小兒支原體肺炎190例肺炎支原體DNA與超敏C反應蛋白檢測及其應用價值

湖北省咸寧市中心醫院兒科（咸寧437100）

羅劍紅

急性呼吸道感染是全世界兒童最常見的疾病之一，肺炎是發展中國家兒童死亡的首要原因，而肺炎支原體（Mycoplas ma pneu moniae，MP）是小兒時期感染性肺炎的重要病原體之一。肺炎支原體感染常年發病，最常見累及呼吸道，但是也可以使中樞神經系統受累，病情重，如不及時治療，預后差。肺炎支原體臨床表現缺乏特異性，常有誤診。我院于2007年1月至2009年3月對190例支原體肺炎（MPP）患兒進行肺炎支原體DNA（MP-DNA）及超敏C反應蛋白（hs-CRP）檢測，同時與81例健康兒童進行hs-CRP檢測對比，現將結果分析報告如下。

資料與方法

1 研究對象 本組選擇在我科住院治療并診斷為MPP者190例，其中男113例，女77例，年齡1月至12歲，所有患兒均符合國家衛生部小兒支原體肺炎診斷標準［1］。任意抽取81例健康兒童作為對照組，其中男49例，女32例，年齡2月至13歲。兩組在年齡、性別構成上經統計學處理無顯著性差異（P＞0.05），具有可以比性。

2 MP-DNA檢測 患兒入院當日或次日以無菌咽拭子擦拭咽后壁，避免觸碰舌面及口唇，于盛有1 ml生理鹽水EP管攪動并擠壓管壁盡力擠干。咽拭液裝冰盒送至-80oC冰箱保存，留做PCR。應用美國Stratagene公司生產的Mx3005P型熒光定量PCR儀檢測 MP-DNA濃度，＞1.00×103copies／mL為陽性，試劑盒由深圳匹基生物有限公司生產。

3 hs-CRP檢測 190例MPP患兒和81例健康對照兒童均靜脈采血2 ml置于干燥促凝試管內送檢，采用日本Oly mpus3700全自動生化分析儀和日本電化生研株式會社提供的hs-CRP試劑進行檢測，正常值范圍為0～3 mg／L。

4 統計學處理 本組數據均采用SPSS11.0軟件系統進行處理，以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為有顯著性差異，P＜0.01為有極顯著性差異。

結 果

1 MP-DNA的檢測結果 見表1。A組91例，MP-DNA濃度為1.00×103～1.00×104；B組69例，MP-DNA濃度為1.00×104～1.00×105；C組30例，MP-DNA濃度＞1.00×105；MP-DNA濃度在1.00×103～1.00×104者最多，而 MP-DNA濃度＞1.00×105者最少。

表1 190例支原體肺炎患兒MP-DNA濃度

2 hs-CRP的檢測結果 見表2。hs-CRP濃度及增高率均以C組最高，分別達到47.2±18.2 mg／L和100%。與對照組比較，A、B、C三組的增高hs-CRP濃度和增高率均有極顯著性差異（P＜0.01）。

表2 不同MP-DNA濃度組患兒與對照組hs-CRP檢測增高例數、濃度和增高率

討 論

MPP是兒童和青少年時期常見的肺炎之一，由MP感染引起，約有10%～20%的肺炎病例由肺炎支原體引起，且近年有逐漸增多的趨勢［2］。其臨床常累及呼吸道，出現持續性咳嗽、咽炎和氣管支氣管炎，表現無特異性，早期快速診斷困難。目前，MPP診斷的新指標層出不窮，但是尚無標準的診斷方法。MP是呼吸道感染常見的致病菌，是介于細菌和病毒之間的能獨立生活的病原微生物中最小者。傳統的肺炎支原體分離培養及抗體測定費時、繁瑣、培養陽性率低，不利于肺炎支原體感染的早期快速診斷［3］。采用熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）技術檢測痰、血標本可快速、敏感、準確地定量檢測標本中 MP-DNA，可了解MP在患兒體內感染和復制情況［4］。文獻報道，肺炎支原體PCR拷貝數越大，越能支持MP感染的診斷，并常提示病情越重［5］。

C-反應蛋白在1930年由Tillet和Francis發現，他們觀察到一些急性病人的血清能和肺炎鏈球菌的莢膜C-多糖物質起沉淀反應，1941年證實血清中造成沉淀反應的是一種蛋白質，稱之為C-反應蛋白（CRP）。人CRP的基因序列在1985年被查明，屬于五球體蛋白Oligo meric鈣結合蛋白，分子量約120k D，由5個（每個含206個氨基酸）相同單體以共價鍵結合為環狀五球體。CRP為急性時相反應蛋白之一，由肝臟合成，在炎癥或急性組織損傷6～8h內開始升高，24～48h達到高峰，比正常值高幾百倍甚至上千倍。經積極、合理治療后，3～7d迅速降至正常，CRP的水平與組織損傷后修復的程度有密切關系，因此CRP可作為感染性疾病診斷及療效判斷的指標［6］。臨床實驗室常規測定CRP的濃度值是應用于檢測組織損傷和急性炎癥，檢測的范圍一般為5～200 mg／L，傳統的分析方法缺乏足夠的敏感性。近年來采用乳膠增強免疫比濁法技術大大提高了分析靈敏度，能應用于全自動生化分析儀，檢測低限為0.10 mg／L，在低濃度CRP（如0.15～10 mg／L）測定范圍內有很高的準確度。用這種高靈敏度方法測定的CRP稱為高敏感或超敏感CRP，簡稱超敏CRP（hs-CRP）。hs-CRP并不是一種新的CRP，而是根據測定方法更敏感命名。

健康人血漿中hs-CRP含量甚微（＜10 mg／L），而在炎癥或急性組織損傷后，hs CRP合成則在4～6h內迅速增加，36～50h達到高峰，峰值可為正常值的100～1000倍，其半衰期較短4～6 h。而且hs-CRP的水平與組織損傷后修復的程度有密切關系，也不受性別、年齡、貧血、高球蛋白血癥等因素的影響。即使患兒機體反應低下，常規檢查（如WBC）正常時，hs-CRP亦可呈陽性，并隨著感染的加重而升高，因此它優于其他急性期的反應物質［7］。Hs-CRP的檢測對于臨床上白細胞不高或免疫功能低下的肺炎患者其診斷價值更高，尤其是小兒和老年人。小兒支原體肺炎急性期血清hs-CRP升高，且出現時間明顯比支原體抗體要早，恢復期逐漸下降。雖然hs-CRP升高水平與感染程度并不一定成比例，但微量hs-CRP水平的升高，也可與較嚴重的臨床情況相聯系［8］。這些研究說明，超敏C反應蛋白可以作為鑒別感染嚴重程度的指標。

在本研究中，MP-DNA拷貝數越高組，hs-CRP濃度越高，＞3 mg／L者越多，呈正相關。說明hs-CRP可以作為肺炎支原體肺炎的一個病情評估指標，而且具有靈敏性高的特點。聯合肺炎支原體DNA和超敏C反應蛋白的檢測，可以早期較為正確地診斷及評估小兒肺炎支原體肺炎，為治療提供幫助。

［1］胡亞美，江載芳.諸福棠實用兒科學［M］.第7版.北京：人民衛生出版社，2002：1204-1205.

［2］惠德存.小兒支原體肺炎感染流行病學分析［J］.陜西醫學雜志，2008，37（7）：832-833.

［3］Nakano-Hasagawa K，Morozu mi M，Nakayama E，etal.Comprehensive detection of causative pathogens using real-time PCR to diagnose pediatrics community.Acquired pneu monia［J］.J Infect Chemother，2008，14（6）：424-432.

［4］吳宏圖，單春明，周楊楊.MP-DNA熒光定量聚合酶鏈反應檢測在兒童肺炎支原體肺炎中的診斷價值［J］.陜西醫學雜志，2011，40（1）：50-52.

［5］Dorigo-Zets ma JW，Zaat SA，Vriesema AJ，etal.Demonstration by a nested PCR for Mycoplas ma pneu moniae that M.Pneu moniae load in the throat is higher in patients hosp italised for M.Pneu moniae infection than in non-hospitalised subjects［J］.J Med Microbiol，1999，48（12）：1115-1122.

［6］Jaye DL，Waites KB.Clinical app lications of C-reactive protein in pediatrics［J］.Pediatr Infect Dis，1997，16（8）：735-747.

［7］Sorensen MG，Henriksen K，Schaller S，etal.Biochemical mar kers in preclinical models of osteoporosis［J］.Biomar kers，2007，12（2）：266-286.

［8］Pizzini C，Mussap M，Plebani M，etal.C-reactive protein and serum amyloid a protein in neonatal infections［J］.Scand J Infect Dis，2000，32（2）：229-235.