高效液相色譜法測定茵赤膠囊中芍藥苷的含量

沈 萍 羅海保

江西省南昌市第九醫院，江西南昌 330002

高效液相色譜法測定茵赤膠囊中芍藥苷的含量

沈 萍 羅海保

江西省南昌市第九醫院，江西南昌 330002

目的 建立測定茵赤膠囊中芍藥苷的含量。 方法 采用高效液相色譜法（HPLC），色譜柱為Hyspersil C18，流動相為甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40∶65），檢測波長為230 nm。 結果 平均加樣回收率為101.72%，RSD=1.85%。結論 方法簡便、準確、重現性好，可用于該制劑的質量控制。

茵赤膠囊；芍藥苷；高效液相色譜

茵赤膠囊是由茵陳、赤芍、丹參、山楂、苦參、麥芽、牛膝、澤蘭、女貞子等中藥經提取加工制成的中藥膠囊制劑。經多年來臨床應用，證明功效確切，療效顯著。為控制其質量，本研究采用HPLC法對方中赤芍所含的芍藥苷進行了含量測定。該方法簡便、快速、準確、重現性好，可作為該制劑的質量控制標準。

1 儀器與試藥

LC-ATP高效液相色譜儀；LC-ATVP紫外檢測器；Hyspersil C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）；METTLER AE240十萬分之一天平；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110736-200628）；茵赤膠囊為本院經驗方開發而成的醫院制劑（批號分別為101014、101108、101211）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

參考《中國藥典》2010年版中赤芍藥材中測定芍藥苷的色譜條件，LC-ATP高效液相色譜儀；LC-ATVP紫外檢測器，用十八烷基鍵合硅膠填充劑，甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）為流動相，檢測波長：230 nm，流速：1.0 mL/min，柱溫：室溫；理論塔板數經多次結果顯示按芍藥苷峰計算不低于2 000。照上述色譜條件，芍藥苷對照品和制劑中芍藥苷與其他組分均能達到基線分離。進樣量10 μL。陰性樣品、對照品和供試品色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品20.94 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得到濃度為0.418 8 mg/mL的對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10粒內容物，取細粉0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理（120 W，40 kHz）60 min，放置至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液經0.45 μm微孔濾膜濾過即得供試品溶液。

圖1 芍藥苷HPLC圖譜

2.2.3 陰性品溶液的制備 參照茵赤膠囊處方，制備不含赤芍的陰性對照品膠囊，按照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照品溶液。

2.3 專屬性試驗

取除赤芍以外的其他藥材，按處方比例制得的陰性樣品0.5 g，用與供試品溶液相同的方法制得陰性對照液。在與供試品測定完全相同的條件下，精密吸取陰性對照液10 μL，注入液相色譜儀，結果陰性無干擾，說明在茵赤膠囊中，芍藥苷的專屬性較強。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取對照品儲備液制備得41.88、83.76、167.52、251.28、335.04、418.80 μg/mL 的系列對照品溶液，分別吸取上述對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，以對照品濃度C（mg/mL）為橫坐標，峰面積A為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為：C=6.511×10-7A-0.005 3，r=0.999 9。 實驗表明，芍藥苷濃度在41.88～418.80 μg/mL范圍內呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取濃度為251.28 μg/mL的對照品溶液，連續進樣6次，每次10 μL。依法測得芍藥苷峰面積RSD為1.26%（n=6），實驗結果表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取批號為101108的供試品0.5 g，按“2.2.2”項下相同方法制備得供試品溶液，分別于 0、2、4、6、8、10 h 分別進樣 10 μL，依法測得芍藥苷峰面積RSD為1.83%。結果表明供試品溶液室溫放置10 h內穩定。

2.7 重復性試驗

取批號為101108的茵赤膠囊約0.5 g，共6份，精密稱定，按“2.2.2”項下相同的方法制備得供試品溶液，測得樣品中芍藥苷的含量RSD=1.88%，表明重復性良好。見表1。

表1 重復性試驗

2.8 加樣回收率試驗

取批號為101211的茵赤膠囊約0.25 g，共6份，精密稱定，分別置三角燒瓶中，各精密加入濃度為0.418 8 mg/mL的對照液6 mL，參照“2.2.2”項下方法制得供試品溶液，按樣品相同方法測定芍藥苷的含量，平均回收率為101.72%，測定結果見表2。

2.9 樣品測定

取 3 個批號（101044、101108、101211）的茵赤膠囊約 0.5 g，每批2份，精密稱定，分別按“2.2.2”項下相同的制備方法制成供試品溶液。按上述色譜條件，分別吸取10 μL注入液相色譜儀，依法測定，即得。見表3。

由上可知茵赤膠囊樣品的平均含量為2.59 mg/粒，根據上述測定結果，暫定本品每粒按芍藥苷含量計不得少于2.0 mg。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

參照《中國藥典》2010年版一部及有關文獻[2-3]中的方法，比較了甲醇、乙醇、50%甲醇、稀乙醇作為溶劑進行提取并測定，結果含量有一定差異。甲醇、乙醇提取的溶出成分中雜質較多，而50%甲醇提取的雜質峰較少，測得組分的峰形最好且芍藥苷的含量最高，故確定以50%的甲醇為提取溶劑。

表2 加樣回收率試驗結果（n=6）

表3 含量測定結果

3.2 提取方法及時間的選擇[2-3]

試驗中過程中采取了加熱回流提取和超聲提取，經比較發現超聲提取法測得的芍藥苷的含量明顯較高且提取時間短、提取物中雜質少。同時還對超聲時間10、30、60 min進行考察，結果發現超聲10 min和30 min的含量偏低，故采用超聲60 min，提取效果較好。

3.3 流動相的選擇

結合《中國藥典》2010年版一部及有關文獻[4-8]，對不同比例甲醇-水和甲醇-醋酸-水體系選擇比較，發現制劑中芍藥苷分離效果差，而以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（40∶65）為流動相，分離效果最佳。

本研究采用HPLC法測定茵赤膠囊中芍藥苷的含量，方法簡便、快速、準確，重現性好，專屬性強，可作為其質量控制的指標，為該藥品的質量均一、可控提供了保障。

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Determination of Paeoniflorin in Yinchi Capsule by HPLC

SHEN Ping LUO Haibao
The Ninth Hospital of Nanchang,Jiangxi Province,Nanchang 330002,China

ObjectiveTo establish a method for determination of Paeoniflorin in Yinchi Capsule.MethodsThe column of Hyspersil-C18was used,the mobile phase was Methanol-0.05 mol/L Potassium dihydrogen phosphate solution(40∶65),and the peak was detected at 230 nm.ResultsThe average recovery was 101.72%,RSD=1.85%.ConclusionThe method is easy to operate with accurate result and good reproducibility.It can be used for quality control of this preparation.

Yinchi Capsule;Paeoniflorin;HPLC

R283.6

A

1673-7210（2012）08（c）-0111-02

沈萍（1966.6-），女，本科，學士，副主任藥師；研究方向：中藥制劑質量標準。

2012-03-20 本文編輯：衛 軻）