復方卡波姆誘導的兔慢性高眼壓模型探討

方麗 陳獻花 李家忠 李雪來 趙金川 （浙江省醫療器械檢驗所 杭州 310009）

?

復方卡波姆誘導的兔慢性高眼壓模型探討

方麗 陳獻花 李家忠 李雪來 趙金川 （浙江省醫療器械檢驗所 杭州 310009）

采用新西蘭兔16只，每只兔的左眼為模型眼，右眼為對照眼。注入復方卡波莫溶液0.3ml，測量眼壓、角膜厚度并觀察兔眼的變化。結果表明，16只兔均造模成功，在手術4周內平均眼壓值為23~25mmHg，術后4周的實驗眼平均眼壓仍有23.17mmHg，對照眼為14.33 mmHg，2組相比較有顯著性差異(P<0.05)。因此，兔眼前房注射復方卡波姆是一種理想的慢性高眼壓模型。

高眼壓 模型 動物 卡波姆

青光眼是一種以視神經損害和視野缺損為特征的致盲眼病，其發病機制目前尚不十分明確，普遍認為眼壓升高是青光眼視神經損害發生和發展機制中最主要的危險因素[1]。通過實驗方法誘導動物高眼壓，是研究其發病機制的主要手段，而建立有效穩定的高眼壓模型是進行研究的關鍵[2]。因此，筆者在2010年9~11月用復方卡波姆誘導，建立兔眼慢性高眼壓模型，以眼壓、并發癥及病理檢查作為觀察指標，評價其建模效果。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器 含0.3%卡波姆和0.025%地塞米松的復方卡波姆溶液，pH值4，卡波姆(山東正大福瑞達藥液集團生產)，0.5%地塞米松(廣州白云山天心制藥有限公司生產)；手持接觸眼壓計(美國Reichert公司)；裂隙燈顯微鏡(蘇州六六視覺科技有限公司)；角膜A型超聲測量儀(美國Alcon公司)；Nikon ECLIPSE E200光學顯微鏡。

1.2 試驗動物及分組 新西蘭兔16只，雌雄不限，體重2~3kg，兔齡12周。由浙江省農業科學院畜牧獸醫研究所提供[SCXK(浙)2008-0025]。造模前用裂隙燈顯微鏡、眼底鏡檢查眼前段及眼底無異常。每只動物的左眼為模型眼，右眼為對照眼。

1.3 方法 新西蘭兔耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，0.4%倍諾喜眼液(鹽酸奧布卡因)液滴眼局部麻醉。試驗眼注射復方卡波姆溶液前，先在對側角膜緣穿刺，然后注入復方卡波姆溶液0.3ml。對照眼單純角膜緣穿刺。測量眼壓、角膜厚度并觀察兔眼的變化。手術4周后耳緣靜脈注射空氣處死動物，取雙側眼球，常規固定、脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，光學顯微鏡觀察。

1.4 試驗數據統計學處理 所獲數據作配對資料的t檢驗，使用excel進行數據統計分析，顯著標準P=0.05。

2 結果

2.1 眼壓變化 試驗前雙眼眼壓無明顯差異(P>0.05)，基線眼壓為12.58mmHg，試驗眼術后平均眼壓為37.3mmHg，眼壓峰值為55.5mmHg，時間為術后8h，術后4周的平均眼壓為23.17mmHg，對照眼為14.67mmHg，兩組相比差異顯著(P＜0.05)。

表1 實驗眼、對照眼眼壓比較 (mmHg)

注：試驗眼與對照眼相比，術后各時間段差異顯著(P＜0.05)。

2.2 眼前部、角膜變化 試驗眼前房注射后均出現不同程度的睫狀充血、角膜水腫及前房混濁。1周左右達到高峰，角膜厚度為902.33mm，后逐漸下降，4周時仍有463.67mm，與術前395.67mm相比差異顯著(P＜0.05)。

表2 試驗眼、對照眼角膜中心厚度比較 (mm)

注：試驗眼與對照眼相比，術后各時間段差異顯著(P＜0.05)。

2.3 眼組織病理改變 試驗眼角膜上皮組織有增生，可見少量淋巴細胞浸潤，部分小梁網纖維組織增生，變致密(圖1、2)。對照眼未見明顯異常(圖3、4)。

圖1 試驗組(HE×40)

圖2 試驗組(HE×100)

圖3 對照組(HE×40)

圖4 對照組(HE×100)

3 討論

青光眼作為人類主要致盲性眼病之一，對青光眼的發病機制、發展過程并不是十分明確，有效治療手段也欠缺，需要進行大量的動物實驗進行探討。選擇方法簡單、成本低廉、易于操作、易于控制、眼壓穩定的理想青光眼實驗動物模型十分必要。目前國內外建立實驗性青光眼模型的方法大致可分為3類[3]：一是破壞小梁結構，引起房水流出受阻導致高眼壓的方法，如高滲鹽水注入房水靜脈，以及激光破壞小梁網組織等；二是從眼球外部來妨礙房水正常引流的方法，如增加上鞏膜靜脈壓力升高眼，結扎渦靜脈、結扎眼球后部的血管、熱灼燒或化學燒灼角膜緣結膜下組織、硅膠帶眼球環扎術等；三是阻塞房角流出道引起的高眼壓法，如前房內注入甲基纖維素、a糜蛋白酶、血影細胞、空氣、礦物油等。

復方卡波姆誘導的兔慢性高眼壓模型即為含0.3%卡波姆和0.025%地塞米松的復方卡波姆溶液注入前房阻塞房角流出道引起的。卡波姆是內烯酸與烯內基蔗糖或季戊四醇交鏈而成的高分子聚合物，是一種優良的藥劑新輔料[4]。有良好的乳化性、增稠性、助懸性和成膜性。當ph值較低時呈溶液狀，隨著ph值的升高，藥液的黏稠度逐漸增加而形成水凝膠狀；而當ph值為6~12時最為黏稠；在高眼壓模型中主要應用的是該藥的黏合性、凝膠性、增稠性等特點，使注入前房的卡波姆溶液在房水作用下隨著ph值的升高變為凝膠狀阻礙房水排出。將卡波姆液中加入地塞米松的目的：一是增加眼壓升高的幅度及延長眼壓升高的時間，二是減輕眼部炎性反應。而對側角膜緣穿刺形成一個針孔，是由于注入復方卡波姆溶液過程中，眼內容物突然增加，會造成眼內壓急劇升高，房水在過高的壓力下會自動從此針孔中滲漏出，防止兔眼角鞏膜擴張。

本試驗由復方卡波姆溶液誘導的高眼壓模型，操作簡單，眼壓升高穩定，4周后仍有23.17mmHg，持續時間長。雖然由于眼壓升高和炎癥刺激出現不同程度的睫狀充血、角膜水腫及前房混濁等情況，但大部分持續一段時間后可減輕或消失。試驗術后8h眼壓即達到峰值，但角膜水腫情況為1周時最高，3周時結膜充血及前房滲出已經不明顯，角膜厚度雖然仍比正常為高，但角膜已經完全透明，眼壓仍高，還可持續較長時間，可進行青光眼實驗研究。同時本實驗病理改變顯示部分小梁網纖維組織增生，變致密，從病理上間接證明慢性青光眼模型建立成功。

兔作為實驗動物，其成本低廉，雖然其房角與人的房角有明顯的形態學差異，如梳狀韌帶、狹窄薄弱的睫狀肌系統以及鞏膜靜脈叢，但兔的房水外流通道卻和人眼一樣，而且由于兔眼大小接近于人眼，可用于觀察手術對高眼壓模型的降眼壓作用，是理想的青光眼模型動物。

[1] van Buskirk EM. Coiffi glaucomatous optic neuropathy[J]. Am Ophthalmol 1992,113(4): 447-451.

[2] 徐巖, 陳祖基, 宋潔貞. 復方卡波姆誘發的兔高眼壓模型與其它兔高眼壓模型的比較研究[J]. 中華眼科雜志, 2002, 38(3): 172-175.

[3] 陳曄, 崇曉霞. 慢性高眼壓動物模型的研究進展[J].內蒙古醫學雜志, 2008, 40(5): 519-522.

[4] 羅明生, 高天惠. 藥劑輔佐大全[M]. 成都: 四川科學技術出版社, 1995: 383-386.

（2011–11–03）

浙江省實驗動物科研計劃項目2008F80008

S858.291

A

1007-1733(2012)01-0011-02