野葛、粉葛與云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的含量比較Δ

裴香萍，劉亞明，劉計權，李慧峰，李 晶（山西中醫學院，太原 030024）

野葛、粉葛與云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的含量比較Δ

裴香萍＊，劉亞明#，劉計權，李慧峰，李 晶（山西中醫學院，太原 030024）

目的：比較野葛、粉葛與云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量。方法：樣品以30%乙醇回流提取后采用高效液相色譜法測定含量。 色譜柱為Uvis-201（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-水（梯度洗脫），流速為1.0mL·min－1，檢測波長為250nm，柱溫為室溫。結果：葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的進樣量分別在0.68～5.44μg（r＝0.9992）、0.143～1.144μg（r＝0.9993）、0.0245～0.1960μg（r＝0.9992）、0.088～0.704μg（r＝0.9994）范圍內與各自峰面積積分值呈良好線性關系；平均加樣回收率分別為98.1%、99.5%、101.1%、99.2%，RSD分別為2.17%、2.42%、2.53%、2.65%（n均為6）。葛根素含量高低排序為河南野葛＞云南葛＞山西野葛＞大別山野葛＞廣西粉葛；大豆苷含量為云南葛＞河南野葛＞大別山野葛＞山西野葛＞廣西粉葛；大豆苷元含量為河南野葛＞云南葛＞山西野葛＞大別山野葛＞廣西粉葛；染料木素含量為河南野葛＞云南葛＞山西野葛＞大別山野葛＞廣西粉葛。結論：野葛、粉葛與云南葛中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素含量差別較大，且云南葛為野葛的偽品之一，三者不能同等應用。

野葛；粉葛；云南葛；葛根素；大豆苷；大豆苷元；染料木素；高效液相色譜法；含量；比較

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd）.Ohwi的干燥根[1]，具有解肌退熱、生津透疹、升陽止瀉的功效[2]。葛根的主要有效成分為葛根素、大豆苷、大豆苷元等異黃酮類化合物[3]。大豆苷和大豆苷元具有治療和預防心肌梗死及心律失常，改善腦循環、周圍血管及微循環等心腦血管疾病，抗腫瘤及雌激素樣作用等多種藥理功效[4，5]。目前市場上除了野葛、粉葛（P.Thomsonii Benth.），還常見有云南葛（P.peduncularis Grah.）的根作為葛根在使用。云南葛[2]主要分布于云南、四川地區，又稱苦葛。已有文獻報道葛根的指紋圖譜研究[6～9]、葛根中主要成分葛根素的含量測定、野葛與粉葛的對比研究[10]。為了進一步比較不同品種之間物質基礎的區別，進而為臨床應用提供參考，本試驗采用高效液相色譜（HLPC）法測定并比較了野葛、粉葛、云南葛3個品種中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的含量，為不同品種葛根的開發、臨床應用與質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

426系列HPLC儀，含Allchromplus軟件（德國Alltech公司）；FA2014型電子分析天平（上海雷韻試驗儀器制造有限公司）；KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：150W，頻率：40kHz）；數顯恒溫水浴鍋（上海申勝生物技術有限公司）。

葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素對照品（成都思華生物技術公司，純度均＞98.0%）；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。試驗樣品均由同仁堂供貨商從不同產地供應并由山西中醫學院中藥鑒定教研室牛燕珍實驗師鑒定分別為野葛（來源分別為河南、山西、大別山）、粉葛（來源為廣西）、云南葛（來源為云南）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Uvis-201（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫（洗脫程序見表1）；流速：1.0mL·min－1；柱溫：室溫；檢測波長：250nm。色譜見圖1。

表1 梯度洗脫條件Tab 1 Gradient elution conditions

圖1 高效液相色譜圖A.混合對照品；B.野葛；C.云南葛；D.粉葛；1.葛根素；2.大豆苷；3.大豆苷元；4.染料木素Fig 1 HPLC chromatograms A.mixed control；B.P.lobata；C.P.peduncularis；D.P.thomsonii；1.puerarin；2.daidzin；3.daidzein；4.genistein

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取大豆苷、大豆苷元、染料木素對照品分別為5.72、0.98、3.52mg，分別加甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，即得大豆苷、大豆苷元、染料木素的對照品溶液。精密稱取葛根素對照品2.72mg，置5mL量瓶中，精密加入大豆苷、大豆苷元、染料木素的對照品溶液各1mL，加甲醇溶解并定容，即得葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取野葛、云南葛各0.2g，粉葛1.8g，精密加入30%乙醇50mL，稱重，加熱回流提取30min，放冷，再稱重，用30%乙醇補足失重，取續濾液作為供試品溶液。經0.45μm微孔濾膜濾過，備用。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取混合對照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00mL，置2mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，得到葛根素濃度為0.068、0.136、0.204、0.272、0.408、0.544mg·mL－1，大豆苷濃度為 0.0143、0.0286、0.0429、0.0572、0.0858、0.1144mg·mL－1，大豆苷元濃度為0.00245、0.00490、0.00735、0.00980、0.01470、0.01960mg·mL－1，染料木素濃度為0.0088、0.0176、0.0264、0.0352、0.0528、0.0704mg·mL－1的系列混合對照品溶液，經0.45μm微孔濾膜濾過，進樣10μL，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的峰面積積分值。以進樣量（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得各成分的回歸方程和相關系數（r），詳見表2。結果表明，葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的進樣 量 分 別 在 0.68～5.44、0.143～1.144、0.0245～0.1960、0.088～0.704μg范圍內與各自峰面積積分值呈良好的線性關系。

表2 線性關系考察結果（n＝6）Tab 2Result of linear relationship（n＝6）

2.5 精密度試驗

取同一混合對照品溶液（葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的濃度分別為0.204、0.0429、0.00735、0.0264mg·mL－1）10μL，連續進樣6次，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積。結果，葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素峰面積的RSD分別為1.85%、2.33%、2.12%、1.67%（n均為6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一供試品溶液（河南產野葛）適量，分別于0、2、4、8、12h測定峰面積。結果，RSD＝0.936%（n＝5），表明供試品溶液在12h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一樣品（河南產野葛）適量，按“2.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別進樣10μL，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄各成分峰面積，以外標法計算樣品中各成分的含量。結果，樣品中葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素的平均含量分別為 42.41、6.63、1.32、1.13mg·g－1，RSD 分別為 2.33%、2.41%、2.22%、2.36%（n均為6），表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素含量的樣品（河南產野葛）粉末0.1g，共6份，分別精密加入葛根素（0.46mg·mL－1）、大豆苷（0.72mg·mL－1）、大豆苷元（0.14mg·mL－1）對照品溶液10mL，染料木素（0.12mg·mL－1）對照品溶液1mL，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣10μL，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄各成分的峰面積，計算加樣回收率，結果見表3。

表3 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 3Result of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測定

取不同品種及不同產地的樣品，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別進樣10μL，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄各成分的峰面積，以外標法計算樣品中各成分的含量，結果見表4。

表4 樣品含量測定結果（mg·g－1）Tab 4Results of content determination of sample（mg·g－1）

3 討論

從表4可知，廣西產粉葛各成分含量均低于其他2個品種，但由于其栽培產量高、藥材外形美觀，在市場份額上占有較大的比例，用量較大，在臨床應用時有時代替野葛使用。

試驗結果表明，河南產野葛的葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素含量均比山西、大別山產野葛的含量更高，說明不同產地的環境、氣候、土壤、降水等條件對藥材有效成分的影響較大。故以后還將進一步對不同地區、不同氣候條件的藥材進行研究。

云南葛因其味苦，又稱苦葛[2]，因其葛根素含量較高，在西南個別地區誤作葛根使用，被列為葛根的偽品之一。本試驗結果也表明，云南葛中各成分含量相對較高。但因其有毒，只能作為農藥、殺蟲劑使用，不可作葛根入藥。

由于大豆苷元、大豆苷、葛根素、染料木素的極性不同，為保證各色譜峰具有良好的分離度，筆者試用甲醇-水（50∶50，V/V）等度洗脫，發現大豆苷、葛根素的出峰時間過早，保留時間分別為3、2min，分離度也較差；當使用甲醇-水（30∶70，V/V）等度洗脫時，大豆苷元的出峰時間過晚，保留時間達51min；后采用甲醇-水梯度洗脫，4種成分均可達到基線分離，基線漂移幅度較小，峰形良好[11]。

在制備供試品溶液時，筆者分別考察了不同提取時間（20、30、40min）的提取效果。結果表明，4種成分的含量高低依次為提取40min＞30min＞20min，但提取40min的含量與提取30min較接近，故選擇30min為提取時間。

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Comparison of Puerarin，Daidzin，Daidzein，Genistein Content of Pueraria lobata，P.thomsonii and P.peduncularis

PEI Xiang-ping，LIU Ya-ming，LIU Ji-quan，LI Hui-feng，LI Jing（Shanxi University of Traditional Chinese Medicine，Taiyuan 030024，China）

OBJECTIVE：To compare the content of puerarin，daidzin，daidzein and genistein from Pueraria lobata，P.thomsonii and P.peduncularis.METHODS：After reflux extraction of 30%ethanol，the sample was determined by HPLC.The determination was performed on Uvis-201（250mm×4.6mm，5μm）column with mobile phase consisted of methanol-water（gradient elution）at the flow rate of 1.0mL·min－1.The detection wavelength was 250nm and column temperature was ambient temperature.RESULTS：The linear range was 0.68～5.44μg for puerarin（r＝0.9992），0.143～1.144μg for daidzin（r＝0.9993），0.0245～0.1960μg for daidzein（r＝0.9992）and 0.088～0.704μg（r＝0.9994）for genistein；average recovery rates were 98.1%，99.5%，101.1%and 99.2%，RSDs were 2.17%，2.42%，2.53%and 2.65%（n＝6）.The content of puerarin was in descending order：P.lobata in Henan＞P.peduncularis＞P.lobata in Shanxi＞P.lobata in Dabieshan＞P.thomsonii in Guangxi；the content of daidzin was in descending order：P.peduncularis＞P.lobata in Henan＞P.lobata in Dabieshan＞P.lobata in Shanxi＞P.thomsonii in Guangxi；the content of daidzein was in descending order：P.lobata in Henan＞P.peduncularis＞P.lobata in Shanxi＞P.lobata in Dabieshan＞P.thomsonii in Guangxi；the content of genistein was in descending order：P.lobata in Henan＞P.peduncularis＞P.lobata in Shanxi＞P.lobata in Dabieshan＞P.thomsonii in Guangxi.CONCLUSION：The contents of puerarin，daidzin，daidzein and genistein in P.lobata，P.thomsonii and P.peduncularis were different greatly，and P.peduncularis is a false one of P.lobata.The use of them should be different.

Pueraria lobata；Pueraria thomsonii；Pueraria peduncularis；Puerarin；Daidzin；Daidzein；Genistein；HPLC；Content；Comparison

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2012）47-4462-03

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2012.47.18

Δ國家科技支撐計劃項目資助課題（2011BA107B05）

＊副教授，碩士。研究方向：中藥鑒定、中藥質量標準。E-mail：peixp69@163.com

#通訊作者：教授，碩士。研究方向：中藥資源、中藥藥效基礎。電話：0351-2272164。E-mail：liuyaming66@yahoo.com

2012-01-17

2012-03-22）