熒光PCR快速檢測(cè)A、C、G群溶血性鏈球菌

林 霖，蘭全學(xué)，祝仁發(fā)，2，楊國(guó)武，*

(1.深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院，廣東深圳518131; 2.佛山市農(nóng)業(yè)局，廣東佛山528000)

熒光PCR快速檢測(cè)A、C、G群溶血性鏈球菌

林 霖1，蘭全學(xué)1，祝仁發(fā)1，2，楊國(guó)武1，*

(1.深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院，廣東深圳518131; 2.佛山市農(nóng)業(yè)局，廣東佛山528000)

克服現(xiàn)有文獻(xiàn)中PCR檢測(cè)方法僅能檢測(cè)蘭氏A群鏈球菌的局限，建立適用于溶血性鏈球菌群全族群的熒光PCR快速檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 4789.11－2003檢測(cè)范圍一致。通過(guò)文獻(xiàn)搜索以及桿菌肽敏感實(shí)驗(yàn)，對(duì)國(guó)標(biāo)檢驗(yàn)范圍進(jìn)行界定。使用CLUSTAL X軟件尋找蘭氏A、C、G群保守序列并設(shè)計(jì)特異性引物和探針，同時(shí)通過(guò)特異性實(shí)驗(yàn)、模擬污染實(shí)驗(yàn)以及方法比對(duì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該方法的特異性、檢出限及可靠性。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法能特異擴(kuò)增蘭氏A、C、G群鏈球菌;模擬污染實(shí)驗(yàn)表明，在增菌18h后增菌液最低初始污染菌含量分別為3、50、2CFU/mL時(shí)，蘭氏A、C、G群鏈球菌可被檢出。110份樣品比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。該方法可應(yīng)用于食品中溶血性鏈球菌的快速檢測(cè)，并可為快速檢測(cè)溶血性鏈球菌國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。

實(shí)時(shí)熒光PCR，溶血性鏈球菌，檢測(cè)，食品

近年來(lái)食品安全問(wèn)題已成為公眾關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題，而微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最為突出的問(wèn)題。溶血性鏈球菌屬于鏈球菌屬，其廣泛存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動(dòng)物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過(guò)直接接觸、空氣飛沫或皮膚、粘膜傷口感染傳播，而被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也會(huì)使人類感染［1］。……