尾加壓素Ⅱ對乳鼠心肌成纖維細胞增殖和膠原合成的影響及其信號轉導機制的研究

王利

咸寧學院基礎醫學院，湖北咸寧 437100

尾加壓素Ⅱ對乳鼠心肌成纖維細胞增殖和膠原合成的影響及其信號轉導機制的研究

王利

咸寧學院基礎醫學院，湖北咸寧 437100

目的 探討UⅡ誘導的CFs細胞內信號轉導機制及細胞增殖與膠原合成的影響。 方法 體外培養CFs，采用免疫組織化學染色法及羥脯氨酸進行測定。 結果CFs培養上清中羥脯氨酸含量隨著UⅡ濃度的增加而先增后減，各組別羥脯氨酸含量均高于基礎狀態組，而低于10-8組羥脯氨酸含量。 結論UⅡ可促進CFs分泌膠原及增殖作用，可能是通過PKC/MAPK/CaN途徑實現其作用的。

尾加壓素Ⅱ；心肌；成纖維細胞；膠原合成

尾加壓素Ⅱ（UⅡ）是目前發現的收縮血管活性最強的物質。UⅡ及其受體在中樞神經和心血管系統中廣泛的分布，對于心血管系統的調節有著重大的作用。筆者采用體外培養CFs，再采用免疫組織化學染色法及羥脯氨酸測定進行研究，為分子水平及細胞上為心肌纖維化的產生提供有利依據，現總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取出生1～3d的SD乳鼠，由中山醫科大學動物中心提供。DMEM培養基、胎牛血清為天津灝洋生物技術有限公司產品，Rat UⅡ、SABC免疫組化試劑盒、DAB顯色劑為武漢博士德公司產品。 DMEM、Che、PD98059、CsA、p-ERK1/2 為 Sigma產品。

1.2 方法

在無菌環境下取2～3d的SD仔鼠心室，采用差速貼壁法將采集細胞分離純化CFs。SABC法免疫組化染色，陽性即為纖維粘連蛋白染色，期培養的細胞為CFs可由結蛋白染色陰性和血管平滑肌肌動蛋白Ⅷ因子來證明。CFs培養上清中的膠原含量檢測，采取羥脯胺基酸比色法進行測定。

1.3 統計學處理

統計學處理對數據采用SPSS 13.0軟件進行，采用χ2檢驗計量資料，采用（±s）檢驗計量型數據，以 P＜0.05，為有顯著差異性，提示有統計學意義。

2 結果

①由表1可見，CFs培養上清中羥脯氨酸含量隨著UⅡ濃度的增加而先增后減，10-7組與基礎狀態組比較無統計學意義 （P＞0.05），其余各組與基礎狀態組比較，P＜0.05，有統計學意義。

表1 不同濃度的UⅡ對CFs培養上清中膠原含量的影響（±s）

表1 不同濃度的UⅡ對CFs培養上清中膠原含量的影響（±s）

UⅡ(mol/L) 羥脯氨酸（μg/mg protein）10-10組10-9組10-8組10-7組基礎狀態組3.89±0.31 4.35±0.44 8.26±0.28 2.62±0.35 2.48±0.34

②由表2可見，各組別羥脯氨酸含量均高于基礎狀態組，而低于10～8組羥脯氨酸含量，相互比較，P＜0.05，均有統計學意義。

③由表 3 可見，PD98059（10-5mol/L）+UⅡ（10-8mol/L）與 10-8組P-ERK1/2灰度比較，P＞0.05，無統計學意義。其他各組相互比較，P＜0.05，均有統計學意義。

表2 che、PD98059與CsA誘導的UⅡ對CFs培養上清中膠原含量的影響（±s）

表2 che、PD98059與CsA誘導的UⅡ對CFs培養上清中膠原含量的影響（±s）

組別 羥脯氨酸（μg/mg protein）Che（10-6mol/L）+UⅡ（10-8mol/L）PD98059（10-5mol/L）+UⅡ（10-8mol/L）CsA（5μg/mL）+UⅡ（10-8mol/L）基礎狀態組4.22±0.23 3.68±0.52 4.16±0.53 2.48±0.34

表4 che、PD98059與CsA對UⅡ誘導的CFsp-ERK1/2灰度的影響（±s）

表4 che、PD98059與CsA對UⅡ誘導的CFsp-ERK1/2灰度的影響（±s）

組別 p-ERK1/2灰度Che（10-6mol/L）+UⅡ（10-8mol/L）PD98059（10-5mol/L）+UⅡ（10-8mol/L）CsA（5μg/mL）+UⅡ（10-8mol/L）基礎狀態組186.33±5.68 159.21±2.11 185.46±4.78 202.99±4.68

3 討論

CFs是主要合成與分泌心臟細胞外基質及心臟中數量最多的細胞類型，左心室肥厚的主要病理基礎可能是沉積造成心肌纖維化、CFs的增殖與膠原合成的增多。本組UⅡ具有促進CFs增殖及膠原合成的作用，在10-7UⅡ組，CFs培養上清中的p-ERK1/2灰度及膠原含量與基礎狀態比較，無統計學意義，說明UⅡ促CFs增殖與膠原合成作用隨著UⅡ濃度的增加而減弱。

UⅡ是一種促動脈平滑肌細胞增生的內源性絲裂原，該效應可能通過PKC、Ca離子、鈣調素依賴的CaM-PK和MAPK來介導，且UⅡ作用于血管平滑肌細胞后，可由刺激黏著FAK的活化來促進細胞增殖，該作用與PKC介導的信號轉導有密切關系[4]。本組che、PD98059與CsA誘導的UⅡ對CFs細胞增殖與膠原合成有抑制效應，說明可能通過PKC/MAPK/CaN途徑實現UⅡ誘導的CFs增殖和膠原合成作用機制，PD98059對UⅡ誘導的CFs增殖無抑制作用，說明可能由改變p-ERK的表達PKC與CaN通路來完成增值效應，PKC與CaN交叉后可形成共同通路，而使p-ERK1/2表達發生改變。綜上所訴，UⅡ可促進CFs分泌膠原及增殖作用，可能是通過PKC/MAPK/CaN途徑實現其作用的。

R19

A

1672-5654（2012）07（a）-0046-01

2012-06-15）