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翡翠貽貝粗多糖降血脂作用的研究

2012-10-25 08:39:34李孟婕范秀萍吳紅棉胡雪瓊
食品科學 2012年1期
關鍵詞:小鼠劑量血清

李孟婕,范秀萍,吳紅棉*,胡雪瓊

(廣東海洋大學食品科技學院,廣東 湛江 524025)

翡翠貽貝粗多糖降血脂作用的研究

李孟婕,范秀萍,吳紅棉*,胡雪瓊

(廣東海洋大學食品科技學院,廣東 湛江 524025)

目的:研究翡翠貽貝粗多糖(PCP)對高脂血癥小鼠的降血脂作用及其機制。方法:取雄性昆明小鼠72只,每組12只。隨機分正常對照組(灌飼生理鹽水)、模型對照組(灌飼生理鹽水)、陽性對照組(灌飼辛伐他汀5mg/kg) 、翡翠貽貝粗多糖低劑量組(50mg/(kg·d))、中劑量組(100mg/(kg·d))、高劑量組(200mg/(kg·d))。正常對照組小鼠從實驗開始至結束用普通飼料喂養,其他5組小鼠均喂高脂飼料。30d后測定小鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和一氧化氮(NO)含量,肝臟TC、TG含量,血清卵磷脂膽固醇酰基轉移酶(LCAT)以及血清和肝臟脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)活性。結果:翡翠貽貝粗多糖能明顯降低模型小鼠血清TC、TG、LDL-C含量和動脈粥樣硬化指數(AI)(P<0.01),顯著降低肝臟TC含量(P<0.01)、TG含量(P<0.01),提高血清HDL-C含量和NO含量(P<0.01),提高血清LCAT、血清和肝臟HPL、HL活性(P<0.01)。結論:翡翠貽貝粗多糖對小鼠有顯著的降血脂效應,該作用可能與翡翠貽貝粗多糖能明顯增強LCAT、LPL、HL酶活性,提高HDL-C、NO水平有關。

翡翠貽貝粗多糖;小鼠;高脂血癥

血脂濃度升高會增加心血管疾病的發生風險和冠心病患者的死亡率,是冠心病發生的一個獨立危險因素[1-2]。如何調節脂質代謝、預防心腦血管疾病的發生,已成為科研工作者研究的熱點。目前較常用的調血脂藥(如苯氧乙酸類、煙酸酯類、他汀類),如果長期使用對肝功能有一定損害作用。因此,從海洋中尋找有效低毒的降血脂藥一直受到人們的關注。

翡翠貽貝是海產雙殼貝類,俗稱青口螺,其干制品統稱淡菜,有很好的藥用和食療功效。現代藥理學研究表明,從貽貝中提取到的多種活性成分,具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用[3],但目前對翡翠貽貝粗多糖降血脂活性還未見報道,本實驗對翡翠貽貝粗多糖對小鼠降血脂作用進行探討,為其開發成為免疫調節保健食品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

翡翠貽貝,購自湛江市東風市場。

昆明種SPF級小白鼠,全雄性,體質量18~22g,由湛江422醫院提供。高脂飼料[4]:基礎飼料加膽固醇2%、膽鹽0.4%。

總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-膽固醇 (HDL-C)、低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)試劑盒 中生北控生物科技有限公司;一氧化氮(NO)、卵磷脂膽固醇酰基轉移酶(LCAT) 、脂蛋白脂酶/肝脂酶(LPL/HL)試劑盒 南京建成生物工程研究所;膽固醇 國藥集團化學試劑有限公司;三號膽鹽 北京奧博星生物技術有限公司;辛伐他汀 濟南利民制藥有限責任公司;其他試劑均為國產分析純。

ES-500E電子天平 長沙湘平科技發展有限公司;Anke TGL-16GB高速離心機、TDL-5-A臺式離心機 上海安亭科學儀器廠;722s型分光光度計 上海精密儀器儀表有限公司;YLE-2000數顯式電熱恒溫水浴鍋 上海躍進醫療器械廠; Multiskan Mk3酶標儀 熱電(上海)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 翡翠貽貝粗多糖的制備流程

翡翠貽貝全臟器→解凍、勻漿→雙酶酶解→單層紗布過濾→脫色→雙層紗布過濾→離心除雜蛋白→上清液醇沉→分離→洗滌→干燥→等電點去蛋白→超濾脫鹽濃縮→翡翠貽貝粗多糖(PCP)

藥物臨床試驗數據核查是一項全新的工作,時間緊、任務重、專業性要求高,且備受社會各界關注。研究核查處克服困難,創造性地開展了工作,確保了藥物臨床試驗數據核查穩妥有序開展。針對試驗過程中的關鍵數據,他們開發藥物臨床試驗數據自查報告填報系統,增強篩選被檢查對象的有效性;制定了與國際標準接軌的核查要點和判定原則,建立了符合WHO標準的臨床試驗檢查體系;并制定了嚴謹的工作程序,做到了檢查公開透明、公平公正。

1.2.2 高脂血癥動物模型的建立及分組

小鼠隨機分為正常對照組、模型對照組、陽性對照組和翡翠貽貝粗多糖3個劑量的實驗組,每組12只。在實驗環境下小鼠喂基礎飼料觀察5d,除正常對照組外,其余各組于實驗的首日開始給予高脂飼料,同時灌胃給受品。每天上午9點進行灌胃,實驗組灌胃翡翠貽貝粗多糖(劑量分別為50、100、200mg/(kg·d)),陽性對照組灌胃辛伐他汀(劑量為5mg/(kg·d)),正常和模型對照組灌胃生理鹽水,灌胃體積為1mL/100g,連續30d。于末次給藥后,小鼠禁食不禁水16h,摘眼球取血,離心獲得血清。取相同部位肝臟,用生理鹽水制備10%肝勻漿,離心取上清。按照試劑盒操作說明測定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、NO和LCAT含量,血清和肝臟LPL、HL含量。并計算動脈粥樣硬化指數(AI)。

1.2.3 肝臟中脂質含量測定

參照文獻[5]方法,制備肝臟勻漿,以氯仿和甲醇混合液(體積比1:1)抽提肝臟脂質,離心取上清液,參照TC試劑盒和TG試劑盒方法,分別測定肝臟TC和TG含量。

1.2.4 臟器指數

實驗結束后,小鼠處死后稱質量計算。

1.2.5 數據統計分析

2 結果與分析

2.1 翡翠貽貝粗多糖對小鼠各生長指標的影響

表1 翡翠貽貝粗多糖對小鼠各生長指標的影響(±s,n=12)Table 1 Effect of PCP on growth indicators of mice (±s,n=12)

表1 翡翠貽貝粗多糖對小鼠各生長指標的影響(±s,n=12)Table 1 Effect of PCP on growth indicators of mice (±s,n=12)

體質量/g組別 初始 第1周 第2周 第3周 第4周 最終 體質量增長量/g 平均攝食量/(g/d)正常對照組 20.57±1.36 25.89±1.57 33.44±1.93 38.78±2.02 47.30±2.06 45.47±2.07 24.90±3.28 3.80±0.17模型對照組 20.94±1.09 28.03±1.90 35.64±1.89 39.36±1.90 48.04±1.42 47.05±1.69 26.11±2.76 3.61±0.16陽性對照組 20.38±1.29 26.43±1.25 34.57±2.00 38.55±2.11 47.06±1.55 45.71±0.94 25.34±1.60 3.63±0.18低劑量組 21.13±1.85 25.89±1.57 33.26±1.24 38.78±2.02 46.36±2.59 45.08±2.71 23.95±2.67 3.79±0.05中劑量組 20.73±1.65 27.39±1.55 33.56±1.82 37.57±2.56 46.11±3.01 44.92±2.15 24.19±2.45 3.72±0.11高劑量組 20.94±1.70 25.93±2.99 33.92±0.92 38.61±2.55 46.38±2.14 45.06±1.62 24.12±2.50 3.58±0.05

表2 翡翠貽貝粗多糖對小鼠各臟器指數的影響(±s,n=12)Table 2 Effect of PCP on viscera indice of mice (±s,n=12)

表2 翡翠貽貝粗多糖對小鼠各臟器指數的影響(±s,n=12)Table 2 Effect of PCP on viscera indice of mice (±s,n=12)

注:#. 與正常對照組比較,有顯著性差異(P<0.05);##.與正常對照組比較,有極顯著性差異(P<0.01);*. 與模型對照組比較,有顯著性差異(P<0.05);**. 與模型對照組比較,有極顯著性差異(P<0.01);Δ. 與陽性對照組比較,有顯著性差異(P<0.05);Δ Δ. 與陽性對照組比較,有極顯著差異(P<0.01)。下同。

組別 心指數 肝指數 腎指數 腦指數 脾指數正常對照組 0.4912±0.0772 5.009±1.4024* 1.6152±0.1585** 1.0263±0.0127 0.2064±0.0301模型對照組 0.5313±0.0638 5.9922±0.5780# 1.3284±0.1323##△ 0.9919±0.0325 0.2601±0.0403陽性對照組 0.5469±0.0219 5.1152±0.4210 1.5795±0.0279* 1.0428±0.0551 0.2040±0.0267低劑量組 0.4363±0.0840 5.5315±0.6242 1.4024±0.0215# 1.0130±0.0339 0.2363±0.0461中劑量組 0.5120±0.1178 5.0999±0.5637* 1.5274±0.0355* 1.0463±0.0223 0.2067±0.028高劑量組 0.4808±0.0559 5.0049±0.4307* 1.5776±0.1266* 1.0060±0.0339 0.2568±0.0052

由表1可知,各劑量組分別與正常對照組、模型對照組和陽性對照組比較,體質量無明顯變化(P>0.05),各組攝食量也無明顯變化(P>0.05)。說明翡翠貽貝粗多糖對小鼠體質量增長和攝食量無影響,可初步斷定食用翡翠貽貝粗多糖并未妨礙小鼠的生長和攝食量。

2.2 翡翠貽貝粗多糖對小鼠各臟器指數的影響

臟器指數常能反映實驗動物總的營養狀態和內臟的病變情況,不同齡期動物的臟器指數有一定的規律,如接觸外來物質致使動物的某個臟器受到損害,臟器指數將發生變化,臟器指數有經濟、有效、靈敏的特點。

由表2可知,翡翠貽貝粗多糖對心、腦、脾指數影響不大,對肝、腎指數影響較大,高脂飼料可導致肝指數升高、腎指數降低,而在灌胃翡翠貽貝粗多糖后可以改善這種變化。和正常對照組相比,模型對照組的肝指數升高(P<0.05),腎指數降低(P<0.01)。和模型對照組相比,中、高劑量組可以顯著降低肝指數(P<0.05),提高腎指數(P<0.05)。

2.3 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清和肝臟TC、TG含量的影響

由表3可見,造模后,與正常組比較,小鼠血清和肝臟中的TC和TG含量都有明顯的升高(P<0.01),顯示造模成功。低劑量組血清TC、TG含量顯著的低于模型對照組(P<0.05,P<0.01),中、高劑量組血清和肝臟TC、TG含量極顯著低于模型對照組(P<0.01),說明翡翠貽貝粗多糖能有效降低小鼠血清和肝臟TC、TG含量;翡翠貽貝粗多糖血清和肝臟各劑量組與正常對照組相比,高劑量組無明顯差異(P>0.05);與陽性對照組相比,血清和肝臟低劑量組有極顯著差異(P<0.01),高劑量組無差異(P>0.05)。可見翡翠貽貝粗多糖能有效預防高血脂小鼠血清和肝臟TC、TG含量的升高,降低TC、TG值作用明顯,肝臟TC、TG降低說明翡翠貽貝粗多糖能有效調節小鼠肝臟脂質代謝,減少脂質的積累。此結果也說明翡翠貽貝粗多糖對脂肪肝具有一定的療效。

2.4 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清HDL-C、LDL-C含量和AI的影響

表3 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清和肝臟TC、TG含量的影響(±s,n=12)Table 3 Effect of PCP on TC and TG levels in mouse serum and liver (±s,n=12)

表3 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清和肝臟TC、TG含量的影響(±s,n=12)Table 3 Effect of PCP on TC and TG levels in mouse serum and liver (±s,n=12)

組別 血清TC含量/(mmol/L) 肝臟TC含量/(mmol/mg pro) 血清TG含量/(mmol/L) 肝臟TG含量/(mmol/mg pro)正常對照組 4.14±0.52** 5.51±0.41** 1.50±0.51** 3.09±0.31**模型對照組 6.54±0.59##ΔΔ 10.18±1.54##ΔΔ 2.67±0.33##ΔΔ 7.23±1.23##ΔΔ陽性對照組 4.69±0.69#** 5.92±0.35** 1.63±0.10** 3.48±0.43**低劑量組 5.84±0.44##*△△ 9.33±0.54##ΔΔ 2.21±0.15##**ΔΔ 6.69±0.68##ΔΔ中劑量組 4.95±0.52##** 7.59±0.94##**ΔΔ 1.75±0.10** 4.70±0.58##**ΔΔ高劑量組 4.53±0.39** 5.99±0.64** 1.69±0.15** 3.62±0.33**

表4 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清HDL-C、LDL-C含量和AI的影 響 (x- ± s,n=12)Table 4 Effect of PCP on serum HDL-C and LDL-C and AI of mice(x-± s,n=12)

由表4可知,高劑量組、陽性對照組與正常對照組比較,血清中HDL-C含量無明顯差異(P>0.05),翡翠貽貝粗多糖中、高劑量組血清HDL-C含量極顯著高于模型對照組(P<0.01),說明一定劑量的翡翠貽貝粗多糖能夠有效提高小鼠血清中HDL-C含量。模型對照組血清LDL-C含量極顯著高于正常對照組(P<0.01),說明小鼠食用高脂飼料能顯著提高血清LDL-C含量。低、中、高各劑量組血清LDL-C含量極顯著低于模型對照組(P<0.01),這表明一定劑量翡翠貽貝粗多糖能夠有效降低血清LDL-C含量。

由此可見,翡翠貽貝粗多糖對高血脂的小鼠血清中HDL-C含量有明顯提高作用,對LDL-C含量有明顯降低作用,從而降低動脈粥樣硬化的危險指數。

2.5 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清NO含量和LCAT活性的影響

表5 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清NO、LCAT的影響(x-± s,n=12)Table 5 Effect of PCP on serum NO and LCAT of mice(±s,n=12)

表5 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清NO、LCAT的影響(x-± s,n=12)Table 5 Effect of PCP on serum NO and LCAT of mice(±s,n=12)

組別 NO含量/ LCAT活力/(μmol/L) (μmol/(L·min))正常對照組 51.18±4.42** 4.92±1.40**模型對照組 31.14±6.81##ΔΔ 2.91±1.05##ΔΔ陽性對照組 47.02±5.41** 4.50±0.38**低劑量組 43.85±3.40##** 3.44±0.78##Δ中劑量組 46.60±3.40#** 4.01±0.32#*高劑量組 47.60±3.46** 4.62±0.36**

高脂血癥小鼠血清TC、TG升高,動脈受損,內皮素合成及釋放增加,從而導致NO合成減少。由表5可知,模型對照組與正常對照組比較,NO含量明顯降低(P<0.01)。低、中、高劑量組和陽性對照組都明顯升高,與模型對照組之間有極顯著性差異(P<0.01),高劑量組、陽性對照組與正常對照組之間無差異性(P>0.05)。

LCAT酶是體內脂蛋白代謝的關鍵酶之一,此酶活力的下降可導致高脂血癥及AS。與正常對照組相比,模型對照組LCAT活力極顯著降低(P<0.01)。與模型對照組比較,中、高劑量組的LCAT活力也有顯著差異(P<0.05,P<0.01),且高劑量組與正常對照組無顯著差異(P>0.05),表明翡翠貽貝粗多糖有提高高脂小鼠LCAT活力作用,且劑量越高效果越明顯。

2.6 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清和肝臟LPL、HL活性的影響

表6 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清和肝臟 LPL、HL活性的影響(x-± s,n=12)Table 6 Effect of PCP on the activities of LPL and HL in mouse serum and liver (±s,n=12)

表6 翡翠貽貝粗多糖對小鼠血清和肝臟 LPL、HL活性的影響(x-± s,n=12)Table 6 Effect of PCP on the activities of LPL and HL in mouse serum and liver (±s,n=12)

組別 血清LPL活力/ 肝臟LPL活力/ 血清中HL活力/ 肝臟HL活力/(U/mL) (U/mg pro) (U/mL) (U/mg pro)正常對照組 23.39±3.59** 12.56±1.54** 7.35±0.81** 17.90±0.95**模型對照組 15.56± 1.29##ΔΔ 8.51± 1.89##ΔΔ 5.31± 1.01##ΔΔ 13.73±2.02##ΔΔ陽性對照組 21.60±1.93** 12.01±2.18** 7.12±0.93** 16.04±1.74**低劑量組 18.5±1.60##*Δ 9.89±0.84##Δ 6.35±0.71#* 14.70±0.91##中劑量組 20.25±2.69#** 11.46±2.06** 6.99±1.23** 15.89±1.23#**高劑量組 21.03±2.22** 11.59±2.77** 7.09±0.80** 16.75±1.26**

由表6可見,高脂血癥小鼠血清和肝臟LPL、HL酶活力極低于正常小鼠(P<0.01);使用翡翠貽貝粗多糖后,中、高劑量組的LPL、HL酶活性明顯改善,與模型對照組比較有極顯著差(P<0.01),高劑量組與正常對照組差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

高脂血癥是中老年常見病,是促進動脈粥樣硬化和危及人類健康的冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CHD)的主要危險因素之一,血脂異常的防治已經成為冠心病一級和二級預防的重要手段[6-7]。另外,血脂的降低已被證實可以減慢已形成的粥樣硬化斑塊的進展,甚至使其消退,并有可能減低冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的病死率[8-9]。

已證實,血清TC和LDL-C水平的升高與動脈粥樣硬化的發生成正相關[10],而肝臟中脂質含量異常升高會導致脂肪肝的產生及肝臟功能的損傷。翡翠貽貝粗多糖能有效改善模型小鼠血脂水平,減少肝臟TC和TG的蓄積,降低動脈粥樣硬化指數。

NO由血管內皮細胞產生和分泌的,對小鼠的研究表明,內皮源性NO缺乏是致AS的重要因素[11],在AS的各個發病階段中幾乎都存在NO生物活性的異常。NO可促進血管平滑肌細胞的凋亡,使血管舒張,并可抗氧化還原反應,減緩動脈硬化進程[12]。可見,調控NO活性已經是對AS進行預防和治療的必要途徑。

LCAT是催化膽固醇與不飽和脂肪酸進行酯化的一種酶,它在HDL-C的代謝和膽固醇的逆向轉運中起著重要的作用。當LCAT活性降低時,血脂代謝紊亂,將造成膽固醇積聚,促使動脈粥樣硬化的形成和發展。

LPL是調節脂蛋白代謝的一種關鍵酶,能使TG水解,釋出游離脂肪酸(FFA)。通過提高LPL的活性可以抑制動脈粥樣硬化的發生發展[13]。

H L是主要在肝細胞中合成,能水解各種脂蛋白中的甘油三酯和磷脂,肝細胞膜上的肝脂酶作為配體能與多種脂蛋白結合表現出抗動脈粥樣硬化的作用[14]。

本實驗發現翡翠貽貝粗多糖對高脂血癥小鼠血清的TC、TG、LDL-C,肝臟TC、TG均有降低作用,而對血清HDL-C、NO有升高作用;血清和肝臟LPL、HL以及血清LCAT活性均較高脂對照組有明顯提高,能有效調節高脂小鼠血清和肝臟脂質代謝。由此,不難看出翡翠貽貝粗多糖有顯著的降血脂效應,其機理可能是通過提高降酯酶HL、LPL、LCAT的活性,降低血清和肝臟TC、TG,促進血清HDL-C的生成,調節NO的平衡來改善血管內皮功能障礙,進而預防動脈粥樣硬化發生、發展。可以預想,翡翠貽貝粗多糖對治療高脂血癥、預防動脈粥樣硬化、冠心病等方面是具有廣闊的開發前景的,有望成為一種新型調節血脂的保健食品。

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Hypolipidemic Effect of Crude Polysaccharides fromPerna viridis

LI Meng-jie,FAN Xiu-ping,WU Hong-mian*,HU Xue-qiong
(College of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524025, China)

Objective: To investigate the hypolipidemic effect of crude polysaccharides fromPerna viridis(PCP) in hyperlipidemic mice and its mechanisms. Methods: Totally 72 Kunming male mice were arbitrarily divided into normal control group, hyperlipidemia model group, positive control group, PCP low-dose group, PCP medium-dose group, and PCP high-dose group. The normal control group was fed normal diet and other five groups were fed high-dat diet. The normal control group and model control group were administered with the same volume of normal saline and the positive control group with simvastatin tablet at the dosages of 5 mg/kg. The low, medium and high dose groups were administered with crude polysaccharides fromPerna viridisat the dosages of 50, 100 mg/kg and 200 mg/kg, respectively. All the administrations were carried out once a day for 30 days. The contents of serum total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C), high density lipoprotein-cholesterol (HDL-C) and NO, the contents of liver TC and TG, and the activities of serum lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT) as well as lipoprotein lipase (LPL) and hepatic lipase (HL) in the serum and liver were determined after the last administration. Results: Crude polysaccharides fromPerna viridiscould decrease the contents of serum TC, TG and LDL-C and AI, increase the contents of serum HDL-C and NO, reduce the contents of liver TC and TG, and enhance the activities of serum LCAT and the activities of HPL and HL in the serum and liver. Conclusion: Crude polysaccharide fromPerna viridiscan significantly decrease blood lipid and the mechanism may be related to the improved activities of LCAT and LPL and increased levels of HDL-C and NO.

crude polysaccharide fromPerna viridis;mice;hyperlipidemia

TS254.1

A

1002-6630(2012)01-0257-05

2011-02-11

廣東海洋大學自然科學研究項目(0612258)

李孟婕(1986—),女,碩士研究生,研究方向為海洋生物活性物質。E-mail:limengjie86@163.com

*通信作者:吳紅棉(1953—),男,教授,碩士,研究方向為海洋生物活性物質。E-mail:hxwz247@163.com

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