蒲公英糖蛋白的分離純化及結構分析

杜曉旭，鐘 潔，段玉峰，鄒柯婷，楊 聞

(陜西師范大學食品工程與營養科學學院，陜西西安710062)

蒲公英糖蛋白的分離純化及結構分析

杜曉旭，鐘 潔，段玉峰*，鄒柯婷，楊 聞

(陜西師范大學食品工程與營養科學學院，陜西西安710062)

通過DEAE－52纖維素柱層析和Sephadex G－100葡聚糖凝膠層析手段分離純化，從蒲公英中分離純化得到三種蒲公英糖蛋白(TMGP)－a、b、c，采用薄層層析法對其純度進行鑒定，結果顯示三種成分均為均一組分。經分析，蒲公英糖蛋白粗品TMGP和均一品TMGP－a、TMGP－b、TMGP－c中多糖的含量為79.12%、71.23%、70.25%、74.35%;蛋白質的含量為:13.35%、19.79%、20.78%、17.60%。β－消除反應說明三種蒲公英糖蛋白均一品都含有O－連接型糖蛋白。經紅外光譜分析，TMGP－a糖蛋白可能含有少量硫酸基;TMGP－b糖鏈中可能是硫酸化多糖;TMGP－c含有吡喃糖β－糖苷鍵。

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蒲公英糖蛋白粗制品 實驗室自制;DEAE－52纖維素、SephadexG－100 英國Whatman產品;葡萄糖、正丁醇、95%乙醇、無水乙醇、丙酮、氯仿、苯酚、乙醚、氫氧化鈉、雙氧水、硫酸等 均為國產分析純。

DBS－100型電腦全自動部分收集器、DHL－A型電腦恒流泵 上海滬西分析儀器廠;RE－52AA型旋轉蒸發儀 上海亞榮生化儀器廠;800B型離心機上海安亭科學儀器廠;微量移液器 日本NICHIRYO公司;半微量凱氏定氮蒸餾裝置 上海貝特儀電設備廠;T6型紫外可見分光光度計 北京普析通用儀器有限公司;EQUINX55型傅立葉變換紅外光譜儀德國Brucher公司;層析柱(2.6cm×80cm和1.5cm× 50cm) 北京昌陽永川實驗器材銷售中心。

1.2 實驗方法

1.2.1 蒲公英糖蛋白粗品純化［5－6］取蒲公英糖蛋白粗品0.5g，用10mL蒸餾水完全溶解，上DEAE－52纖維素柱(2.6cm×80cm)，洗脫速度為0.5mL/min，依次用0.1、0.2、0.3、0.5mol/L的NaCl溶液洗脫，用部分收集器收集，每管收集10mL。……