β－珠蛋白基因突變與紅細胞參數的相關研究

彭運生，孫順昌，陳群蓉，謝春英，王 清

（深圳市寶安區人民醫院 檢驗科，廣東 深圳518101）

β－珠蛋白生成障礙性貧血又稱β－地中海貧血，是由β－珠蛋白基因突變導致β－珠蛋白肽鏈合成減少或缺乏所產生的貧血［1］。β－珠蛋白生成障礙性貧血主要分布在地中海沿岸和東南亞地區，據統計全球約有1.5億β－珠蛋白生成障礙性貧血患者［2］。我國長江以南區域的β－珠蛋白生成障礙性貧血的發病率也較高，其中以廣東、廣西及海南三省的發病率最高［3］。依據貧血程度，β－珠蛋白生成障礙性貧血分為輕型、中間型及重型β－珠蛋白生成障礙性貧血［4］。紅細胞參數是反映紅細胞大小及血紅蛋白含量的參數，它包括紅細胞平均容積（mean cell volume，MCV）、紅細胞平均血紅蛋白含量（mean cell hemoglobin，MCH）、紅細胞平均血紅蛋白濃度（mean cell hemoglobin concentration，MCHC）、紅細胞體積分布寬度標準差（red blood cell distribution width－standard deviation，RDW－SD）及紅細胞體積分布寬度變異系數（red blood cell distribution width－coefficient of variation，RDW－CV）等，這些指數對珠蛋白生成障礙性貧血的診斷有重要意義［5］。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血是β－珠蛋白基因雜合突變所導致，患者一般無臨床癥狀，通常需實驗室檢查才能確診［6］。本研究以輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者為研究對象，探討β－珠蛋白基因的突變類型與紅細胞參數的相關性。

1 資料與方法

1.1 對象 收集深圳地區中國漢族人群118例輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的外周血標本。男性62名，女性56名，年齡為28.1±12.6歲（8～59歲）。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血的診斷及分型標準見文獻報道［7］。前期突變分析顯示所有118例患者均存在β－珠蛋白基因雜合突變，突變類型有7種，其中IVS－II－654（C→T）突變率最高，－28（A→G）突變率最低，其它5種突變依據突變頻率的高低分別為 codon17（A→T）、codon41／42（－TTCT）、codon71／72（＋A）、codon27／28（＋C）、codon43（G→T）。本研究同時收集110例中國漢族人群體檢健康的個體，男性57例，女性53例，年齡為34.6±14.5歲（21～60歲）。

1.2 方法 用Sysmex XE－2100全自動五分類血液分析儀對患者及健康個體外周靜脈血進行分析。MCV、MCH、MCHC、RDW－SD 及 RDW－CV 通 過儀器自動計算獲得。依據7種突變類型進行分組，每組患者的各項紅細胞參數均與全部患者的相同項參數的均數進行團體t檢驗。與全部患者參數有顯著性差異的患者組再與其它患者組進行團體t檢驗。

2 結果

118例輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者，共存在7種β－珠蛋白基因突變，均為雜合突變。各組患者和正常對照組的紅細胞參數見表1，與正常對照組相比，輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的MCV、MCH、MCHC 及 RDW－SD均降低（P＜0.01），而RDW－CV則高于正常對照組（P＜0.01）。

依據7種突變類型進行分組，經與全部患者的紅細胞參數進行團體t檢驗，顯示攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者組 MCV、MCH及 MCHC高于其它突變患者組（P＜0.05），而RDW－CV低于其它突變患者組（P＜0.05）。攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者組RDW－SD與其它突變患者組無顯著差異（P＞0.05）。除攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者組外，攜帶其它突變的患者組的各項紅細胞參數與全部患者相比，各項參數均無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各類突變患者的紅細胞參數

3 討論

β－珠蛋白生成障礙性貧血它是由位于第11號染色體上的β－珠蛋白基因突變而導致的β－珠蛋白鏈合成缺陷所致［8］。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者可無癥狀或僅輕度貧血，實驗室血紅蛋白電泳檢查時患者的HbA2一般會輕度升高［9］。目前已發現的β－珠蛋白基因突變有300多種，這些突變在不同地區和人群中存在著不同的突變熱點，它們所占的比例也不相同［10］。在中國人群中已發現的β－珠蛋白基因突變約20多種，本研究前期在118例深圳地區中國漢族人群輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者中共發現7種突變，均以雜合狀態存在，以突變頻率高低依次為IVS－II－654（C→T）、codon17（A→T）、codon41／42（－TTCT）、codon71／72（＋A）、codon27／28（＋C）、codon43（G→T）、－28（A→G）。紅細胞參數可反映紅細胞大小及血紅蛋白含量，對診斷珠蛋白生成障礙性貧血有參考意義［11］。因此本研究以輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者為對象，探討β－珠蛋白基因的突變類型與紅細胞參數的相關性。

依據突變對β－珠蛋白合成的影響，β－珠蛋白基因突變可分為2類，使β－珠蛋白合成完全缺乏的突變稱為β0突變，使β－珠蛋白合成減少的突變稱為β＋突變［12］。本研究的7種突變中除IVS－II－654（C→T）和－28（A→G）突變為β＋突變外，其余5種β－珠蛋白基因突變均為β0突變（表2）。從表2各種突變效應推測IVS－II－654（C→T）和－28（A→G）突變引起的表型應輕于其余5種β－珠蛋白基因突變。

β－珠蛋白生成障礙性貧血為小細胞性貧血。與正常對照組相比，本研究118例輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的 MCV、MCH、MCHC及RDWSD均降低，這與β－珠蛋白生成障礙性貧血的特征相符。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的RDWCV高于正常對照組，顯示輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血為小細胞不均一性貧血。本研究依據發現的7種突變類型進行分組，各組患者的紅細胞參數與全部患者的紅細胞參數均數進行比較。結果顯示攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者 MCV、MCH 及MCHC高于其它突變患者，而RDW－CV低于其它突變患者。攜帶codon41／42（－TTCT）突變患者的RDW－SD與其它突變患者無顯著差異。除攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者外，攜帶其它突變的患者組的各項紅細胞參數與全部患者相比，均無顯著性差異。這顯示codon41／42（－TTCT）突變引起的表型可能輕于其它幾種β－珠蛋白基因突變。β＋與β0突變的區分并不能解釋codon41／42（－TTCT）突變引起的紅細胞參數差異。這或許與突變引起的β－珠蛋白C－端氨基酸序列改變有關。因此β－珠蛋白生成障礙性貧血的表型不僅與β－珠蛋白合成量的多少有關，也與β－珠蛋白的序列改變有關。

表2 各類突變的性質

［1］Ghedira ES，Dupin－Deguine D，Duffilot D，et al.A second observation of the rare frameshift mutation in theβ－globin gene：codon 46（＋A）（Hbb：c.138＿139insA）［J］.Hemoglobin，2011，35（2）：157.

［2］Waye JS，Nakamura－Garrett LM，Eng B，et al.β＋－Thalassemia trait due to a novel mutation in theβ－globin gene promoter：－26（A＞C）［HBB c.－76A＞C］［J］.Hemoglobin，2011，35（1）：84.

［3］榮卡彬，黃 革，蔣文玲，等.中間型β地中海貧血家系基因分子生物學特征分析［J］.中華檢驗醫學雜志，2009，32（4）：412.

［4］Angalena R，Prabitha KN，Chaudhary AK，et al.A novel homozygous point mutation at codon 82（HBB：c.247A ＞T）in the betaglobin gene leads to thalassemia major［J］.Int J Lab Hematol，2010，32（5）：548.

［5］Shang X，Rao Z，Lou J，et al.Compound heterozygosity for a rare small deletion and a common point mutation in the beta－globin gene：report of two Chinese families［J］.Int J Lab Hematol，2011，33（1）：79.

［6］Yi P，Yu F，Huang S，et al.Identification of a novel frameshift mutation at codon 53（－T）in the beta－globin gene causing dominantly inherited beta－thalassemia in a Chinese Miao family［J］.Blood Cells Mol Dis，2008，41（1）：56.

［7］Chin JY，Kuan JY，Lonkar PS，et al.Correction of a splice－site mutation in the beta－globin gene stimulated by triplex－forming peptide nucleic acids［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2008，105（36）：13514.

［8］Yu N，Kim HR，Cha YJ，et al.A novel frameshift mutation at codon 66 （HBB：c.del201A）in theβ－globin gene leads to betathalassemia［J］.Ann Hematol，2011，90（2）：243.

［9］Cadet E，Foulon K，Claisse JF，et al.First identification of a point mutation at position－83（G＞A）of the beta－globin gene promoter［J］.Hemoglobin，2009，33（3）：274.

［10］Li DZ，Liao C，Xie XM，et al.A novel mutation of－50（G－－＞A）in the direct repeat element of the beta－globin gene identified in a patient with severe beta－thalassemia［J］.Ann Hematol，2009，88（11）：1149.

［11］Dufva M，Poulsen L.Genotyping of mutation in the beta－globin gene using DNA microarrays［J］.Methods Mol Biol，2009，509：47.

［12］Mais DD，Gulbranson RD，Keren DF.The range of hemoglobin A（2）in hemoglobin E heterozygotes as determined by capillary electrophoresis［J］.Am J Clin Pathol，2009，132（1）：34.