酶B的酶活力，推測組織蛋白酶B也是一種巰基蛋白酶。在溫度為55℃和pH5.5時(shí)，組織蛋白酶B表現(xiàn)最大的酶活力。在該條件下，組織蛋白酶B能夠促進(jìn)肌原纖維蛋白的降解作用，尤其是肌球蛋白重鏈(MHC)的分解。

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Purification and characterization of cathepsin B from the skeletal muscle of blue scad(Decapterus maruadsi)

ZHONG Chan，SHEN Jian－dong，CAI Qiu－feng，WENG Wu－yin，CAO Min－jie*(College of Biological Engineering，Jimei University，Xiamen 361021，China)

During the manufacturing process of surimi，the modori phenomenon was an important factor that affected the final quality of the products.According to current studies，cathepsin B in the lysosome played a significant role in the degradation of myofibillar proteins.Cathepsin B in the muscle of various species of fish had been investigated.However，cathepsin B in marine fish blue scad(Decapterus maruadsi)was infrequently reported.In the present study，cathepsin B was purified by ammonium sulfate precipitation and a series of column chromatographies.SDS－PAGE showed that the molecular mass of the purified enzyme was about 27ku.The optimal temperature and pH of the enzyme were 55℃ and 5.5，respectively.Cathepsin B was effectively inhibited by cysteine proteinase inhibitor E－64.Under optimal conditions，cathepsin B could promote the degradation of myofibrillar proteins.Therefore，cathepsin B might participate in not only degradation of myofibrillar proteins，but also modori at acidic pH range.

Decapterus maruadsi;cathepsin B;characterization;myofibrillar protein

TS201.2+5

A

1002－0306(2012)10－0108－05

2011－10－13 *通訊聯(lián)系人

鐘嬋(1986－)，女，碩士研究生，主要從事食品生物技術(shù)方面的研究。

國家自然科學(xué)基金(31071519);廈門市科技計(jì)劃項(xiàng)目(3502Z20111042)。