HPLC法同時測定開胸順氣丸中橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚的含量

劉宏明，楊福偉

（1.山東大學藥學院，濟南250012；2.淄博市藥品檢驗所，山東淄博255086；3.淄博職業學院，山東淄博 255314）

HPLC法同時測定開胸順氣丸中橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚的含量

劉宏明1，2＊，楊福偉3

（1.山東大學藥學院，濟南250012；2.淄博市藥品檢驗所，山東淄博255086；3.淄博職業學院，山東淄博 255314）

目的：建立同時測定開胸順氣丸中橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱，流動相為甲醇（A）-5%冰醋酸溶液（B）（梯度洗脫），流速為1.0 mL·min－1，柱溫為40℃，進樣量為10μL，檢測波長0～20 min為284 nm、20～65 min為294 nm。結果：橙皮苷進樣量在0.171 7～4.292μg范圍內（r＝0.999 8）、和厚樸酚進樣量在0.040 04～1.001μg范圍內（r＝0.999 4）、厚樸酚進樣量在0.092 80～4.640μg范圍內（r＝0.999 8）與各自峰面積積分值均呈良好的線性關系；平均回收率分別為99.88%、99.34%、99.34%，RSD分別為0.67%、1.10%、0.86%（n＝6）。結論：本法簡便、準確、重復性好、精密度高，可更好地控制開胸順氣丸的質量。

開胸順氣丸；橙皮苷；和厚樸酚；厚樸酚；高效液相色譜法；含量測定

開胸順氣丸是山東省基本藥物，為傳統中藥制劑，收載于《中國藥典》2010年版（一部），由檳榔、牽牛子、陳皮、木香、厚樸、三棱、莪術、豬牙皂8味中藥組成，具有消積化滯、行氣止痛之功效，用于氣郁食滯所致的胸脅脹滿、胃脘疼痛、噯氣嘔惡、食少納呆。《中國藥典》標準采用高效液相色譜（HPLC）法測定開胸順氣丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量[1]，也有文獻采用HPLC法單獨測定其中橙皮苷的含量[2]，但同時測定其中上述3種成分含量的方法尚未見報道。為此，筆者采用HPLC法，建立了同時測定開胸順氣丸中橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚含量的方法，可為更好地控制其質量提供依據。

1 儀器與試藥

LC-20AT HPLC儀，包括LC-20ATVP泵、SPD-20AVP紫外檢測器、CTO-20A柱溫箱、SIL-20A自動進樣器（日本島津公司）；AE 240電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KS-300E超聲波清洗機（寧波科生儀器廠）。

開胸順氣丸（河北永豐藥業有限公司，批號：20111101；山東華洋制藥有限公司，批號：11060；陜西香菊藥業集團有限公司，批號：091001）；橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110721-201014、110730-201011、110729-200411）；甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A）-5%冰醋酸溶液（B），梯度洗脫（0～20 min，35%A；20～25 min，35%A→70%A；25～50 min，70%A；50～55 min，70%A→35%A；55～65 min，35%A）；檢測波長：0～20 min為284 nm、20～65 min為294 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：40℃；進樣量：10μL。在此色譜條件下，理論板數按橙皮苷、和厚樸酚、厚樸酚計算均不低于4 000，分離度均大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的橙皮苷對照品21.46 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成橙皮苷對照品貯備液（每1 mL含橙皮苷0.858 4 mg）。精密量取上述貯備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得橙皮苷對照品溶液（每1 mL含橙皮苷0.085 84 mg）。

取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的和厚樸酚對照品10.01 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成和厚樸酚對照品貯備液（每1 mL含和厚樸酚0.400 4 mg）。

取經五氧化二磷減壓干燥至恒重的厚樸酚對照品23.20 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成厚樸酚對照品貯備液（每1 mL含厚樸酚0.928 0 mg）。

精密量取上述2種貯備液各5 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成和厚樸酚與厚樸酚對照品混合貯備液（每1 mL含和厚樸酚0.200 2 mg、厚樸酚0.464 0 mg）。再精密量取上述混合貯備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得和厚樸酚與厚樸酚對照品混合溶液（每1 mL含和厚樸酚0.020 02 mg、厚樸酚0.046 4 mg）。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品適量，研細，取約2 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率：300 W，頻率：40 kHz）40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方中藥味的比例制成缺陳皮和厚樸的陰性對照制劑100 g，按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

分別精密吸取橙皮苷對照品溶液、和厚樸酚與厚樸酚對照品混合溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，按“2.1”項下色譜條件進樣。結果，供試品色譜中呈現與橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚對照品色譜保留時間一致的色譜峰，陰性對照無干擾。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.橙皮苷對照品；B.和厚樸酚與厚樸酚對照品；C.供試品；D.陰性對照；1.橙皮苷；2.和厚樸酚；3.厚樸酚Fig 1 HPLC chromatogramsA.hesperidin control；B.honokiol and magnolol control；C.test sample；D，negative control；1.hesperidin；2.honokiol；3.magnolol

2.3 線性關系考察

分別精密吸取“2.2.1”項下橙皮苷對照品貯備液0.2、0.5、1、2、5μL，注入HPLC儀，測定峰面積。以峰面積（y）為縱坐標，進樣量（μg，x）為橫坐標，繪制標準曲線，得橙皮苷的回歸方程y＝1 022 602x－924.85（r＝0.999 8）。結果表明，橙皮苷進樣量在0.171 7～4.292μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

分別精密吸取“2.2.1”項下和厚樸酚與厚樸酚對照品混合貯備液0.2、0.5、1、2、5μL，注入HPLC儀，測定峰面積。以峰面積（y）為縱坐標，進樣量（μg，x）為橫坐標，繪制標準曲線，得和厚樸酚的回歸方程y＝1 992 403x+11 284（r＝0.999 4），厚樸酚的回歸方程y＝796 715x+37 822（r＝0.999 8）。結果表明，和厚樸酚進樣量在0.040 04～1.001μg范圍內、厚樸酚進樣量在0.092 80～4.640μg范圍內與各自峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取各對照品溶液10μL，重復進樣5次。結果，橙皮苷平均峰面積為886 090，RSD＝0.35%；和厚樸酚平均峰面積為 402 494，RSD＝0.42%；厚樸酚平均峰面積為963 173，RSD＝0.51%。可見，儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

取同一批（批號：20111101）樣品適量，共5份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，并進樣測定。結果，樣品中橙皮苷含量為7.101 mg·g－1，RSD＝0.83%；和厚樸酚含量為0.626 mg·g－1，RSD＝0.83%；厚樸酚含量為 0.925 mg·g－1，RSD＝0.48%。可見，本方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗

取“2.5”項下第1份供試品溶液適量，置于室溫下分別在放置0、2、4、6、8、10、12 h時進樣10μL測定。結果，樣品中橙皮苷平均峰面積為293 215 8，RSD＝0.81%；和厚樸酚平均峰面積為502 806，RSD＝1.10%；厚樸酚峰面積為743 373，RSD＝0.98%。可見，供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.7 加樣回收率試驗

取已知含量的同一批（批號：20111101）樣品20 g，粉碎，取1 g，精密稱定，分別精密加入“2.2.1”項下橙皮苷對照品貯備液10 mL、和厚樸酚對照品貯備液1.5 mL、厚樸酚對照品貯備液1 mL，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進樣，測定峰面積，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.8 樣品含量測定

按上述方法對3批樣品中的橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚的含量進行測定，結果見表2。

3 討論

3.1 測定成分的選擇

開胸順氣丸《中國藥典》標準只有厚樸主要成分和厚樸酚與厚樸酚的含量測定，而陳皮也是開胸順氣丸的主藥之一，其主要成分橙皮苷具有多種藥理作用[3-5]。單獨測定開胸順氣丸中橙皮苷含量的方法曾有報道[2]，但是同時測定其中橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚的含量，可以節約時間和成本，有利于方便、簡單、快速地控制該制劑的內在質量。

表2 樣品含量測定結果（n＝2）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝2）

3.2 提取方法的選擇

取本品適量，分別加甲醇超聲處理20、40、60 min，發現超聲40 min提取即較為完全。而《中國藥典》標準采用的提取方法不能將橙皮苷提取完全，且操作比較復雜。故本試驗采用超聲提取法。

3.3 測定波長的選擇

橙皮苷的最大吸收波長在284 nm附近，而和厚樸酚與厚樸酚的最大吸收波長在294 nm附近，故采用切換波長的方法可滿足各個測定成分在最大吸收波長處進行測定。

3.4 流動相的選擇

采用甲醇-乙腈-水等流動相系統等度洗脫可以很好地分離和厚樸酚與厚樸酚2種成分[6]，也可較好地分離木香烴內酯、去氫木香烴內酯、和厚樸酚與厚樸酚4種成分[7]，但不能分離橙皮苷、和厚樸酚與厚樸酚。而采用甲醇-5%冰醋酸溶液梯度洗脫使上述3種成分得到了良好分離。

試驗結果表明，本方法簡便、準確、重復性好、精密度高，可用于該制劑的質量控制。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：514.

[2] 王福霞，彭 柳，康紅英.HPLC法測定開胸順氣丸中橙皮苷的含量[J].中國藥房，2008，19（18）：1 413.

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[4] 秦得安，王曉玲.橙皮苷對羥自由基的清除作用[J].中國藥學雜志，1996，31（7）：390.

[5] 秦得安，王曉玲.橙皮苷對羥自由基引發紅細胞膜損傷的影響[J].中國藥學雜志，1996，31（7）：396.

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[7] 孫全明，柯紅梅，熊賢鋒.HPLC法同時測定開胸順氣丸中4種成分的含量[J].中國藥品標準，2010，11（2）：131.

Simultaneous Content Determination of Hesperidin，Honokiol and Magnolo in Kaixiong Shunqi Pills by HPLC

LIU Hong-ming
（School of Pharmacy，Shandong University，Jinan 250012，China）
LIU Hong-ming
（Zibo Institute for Drug Control，Shandong Zibo 255086，China）
YANG Fu-wei
（Zibo Vocational Institute，Shandong Zibo 255314，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of hesperidin，honokiol and magnolol in Kaixiong shunqi pills.METHODS：HPLC method was adopted.The separation were achieved on an Agilent ZORBAX SB-C18column with methanol（A）-5%acetic acid solution（B）as mobile phase（gradient elution）at the flow rate of 1.0 mL·min－1.The column temperature was 40℃ and the detection wavelengths were 284 nm at 0～20 min and 294 nm at 20～65 min.The injection volume was 10μL.RESULTS：The linear range was 0.171 7～4.292μg for hesperidin（r＝0.999 8），0.04 004～1.001μg for honokiol（r＝0.999 4）and 0.092 80～4.640μg for magnolol（r＝0.999 8）；the average recoveries were 99.88%（RSD＝0.67%，n＝6），99.34%（RSD＝1.1%，n＝6）and 99.34%（RSD＝0.86%，n＝6），respectively.CONCLUSION：The method is simple，accurate，reproducible and precise，and it is suitable for the quality control of Kaixiong shunqi pills.

Kaixiong shunqi pills；Hesperidin；Honokiol；Magnolol；HPLC；Content determination

R917

A

1001-0408（2012）40-3825-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.40.30

2012-05-07

2012-08-24）