羊快疫病原的分離與鑒定

2012-11-12 05:23:52陳振華

養(yǎng)殖與飼料 2012年6期

陳振華

湖北省荊州市畜牧獸醫(yī)局，湖北荊州434020

羊快疫是由梭狀芽孢桿菌屬的腐敗梭菌引起的主要危害綿羊的一種急性、致死性傳染病，該病以發(fā)病突然、病程短及病羊真胃黏膜呈出血性壞死性炎癥為特征［1-2］。腐敗梭菌兩端鈍圓、革蘭氏染色呈陽性，在肝臟漿膜上可形成階段不明顯的微彎曲的長絲狀或階段明顯的鏈條狀菌落，幼齡菌體有鞭毛、無莢膜，可形成芽孢［3］。腐敗梭菌常以芽孢形式分布于低洼草地、熟耕地及沼澤中，羊采食了被污染的飼料和飲水后，芽孢隨之進入羊的消化道，當羊受到不良因素刺激致使機體抵抗力下降時，腐敗梭菌就會大量繁殖，產(chǎn)生外毒素，損害羊只消化道黏膜，引起中毒性休克，使羊迅速死亡［4］。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用病料為疑似羊快疫病羊的肺組織，由長江大學生命科學學院生物實驗室熊濤老師提供。

1.2 病料鏡檢

無菌取病料，涂片后進行革蘭氏染色，并用顯微鏡觀察染色結果。

1.3 細菌的分離

用接種環(huán)無菌挑取病料，采用分區(qū)劃線的方法接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察菌落形態(tài)。

1.4 分離細菌的培養(yǎng)特性研究

將厭氧肉肝湯培養(yǎng)基煮沸5min，隨即置冷水中冷卻，以排出培養(yǎng)基內的空氣；接種前，先將液面石蠟處的管壁外部在酒精燈火焰上略烤，使石蠟與管壁分離；然后挑取單個菌落從石蠟與管壁間的空隙處插入培養(yǎng)基中；接種完后，將液面的石蠟烤融，使其平整地覆蓋液面，然后將其置于試管架上冷卻至石蠟凝固后，置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察結果。

1.5 分離細菌的生化鑒定

1）糖發(fā)酵試驗。取用于糖發(fā)酵試驗的葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、果糖和甘露糖6支生化管，挑取分離菌的單菌落分別接種于上述生化管中，37℃培養(yǎng)2～3d，觀察結果。培養(yǎng)基變?yōu)辄S色的為產(chǎn)酸，倒置的德漢氏小管內有氣泡的為產(chǎn)氣。

2）過氧化氫酶試驗。用接種環(huán)挑取分離菌的單菌落，置于潔凈試管內，然后滴加3%過氧化氫溶液10mL，觀察結果。0．5min內產(chǎn)生氣泡者為陽性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性。

3）靛基質試驗（吲哚試驗）。取用于做靛基質試驗的生化管2支，挑取分離菌的單菌落對其中1支進行接種，另1支作為對照；37℃培養(yǎng)2d；然后于每管各加入乙醚3～4滴，搖動數(shù)次，靜置1～3min；待乙醚上升后，沿試管壁緩慢加入吲哚試劑2滴，在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物者為陽性反應。

4）甲基紅試驗。取用于做甲基紅試驗的生化管2支，分別挑取分離菌的單菌落進行接種，37℃培養(yǎng)2d，然后在其中1支試管中加入甲基紅試劑2滴，另1支作為對照。培養(yǎng)基變?yōu)榧t色者為陽性，變黃色者為陰性。

5）明膠液化試驗。取用于做明膠液化試驗的生化管2支，用接種針挑取分離菌的單菌落對其中1支進行穿刺接種，另1支作為對照；然后將2支生化管于20℃培養(yǎng)2～5d。由于明膠在20℃下為液態(tài)，所以觀察時需冰浴一段時間，若在冰浴后仍為液體，則說明該菌對明膠有液化作用。