響應面法分析優化米曲霉產β-葡萄糖苷酶液體發酵培養基

朱 婧，王青艷，，劉演景，申乃坤，陳桂光，梁智群，*

(1.廣西科學院國家非糧生物質能源工程技術研究中心，廣西南寧530007; 2.廣西大學生命科學與技術學院，廣西南寧530005)

響應面法分析優化米曲霉產β-葡萄糖苷酶液體發酵培養基

朱 婧1，王青艷1，2，劉演景2，申乃坤1，陳桂光2，梁智群2，*

(1.廣西科學院國家非糧生物質能源工程技術研究中心，廣西南寧530007; 2.廣西大學生命科學與技術學院，廣西南寧530005)

利用快速有效的響應面分析法對米曲霉ASPE0485產β－葡萄糖苷酶的發酵培養基進行優化，利用Plackett－Burman顯著因子實驗和Box－Behnken響應面分析優化了β－葡萄糖苷酶產生菌的發酵培養基，確定搖瓶發酵的最佳培養基組成為(%，w/v):玉米芯3.8%、大豆蛋白胨0.5%、KH2PO40.5%、MgSO4·7H2O 0.05%、CaCl20.05%、吐溫－80 0.27%和接種量5.3%;在此條件下發酵，得到酶活為21.1U/mL比原始酶活(17.65U/mL)提高了19.55%。

米曲霉，β－葡萄糖苷酶，響應面分析法

1 材料與方法

1.1 實驗材料

米曲霉ASPE0485(Aspergillus oryzae ASPE0485)廣西大學生命科學與技術學院食品與發酵工程研究所篩選并保藏;斜面培養基 10%(w/v)麩皮水煮30min，4層紗布過濾，濾液中添加2%葡萄糖，2%瓊脂，pH自然;種子培養基 50mL Mandels［4］微量元素鹽溶液中加入1%(W/V)植物蛋白胨，pH自然［5］;基礎搖瓶培養基 3%(W/V)玉米芯，0.2%(W/V)植物蛋白胨，0.4%(W/V)KH2PO4，0.04%(W/V)CaCl2，0.04%(W/V)MgSO4，pH自然，定容至50mL［4］。

表2 PB設計及其實驗結果Table 2 Experimental design and results of the PB

表3 PB設計的回歸分析結果Table 3 Results of the PB regression analysis

1.2 實驗方法

1.2.1 培養方法 種子液培養方法:250mL三角瓶裝液量50mL，每瓶種子培養基的接種量為1×106個孢子，培養溫度為28℃，搖床轉速為160r/min，培養時間為12h。

發酵培養方法:250mL三角瓶裝液量50mL，種子液以2%(V/V)的接種量接入發酵培養基，培養溫度為28℃，搖床轉速為160r/min，培養時間為4d。

1.2.2 酶活力的測定

1.2.2.1 酶活力……