高效液相色譜法測定喜炎平注射液中穿心蓮內(nèi)酯的含量

2012-11-10 01:24:18張玉霖張又枝

中國醫(yī)藥指南 2012年10期

張玉霖張又枝陳莉

（咸寧學院藥學院，湖北咸寧 437100）

喜炎平注射液可抗病毒且廣譜抗菌，在臨床上廣泛用于治療支氣管炎、病毒性肺炎、扁桃體炎、小兒急性熱性疾病以及細菌性痢疾等疾病[1-3]，主要成分是由穿心蓮內(nèi)酯通過磺化反應制得的穿心蓮內(nèi)酯總磺化物[4,5]，磺化反應不完全或者磺化物分解可產(chǎn)生穿心蓮內(nèi)酯，穿心蓮內(nèi)酯也具有穿心蓮抗炎、抗菌、抗病毒等功效，但其含量多少可反映喜炎平注射液的整體質(zhì)量，目前未見喜炎平注射液中穿心蓮內(nèi)酯測定方法的報道，為了進一步完善這類注射液的質(zhì)量控制標準，我們建立了HPLC法測定穿心蓮內(nèi)酯的含量，現(xiàn)介紹如下。

1 儀器與試藥

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津），SPD20A 型紫外檢測器，N2000型色譜數(shù)據(jù)工作站，F(xiàn)A2004電子分析天平，SK2200H超聲儀。穿心蓮內(nèi)酯對照品（批號：110797-200307，中國藥品生物制品檢定所），喜炎平注射液（江西青峰藥業(yè)有限公司），甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱： Eurospher 100～5 C18（250 mm× 4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-水（90:10）；檢測波長：225nm；流速：lmL/min；柱溫：室溫。色譜圖見圖1。

圖1

2.2 線性關系

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品49.68mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解適量，超聲5min，用甲醇并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。精密量取儲備液1、2、4、6、8、10mL分別置于 l0mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜件，分別取20μL進樣，以峰面積 y對對照品進樣量（μg/mL ）作線性回歸。結果回歸方程（n=6）為：Y=11967.8x+ 324621，r2= 0.9996。

線性范圍為：24.84μg/mL～248.4μg/mL。

2.3 重復性實驗

精密量取2.00mL同一批號樣品（批號：20100531）6份，按樣品測定項下的方法，測定穿心蓮內(nèi)酯的含量，RSD為 0.87%。

2.4 穩(wěn)定性實驗

取重復性實驗中的第 1份溶液，室溫下在 0、0.5、1、2、3h測定，結果表明，本品的供試品溶液在室溫 3h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD=0.77%，n=5。

2.5 精密度試驗

取濃度為124.2μg/mL的穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液，重復進樣5次，結果 RSD為 0.84%。

2.6 加樣回收實驗

精密量取喜炎平注射液2.00 mL，分別置10mL量瓶中，再分別精密加入對照品溶液，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，照樣品測定項下的方法測定加樣回收率，結果見表1。

2.7 樣品測定

精密量取本品2.00mL，于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，按上述色譜條件，取20μL進樣測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，結果見表2。

表2 喜炎平注射液測定結果表（n=5）

3 討論

本研究采用高效液相色譜法測定，檢測波長、流動相的組成均參照《中國藥典》[6]穿心蓮項下的含量測定方法，采用比較常用的甲醇-水作為流動相。考察了不同流動相配比的分離情況，其中甲醇-水（90∶10）時所得色譜圖中峰形和分離度都比較滿意。該方法操作簡單，結果準確，為藥品質(zhì)量控制提供了一定的參考。有研究[5]表明，以穿心蓮內(nèi)酯為表征性參比物質(zhì)，通過校正因子，可實現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯磺化物對照品量值的準確傳遞。在該色譜條件下，能否實現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯磺化物對照品量值的準確傳遞，從而在穿心蓮內(nèi)酯磺化物對照品不易獲得的情況下以穿心蓮內(nèi)酯為對照品間接測定穿心蓮內(nèi)酯磺化物的量，還需要進一步考察。