羊躑躅果實水煎液聯合美托洛爾降壓調脂作用研究

黃幀檜， 崔衛東， 張年寶， 丁伯平

（皖南醫學院藥理學教研室及中藥藥理國家三級實驗室，安徽 蕪湖 241002）

杜鵑花科植物羊躑躅廣泛分布于長江流域，其花、葉、根均可入藥，有鎮痛、免疫、解熱和降壓的功效［1-2］，在發揮以上積極治療作用的同時也具有一定的毒性，可出現行走困難、下肢癱瘓、呼吸急促甚至死亡［3］。β受體阻斷劑是抗高血壓常用藥，美托洛爾由于缺乏內在擬交感活性，長期應用會引起血脂升高。但羊躑躅果實水煎液與美托洛爾聯合應用的效果未見報道，本研究旨在探討羊躑躅果實水煎液聯用美托洛爾是否可以在減少各用藥劑量、減輕不良反應的同時，能夠達到與單用各藥相似的降壓作用，并且有效地調節血脂，并分析其可能的作用機制。

1 實驗材料和方法

1.1 實驗動物 雄性SHR大鼠32只(12周，體質量230～250 g)，飼養條件:溫度(23±2)℃，相對濕度60% ～65%，自然光照，自由飲食進水。動物購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號:SCXK(京)2006-0009。飼料購于南京青龍山實驗動物中心。

1.2 藥物與試劑 羊躑躅果實1 kg購自亳州華申藥業有限公司(中藥材經營資格證號:Z34200300258)，為道地藥材，經水熬煮濃縮［4］(含生藥1 g/1 mL)，制成羊躑躅果實水煎液；美托洛爾(批號H32025391)由阿斯得康制藥有限公司生產；考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒、NO、MDA、ET-1、ANGⅡ試劑盒均購自南京建成生物有限公司。

1.3 儀器 日立7600型全自動生化分析儀；TGL-16G-A冷凍離心機；UV-9100分光光度計；ALC-NIBP無創尾動脈血壓測定分析系統等。

1.4 方法 32只SHR大鼠適應性喂養一周后隨機分為4組:美托洛爾組(給藥劑量為5.8 mg/kg)、羊躑躅果實水煎液組(水煎液組，給藥劑量為1.5 g/kg)［5］、羊躑躅果實水煎液聯合美托洛爾組(聯用組，給藥劑量為羊躑躅果實水煎液0.75 g/kg、美托洛爾2.9 mg/kg)、模型組和 Wistar-kyoto大鼠空白組(模型組和空白組給予同容積生理鹽水)，每組8只。每天上午10點灌胃給藥(1.0 mL/100 g)，每天一次，連續4周。尾袖法測大鼠尾動脈血壓，給藥前測一次，以后每周測一次(每次測量3次，取平均動脈壓)。給藥4周后，用25%烏拉坦(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，腹主動脈取血后，迅速取出腎臟。血液注入含10%EDTA-Na230 μL和抑肽酶40 μL的試管中，4℃，3000 r/min離心 10 min，分離血漿，－20℃保存，待測血脂、MDA、ET-1及NO。取出一側腎臟留作HE及Masson染色，觀察腎臟組織形態學變化及半定量評分。評分方法為:光學顯微鏡下統一放大10×20倍，觀察腎臟組織形態。每張切片隨機選取10個視野，觀察腎臟纖維化程度，將其分成0～3級并予評分:0為正常腎臟組織，膠原占視野面積小于5%，評為0分；1為輕度纖維化，膠原蛋白占視野面積小于10%，評為1分；2為中度纖維化，膠原蛋白占視野面積11% ～20%，有少量炎性細胞浸潤，評為2分；3為重度纖維化，膠原蛋白占視野面積大于20%，且有明顯炎性細胞浸潤，評為3分。將10個視野評分疊加求算總分。取另外一側腎臟，留測腎臟局部AngⅡ水平。

1.5 數據處理 采用spss16.0軟件進行數據處理，數值以表示，組間比較采用方差分析，顯著性水平P＜0.05。

2 結果

2.1 不同用藥組對SHR大鼠的降壓作用 用藥前，各組SHR大鼠血壓無差別(P＞0.05)。用藥后，各給藥組與模型組比較均有不同程度的降壓作用，隨著給藥時間的延長，降壓作用越明顯(P＜0.05或P＜0.01)。各給藥組間在1～4周內降壓作用無明顯差別(P＞0.05)。見表1。

表1 不同用藥組對SHR的降壓作用 (1 mmHg=0.133322 kPa)(，n=8)

表1 不同用藥組對SHR的降壓作用 (1 mmHg=0.133322 kPa)(，n=8)

注:與空白組相比，▼ P＜0.05，▼▼P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01；與美托洛爾組相比△P＜0.05，△△P＜0.01，下同。

組別 用藥前 劑量/(mg·kg －1)用藥后1周后 2周后 3周后 4周后空白組 130.18±11.67 － 132.78±15.43 128.96±9.89 140.87±12.22 133.77±18.88模型組 163.56±8.79▼▼ － 179.00±7.88 182.48±6.91 185.18±4.56 193.77±10.79美托洛爾組 168.96±9.14▼▼ 5.8 167.76±7.17* 157.22±13.12＊＊ 148.50±8.36＊＊ 136.14±8.76＊＊水煎液組 171.63±7.83▼▼ 1500 164.84±9.56＊＊ 160.12±9.09＊＊ 150.23±9.91＊＊ 134.13±9.89＊＊聯用組 170.67±8.44▼▼ 2.9+750 161.18±7.03＊＊ 154.64±14.11＊＊ 146.91±7.39＊＊ 139.88±10.00＊＊

2.2 不同用藥組對腎臟局部AngⅡ水平的影響 SHR組與空白組比較，腎臟局部AngⅡ水平顯著升高(P＜0.01)。各用藥組同模型組相比，AngⅡ水平表現為不同程度的下降(P＜0.01)。聯合用藥組與各單用組相比，AngⅡ水平下降更為明顯，差異具有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。見表2。

表2 不同用藥組對腎臟局部AngⅡ水平的影響

2.3 不同用藥組對血漿MDA、ET-1和NO水平的影響 各給藥組與模型組比較，均表現為MDA下降(P＜0.05或P＜0.01)，聯用組與美托洛爾、水煎液兩組比較，差異具有顯著性(P＜0.05)。同模型組相比，各用藥組均使ET-1明顯降低(P＜0.01)；而聯用組較單用美托洛爾組與水煎液組對ET-1的生成抑制作用更顯著(P＜0.01)。而NO的結果與前兩個指標的情況恰好相反，即各用藥組NO水平與模型組相比均表現為程度不同的升高(P＜0.05或P＜0.01)，聯合用藥組與單用各藥組比較，NO的升高更為明顯，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

2.4 各用藥組對血漿TC、TG、LDL-C及HDL-C水平的影響美托洛爾組同模型組比較，TC、TG、LDL-C升高(P＜0.01)，HDL-C降低(P＜0.01)；水煎液組同模型組相比，血脂變化無差異(P＞0.05)。聯合用藥組與模型組比較TC、TG、LDL-C水平無明顯變化，差異無統計學意義(P＞0.05)，但HDL-C同模型組相比卻表現為明顯升高(P＜0.01)。見表4。

表3 各用藥組對血漿MDA、ET和NO水平的影響 (，n=8)

表3 各用藥組對血漿MDA、ET和NO水平的影響 (，n=8)

組別 劑量/(mg·kg－1) MDA/(μmol·L －1) ET-1/(ng·L－1) NO/(μmol·L－1)

表4 各用藥組對血漿TC、TG、LDL-C及HDL-C水平的影響(，n=8)

表4 各用藥組對血漿TC、TG、LDL-C及HDL-C水平的影響(，n=8)

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2.5 不同用藥組腎臟切片HE及Masson染色纖維化程度半定量分析 水煎液組與模型組相比，腎小球體積增大，細胞數量增多，腎小球內有纖維素滲出。腎小球、腎間質大片紅染，細胞核減少、溶解，有中性粒細胞、單核巨噬細胞及淋巴細胞浸潤。美托洛爾組、聯合用藥組同水煎液組相比，腎小球體積明顯減小，纖維化不明顯。腎小管并未發生萎縮，腎間質也無充血消腫，炎性細胞很少。見圖1～2。

圖1 不同用藥組腎臟組織HE染色光鏡下表現(×200)

圖2 各組大鼠典型腎臟纖維化Masson染色切片(×200)

Masson染色結果及半定量分析結果顯示，聯合用藥組和美托洛爾組與模型組比較纖維化程度明顯減輕(P＜0.01)，而水煎液組與模型組相比腎臟出現了纖維化(P＜0.01)。聯合用藥組與美托洛爾組相比表現出了更好的降低腎臟纖維化作用，差異有顯著性(P＜0.05)。見表5。

表5 不同用藥組腎臟纖維化評分

3 討論

高血壓影響重要臟器如心、腎的結構和功能，最終可導致這些靶器官的衰竭。常用抗高血壓藥物可使患者產生頭痛、下肢浮腫、血管性水腫、干咳等一系列不良反應。β受體阻斷劑美托洛爾雖然降壓顯著，但長期使用可引起血脂升高。中藥在治療高血壓時由于其作用溫和，毒副作用較小，在高血壓的治療中起著舉足輕重的作用。羊躑躅的果實又稱八厘麻或六軸子，民間常用其驅風除濕、消腫止痛。羊躑躅果實的水煎液在發揮快速降壓作用的同時也會出現不良反應，表現為呼吸抑制、驚厥等［6］。本實驗采用羊躑躅果實的水煎液聯合美托洛爾，探討此聯用組與單用各藥組相比，是否可以在保持良好降壓作用的同時，能減輕對血脂的不良影響。

各用藥組與模型組相比均表現出了良好的降壓作用，聯合用藥組與單用各藥組降壓作用相比，差異無統計學意義。SHR模型組血壓由給藥前的163.56 mmHg升高到193.77 mmHg，這一現象符合SHR生長期血壓變化，同時也說明了單用美托洛爾或羊躑躅果實水煎液及兩者聯合應用對處于血壓上升期的SHR血壓都有良好的降壓作用。

MDA是生物膜中多價不飽和脂肪酸受自由基作用生成的脂質過氧化代謝產物，主要存在于低密度脂蛋白膽固醇中，檢測MDA可以間接反映抗脂質過氧化作用的程度。本研究發現各給藥組血漿中MDA明顯低于模型組，說明無論是美托洛爾還是羊躑躅果實水煎液都可以通過減少脂質過氧化的程度而發揮抗高血壓作用。同時也看到聯用組與單用各藥組比較可以更好地抵抗脂質過氧化的發生，說明聯合用藥效果要比單用其中某一藥物效果好。

血管內皮功能失調導致舒張因子與收縮因子分泌失衡，是影響高血壓心血管重構的重要環節［7］。車在前等［8］認為NO可能通過抑制成纖維細胞增殖及膠原的合成，影響高血壓病的發生和發展。實驗結果顯示，各用藥組NO與模型組相比有不同程度的升高，而聯用組與單用各藥組比較，其升高的程度更為明顯，提示聯合用藥可以使NO生成增多，其機制可能是與鳥苷酸環化酶的活性升高有關。

目前認為ET收縮血管活性最強，作用比血管緊張素強10倍，它由多種組織中血管內皮細胞分泌后，通過自分泌或者旁分泌的形式和ET受體結合，引起細胞外鈣內流，起到收縮血管的作用。實驗中觀察到，聯合用藥組與單用各藥組相比差別有顯著性，提示聯合用藥后抑制內皮細胞分泌ET更為明顯。

在腎臟局部，活性增高的AngⅡ直接或間接誘導轉化生長因子-β表達，刺激腎臟局部纖溶酶原激活物抑制劑-I等的表達，促進腎小管間質成纖維細胞的增殖、分化，導致大量單核巨噬細胞浸潤腎小球，細胞外基質成分合成增多、降解減少，這一局部作用日益引起人們的關注［9］。從實驗結果可以看出SHR腎臟局部AngⅡ水平較空白組相比明顯升高，單用各藥和聯合用藥均可以收到明顯的降低AngⅡ水平的效果。結果也顯示，聯合用藥較單用各藥在減少各用藥劑量的同時，可以起到更好的降低腎臟局部AngⅡ的作用。

Xie F等［10］研究表明，高血脂這一危險因素可以協同高血壓對心臟造成更嚴重的損害。本次結果顯示，美托洛爾組與模型組相比，LDL-C、TG、TC物質的量濃度升高，HDL-C降低，這一點與趙憲平等［11］的實驗結果一致。水煎液組與模型組比較血脂變化無明顯差別；聯用組LDL-C、TG、TC與模型相比無明顯差異，而HDL-C卻升高。說明聯合用藥可以使HDL-C升高，對機體具有保護作用。

腎臟損害表現為小管間質纖維化、腎實質丟失、腎小球硬化，有炎癥細胞浸潤，腎內細胞外基質異常增多和過度沉積，最后導致固縮腎［12-13］。從腎臟的HE組織切片可以看到，水煎液組可引起腎臟纖維化，美托洛爾組和聯用組纖維化不明顯。聯合用藥組與美托洛爾組相比具有更加明顯的降低腎臟纖維化作用。

綜合以上實驗結果，提示聯合用藥不但可以通過減輕脂質過氧化的程度，調節內皮細胞的功能，使它合成的ET-1減少，同時又增加NO的釋放，內皮細胞重新處于對機體有利的最佳狀態，發揮更好的降壓效果，同時還有阻止高血壓的易損靶器官腎臟的纖維化的可能。對腎臟的這一保護作用尚需增加樣本例數和延長觀察時間加以證實。本研究還發現聯合用藥對血脂的影響，在不影響LDL-C、TG、TC的情況下卻可以使HDL-C升高。但其對血脂影響的機制還有待進一步研究。

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［5］羅永焱，查加權，李焰卿，等.羊躑躅根治療風濕性關節炎114例［J］.中國中西醫結合雜志，1993，13(8):489-490.

［6］夏德超，楊天明，朱景中，等.羊躑躅的研究進展［J］.中藥材，2002，11(2):829-832.

［7］Hoe S Z，Lee C N，Mok S L，et al.Gynura procumbens Merr.decrease blood pressure in rats by vasodilatation via inhibition of calcium channels［J］.Clin(Sao Paulo)，2011，66(1):143-150.

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［11］趙憲平，陳 娟，薛小霞.高血壓病人應用β受體阻滯劑對血脂水平的影響［J］.中國廠礦醫學，2005，18(2):149.

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