壯藥解毒抗白顆粒毒理學研究△

鐘鳴周智余勝民吳超權覃君良游伯翔陳邦樹韋奇志

（1.廣西民族醫藥研究院,廣西 南寧 530001;2.廣西食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021）

壯藥解毒抗白顆粒是廣西壯民族民間驗方，由白花蛇舌草、半枝蓮、馬齒莧和龍葵等藥物組成。用于急、慢性白血病等惡性腫瘤的輔助治療。在前期開展提取工藝研究[1]及質量標準研究的基礎上，本文觀察以受試藥物ig.給藥，小鼠出現的毒性反應以及觀察連續重復給予受試藥物對大鼠產生的毒性反應及其嚴重程度、靶器官、恢復和發展情況等，確定無毒反應劑量，為該藥的安全性評價提供實驗依據，現將結果報告如下。

1 實驗材料

1.1 受試藥物：解毒抗白顆粒，臨床擬用量為口服113g原藥材/日。受試藥物為解毒抗白顆粒浸膏，棕褐色半固體，每1g浸膏相當于2.99g原藥材，相對密度1.2631(即1mL浸膏相當于3.7767g原藥材)，生產日期2009年7月13日，廣西民族醫藥研究院提供。試驗時以純化水將受試樣品配成所需濃度的藥液供試，并使各組給藥體積相等。

1.2 實驗動物及飼養條件

1.2.1 KM小白鼠，SPF級，♀♂兼用，體重17～20g，廣西食品藥品檢驗所實驗動物中心提供，生產許可證號：SCXK桂2003-0001。動物♀♂分籠群養于屏障環境，自動供水供飼，喂全價固體飼料。實驗室溫度22～25℃，相對濕度50～65%。

1.2.2 SD 大白鼠，SPF 級，♀鼠體重 188±13g，♂鼠體重 192±15g，廣西食品藥品檢驗所實驗動物中心提供，生產許可證號:SCXK桂2003-0001。動物飼養于屏障環境，每籠5～6只，自動供水供飼，固體全價飼料和滅菌生活用水喂養；實驗室溫度20～26℃，相對濕度45～75%，動物實驗環境許可證號SYXK桂2003-0002。

1.3 實驗試劑：總蛋白、白蛋白、總膽紅素、尿素、肌酐、總膽固醇、甘油三酯、葡萄糖、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、磷酸肌酸激酶試劑盒，桂林優利特醫療電子有限公司產品。鉀、鈉、氯試劑盒，北京北化康泰臨床試劑有限公司產品。凝血酶原時間試劑盒，上海太陽生物技術有限公司產品。血細胞分析儀用溶血劑、血細胞分析儀用稀釋液，桂林高新區寶利泰醫療電子有限公司產品。校準血清(CAL2350)、質控血清(HN1530)，RANDOX公司產品。電解質分析儀用校準液(漂移、斜率)，深圳市希萊恒醫用電子有限公司產品。純化水，廣西食品藥品檢驗所制備。

1.4 實驗儀器：7020全自動生化分析儀、Botest-3100全自動血液分析儀、GF-D800半自動生化分析儀、LG-PABER-1血小板聚集凝血因子分析儀、JA5003N電子天平、TD5A-WS臺式低速離心機、BI-2000醫學圖象分析系統。

2 實驗方法

2.1 小鼠急性毒性試驗[2]：取解毒抗白顆粒浸膏200mL，于80℃水浴濃縮成含原藥材4.316g·mL-1作為1號受試藥液；按劑距1:0.8用純化水將1號藥液逐一稀釋得2號 (3.453g·mL-1)、3號(2.762g·mL-1)、4 號(2.210g·mL-1)、5 號(1.768g·mL-1)受試藥液，分別供5個組動物灌胃投藥，使各劑量組給藥體積相等。取上述小鼠50只(♀♂各半),隨機均分為5組，禁飼(供水)15h后分別灌胃給予5種濃度的受試藥液40mL·kg-1。觀察給藥后至第7天各鼠的反應及死亡等情況。

2.2 大鼠長期毒性試驗[3]：取上述大鼠隨機分4組，每組22只(♀♂各半)，3 個組分別按原藥材 94.4g·kg-1、47.2g·kg-1、23.6g·kg-1的劑量給解毒抗白顆粒原生藥浸膏，對照組給純化水。每日灌胃給藥1次，各組給藥體積均為25mL/kg/次，連續91天。觀察給藥期間大鼠的一般表現及毒性反應情況；每周稱量體重1次，并根據體重調整給藥量；每周測定各籠大鼠食量1次。分別于末次給藥次日、停藥2周后各組取部分大鼠(禁飼15～16h)腹腔注射戊巴比妥鈉40mg·kg-1麻醉，經腹主動脈采血作血液學、血液生化學檢查；剖取部分臟器稱重，按每100g體重所含臟器重量換算成臟器重量指數；剖取主要臟器作肉眼及組織學檢查。將各給藥組測定值與對照組比較，作組間t檢驗。

3 實驗結果

3.1 解毒抗白顆粒小鼠急性毒性試驗結果：給藥后大部分小鼠活動增加，部分小鼠給藥后即抽搐、死亡，大部分死亡發生在藥后30min內，死亡動物無明顯性別差異；以上小鼠毒性反應程度與劑量正相關。對死亡小鼠作解剖檢查，主要內臟器官均未見明顯的肉眼形態學改變。未死亡小鼠于藥后8h逐步恢復正常。小鼠死亡情況及Bliss法計算LD50為原藥材96.473g·kg-1(95%可信限為 84.79～108.31g·kg-1)，LD5為原藥材 65.875g/kg，LD95為原藥材 141.28g·kg-1，具體結果見表 1。

表1 解毒抗白顆粒對小鼠ig.給藥急性毒性結果

3.2 解毒抗白顆粒大鼠長期毒性試驗結果

3.2.1 給藥91天及停藥觀察2周期間大鼠的一般情況：各給藥組動物的外觀體征、行為活動、食量、腺體分泌、呼吸、糞便等未見明顯異常。大劑量組有3只動物死亡。除大劑量組有體重增長緩慢現象外，各給藥組大鼠的體重增長值均與對照組相近。大劑量組大鼠的攝食量略少于對照組，其它給藥組大鼠的攝食量均與對照組接近。試驗結果表明，受試樣品在試驗劑量下對大鼠的一般狀況無明顯影響。

3.2.2 對大鼠血液學指標的影響：給藥91天后，大劑量組的LY、MCHC值高于對照組(P＜0.05、0.01)，大劑量組的HGB值低于對照組(P＜0.01)，大、中、小劑量組的 RET 值均高于對照組(P＜0.01)。停藥2周后，大、中劑量組的HGB值低于對照組(P＜0.05)，大劑量組的HCT低于對照組(P＜0.05)，大、中劑量組的RET值均高于對照組(P＜0.01)。見表 2。

試驗結果表明，受試樣品在試驗劑量下連續給藥91天，可出現RET明顯增高的現象，這種現象與劑量正相關，但在停藥2周后有明顯恢復正常的趨勢；在94.4g·kg-1劑量下可致血液HGB輕度降低，停藥2周后也有恢復的趨勢；提示這些現象是可逆的。上述LY、HCT、MCHC的變化幅度小，無規律性，且在正常值范圍，認為系屬正常波動，不具明顯的毒理學意義。受試樣品在試驗劑量下對大鼠的其它血液學指標均未見有明顯毒性意義的影響。

3.2.3 對大鼠血生化指標的影響：給藥91天后，大劑量組的TBil和GLU略高于對照組(P＜0.05)，大劑量組的UREA和TG略低于對照組(P＜0.05、0.01)，大、中、小劑量組的 CK 均低于對照組(P＜0.01、0.05)。停藥 2 周后，這些指標均恢復到正常范圍(P＞0.05)。見表3。

試驗結果表明，受試樣品在試驗劑量下連續給藥91天，可出現CK活性明顯降低的現象，這種現象與劑量正相關，但在停藥2周后CK活性基本恢復至正常水平，提示這種現象是可逆的。上述T-Bil、GLU、UREA、TG的變化幅度小，或無規律性，或在正常值范圍，認為系屬正常波動，不具明顯的毒理學意義。受試樣品在試驗劑量下對大鼠的其它血液生化指標均未見有明顯毒性意義的影響。

表2 解毒抗白顆粒長毒試驗血液學測定結果(±s)

表2 解毒抗白顆粒長毒試驗血液學測定結果(±s)

注：1、時間A為給藥91天后；大劑量組n=10，中劑量組n=12，小劑量組n=12，水對照組n=12；2、時間B為停藥2周后；大劑量組n=9，中劑量組n=10，小劑量組n=10，水對照組n=10。

項目 時間 大劑量組 中劑量組 小劑量組 對照組WBC(109/L)LY(109/L)MO(109/L)GR(109/L)RBC(1012/L)HGB(g/L)HCT(%)MCV(fL)MCH(Pg)MCHC(g/L)PLT(109/L)RET(%)PT(s)ABABABABABABABABABABABABAB 3.30±1.37 2.42±0.66 2.69±1.08*2.16±0.59 0.28±0.16 0.16±0.07 0.33±0.21 0.11±0.03 6.45±0.49 6.41±0.37 121.2±4.61*123.3±3.00*29.1±1.39 28.2±1.35*45.2±2.37 44.1±1.30 18.8±0.95 19.2±0.81 416.5±6.70*437.7±14.8 416.2±82.4 326.3±22.5 16.3±2.69*5.50±1.09*11.2±1.22 13.7±0.94 2.53±1.14 2.17±0.81 2.07±0.93 1.92±0.72 0.20±0.10 0.12±0.08 0.27±0.14 0.13±0.08 6.54±0.43 6.37±0.55 125.3±5.80 123.0±6.65*29.9±1.63 28.6±2.37 46.0±1.85 45.0±1.44 19.2±0.71 19.3±0.84 418.1±9.63 431.0±15.0 383.2±58.1 323.9±49.3 9.63±1.57*4.55±0.76*12.0±1.20 13.6±1.13 2.74±0.89 2.51±1.44 2.28±0.80 2.13±1.15 0.22±0.07 0.20±0.18 0.25±0.09 0.18±0.13 6.61±0.53 6.54±0.54 124.6±5.16 125.5±5.40 29.6±1.52 28.8±2.00 45.1±2.24 44.2±1.69 18.9±1.04 19.2±0.85 420.4±9.75 436.0±15.0 422.0±51.2 330.6±47.4 6.04±1.47*3.70±1.21 10.7±1.77 13.5±0.70 2.23±1.14 2.64±1.20 1.77±0.89 2.26±0.93 0.19±0.12 0.22±0.16 0.27±0.19 0.16±0.13 6.74±0.39 6.80±0.59 127.7±3.34 130.0±6.93 30.0±1.05 30.1±2.26 44.7±1.62 44.5±2.72 18.9±0.77 19.1±0.97 424.8±6.67 432.1±16.7 388.8±60.7 346.9±64.6 3.50±1.02 3.25±1.03 11.7±0.79 13.4±0.50

3.2.4 主要臟器解剖檢查結果：給藥91天后及停藥2周后，剖取各組大鼠的心、肺、肝、脾、腎、腦、胃、腸、胸腺、膀胱、子宮、卵巢、睪丸、附睪等臟器作肉眼觀察，均未見明顯的形態學改變。

給藥91天剖取各組大鼠的主要臟器心、肺、肝、脾、腎、腦、胸腺、腎上腺、子宮、睪丸、附睪測定重量指數，大、中、小劑量組的肝、腎臟器指數均大于對照組(P＜0.01、0.05)，但停藥2周后這些臟器指數均與對照組相近(P＞0.05)。試驗結果表明，受試樣品在試驗劑量下給藥91天可致大鼠的肝、腎臟器指數增大，但停藥2周后肝、腎臟器指數均恢復至對照組的水平，提示這些改變是可逆的。受試樣品在試驗劑量下對大鼠的其它主要臟器指數均無明顯的大體形態學影響，具體結果見表4。

3.2.5 對大鼠的病理組織學檢查：給藥91天后及停藥2周后分別剖取大劑量組、對照組大鼠的心、肺、肝、脾、腎、大腦、腦垂體、脊髓、胸骨、胃、小腸、大腸、腎上腺、胸腺、腸系膜淋巴結、膀胱、子宮、卵巢、睪丸、附睪作組織學檢查。結果大劑量組1例心多灶狀間質纖維化，對照組1例心灶狀間質炎；大劑量組2例肝細胞灶性輕度脂肪變性、2例肝細胞輕度水變性，對照組3例肝細胞灶性輕度脂肪變性；大劑量組1例腎腫大、彌漫腎小管水變性、蛋白管型形成和灶狀壞死。

停藥2周后，大劑量組1例肝細胞灶性輕度脂肪變性、1例肝細胞輕度水變性，對照組4例肝細胞灶性輕度或中度脂肪變性；大劑量組1例脾巨噬細胞增生吞噬大量含鐵血黃素；對照組1例睪丸發育不良，曲細精管內精原細胞缺失無精子，附睪內未見精子。

表3 解毒抗白顆粒長毒試驗血液生化學測定結果(±s)

表3 解毒抗白顆粒長毒試驗血液生化學測定結果(±s)

項目 時間 大劑量組 中劑量組 小劑量組 對照組TP(g/L)ALB(g/L)T-Bil(umol/L)ALT(U/L)AST(U/L)ALP(U/L)CK(U/L)GLU(mmol/L)UREA(mmol/L)CREA(umol/L)T-Cho(umol/L)TG(mmol/L)K(mmol/L)Na(mmol/L)Cl(mmol/L)ABABABABABABABABABABABABABABAB 60.1±4.41 62.2±4.64 34.0±3.48 35.4±4.06 6.24±1.34*5.81±1.35 46.5±33.6 34.2±9.32 159.0±29.1 156.0±24.8 58.2±25.9 48.6±21.5 379±209*1045±287 5.15±0.68*5.12±0.87 6.92±0.74*6.91±0.84 90.0±9.03 109.0±12.8 1.60±0.56 2.03±0.48 0.82±0.24*1.46±0.67 4.91±3.10 3.98±0.23 146.3±28.3 140.2±2.06 105.0±4.56 106.7±1.71 60.9±4.27 60.9±4.82 35.0±3.32 34.1±6.23 5.33±0.94 6.00±1.47 31.5±6.02 35.4±9.34 137.5±33.8 150.8±48.1 52.3±14.7 49.9±33.3 558±117*1020±702 4.93±1.03 4.94±0.96 7.14±1.01 6.60±1.28 90.7±9.50 107.0±17.8 1.90±0.43 1.75±0.48 1.18±0.46 1.48±0.96 4.43±1.33 4.11±0.31 142.6±6.72 140.7±2.04 106.6±4.89 107.5±2.17 63.1±5.87 62.9±6.43 35.7±5.48 36.2±4.04 6.08±2.02 5.83±1.58 31.2±5.32 45.1±48.3 156.7±59.6 165.7±62.3 42.7±21.4 38.1±21.7 725±235*852±347 5.34±1.65 4.46±0.73 7.30±1.52 6.51±0.47 95.6±8.77 112.2±9.42 1.76±0.57 2.15±1.01 1.82±0.95 1.49±0.60 4.06±0.45 4.13±0.29 143.0±5.50 141.3±1.57 105.1±3.96 107.9±2.12 61.4±4.75 60.6±6.06 35.4±3.70 35.7±4.81 5.19±0.96 6.70±1.87 33.1±5.88 35.3±8.18 158.2±57.6 136.3±26.2 46.2±19.8 38.8±18.5 1116±563 1223±945 4.35±0.76 4.99±0.69 7.51±0.52 6.50±0.98 93.1±6.19 101.3±19.0 1.94±0.43 1.74±0.40 1.53±0.58 1.18±0.38 4.20±0.52 3.93±0.24 144.8±3.55 141.5±1.28 107.1±4.15 108.5±1.95

上述大劑量組的心臟、肝臟、腎臟、脾臟的組織學病變，或與對照組間無明顯差異，或屬大鼠的常見自發病，或為偶發病變，均不能確認與受試樣品相關，故基本認為不具毒理學意義。表明受試樣品在試驗劑量下對大鼠的主要臟器均無明顯的組織學影響。

4 討論

急性毒性試驗結果表明，以解毒抗白顆粒浸膏給小鼠灌胃投藥，LD50為原藥材 96.473g·kg-1(95%可信限 84.79～108.31g·kg-1)，相當于臨床擬用日劑量的51倍；LD95為原藥材141.28g·kg-1，相當于臨床擬用日劑量的75倍；LD5為原藥材65.875g·kg-1，相當于臨床擬用日劑量的35倍。提示解毒抗白顆粒按臨床日劑量口服可能是安全的。

長期毒性試驗結果表明，按原藥材 94.4g·kg-1、47.2g·kg-1、23.6g·kg-1的劑量(臨床擬用日劑量的 50倍、25倍、12.5倍)分別給大鼠連續灌服解毒抗白顆粒原生藥浸膏91天，可出現血液RET明顯增高、血清CK活性明顯降低、肝和腎臟器指數增大的現象；在94.4g·kg-1劑量組還出現體重增長緩慢、攝食量減少、血液HGB輕度降低；但這些改變均為可逆的，在停藥2周后可恢復正?；蛴谢謴驼５内厔荨Ｎ从^察到其它明顯的慢性毒性反應和延緩毒性反應。

表4 解毒抗白顆粒長毒試驗臟器指數測定結果(g/100g;)

網織紅細胞增高而不伴隨明顯的貧血現象，可能不具毒理學意義，僅提示骨髓造血功能增強；磷酸肌酸激酶活性降低，一般認為無毒理學意義；肝腎臟器指數增大而無明顯肝腎功能損害的生化指標變化，可能是藥物代謝過程加重肝臟和腎臟負擔的一種正常代償反應。

此外，由于受試樣品性狀的限制，灌胃給藥的體積須達到25mL·kg-1才滿足上述劑量的要求。灌胃量大也可能是造成動物攝食量降低和體重增長緩慢的原因之一，一些觀察指標的變化是否也與此有關尚無法確定。

試驗結果提示，解毒抗白顆粒樣品按臨床擬定劑量、途徑、療程在臨床上應用可能是安全的。

[1]王志萍,鐘鳴,譚珍瑗,等.壯藥解毒抗白顆粒提取工藝研究[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(5):28～30.

[2]SFDA.藥物研究技術指導原則(2005年):中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則.

[3]SFDA.藥物研究技術指導原則(2005年):中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則.