hOGG1基因多態性與川北地區肺癌易感性關系的研究

杜國波 譚榜憲 柳 彌 馬代遠 舒小紅

川北醫學院第一附屬醫院腫瘤科，四川南充 637000

hOGG1基因多態性與川北地區肺癌易感性關系的研究

杜國波 譚榜憲 柳 彌 馬代遠 舒小紅

川北醫學院第一附屬醫院腫瘤科，四川南充 637000

目的 探討四川北部地區漢族人群8-羥基鳥嘌呤糖苷酶（hOGG1）基因Ser326Cys位點多態性狀況及其與該地區肺癌易感性的關系，并與其他地區人群進行比較。 方法 采用病例對照研究方法和聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性（polymerise chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）方法檢測四川北部地區肺癌患者125例和非腫瘤患者125例（對照組）hOGG1基因第326位點Ser/Cys基因型分布，并比較不同基因型與肺癌發病危險的關系。 結果 病例組的Ser/Ser、Ser/Cys、Cys/Cys基因型頻率分別為15.2%、27.2%、57.6%，而對照組分別為32.0%、42.4%、25.6%。χ2檢驗顯示兩組基因型分布差異有統計學意義（P<0.05）。與攜帶Ser/Ser基因型相比，攜帶 Ser/Cys基因型者患肺癌風險增加（OR=1.351，95%CI=0.674～2.707，P=0.397)，而攜帶 Cys/Cys基因型者肺癌風險增加3倍 （OR=4.737，95%CI=2.384～9.413，P=0.000)。 結論 hOGG1基因Ser326Cys多態性可能與四川北部肺癌易感性有關,攜帶Cys/Cys基因型肺癌風險明顯增加。

肺癌；基因多態性；人8-羥基鳥嘌呤糖苷酶（hOGG1）；易感性

國內外研究表明，肺癌的發生發展與環境和遺傳因素顯著相關。人8-羥基鳥嘌呤糖苷酶 （human 8-oxoguanine glycosylase 1，hOGG1）是一種DNA修復基因，它可特異地切除8-羥基鳥嘌呤并對損傷DNA進行修復。hOGG1基因存在多態性，第7外顯子的第1245位堿基可出現C/G顛換，使第326位密碼子可編碼絲氨酸（ser，密碼子TCC）或編碼半胱氨酸（cys，密碼子 TGC），形成 hOGG1-Ser326和 Cys326兩種蛋白，后者導致hOGG1修復8-OH-G的能力低下，從而增加了基因突變和癌癥的風險[1]。目前一些研究顯示，hOGG1基因多態性與肺癌易感性有關。但在不同地區、人群的研究結果不一致。本研究首次檢測四川北部地區漢族人群hOGG1 Ser326Cys基因多態性分布,了解該基因多態性與該地區肺癌易感性的關系，并與其他地區人群進行比較。

1 資料與方法

1.1 一般資料

125例肺癌患者為2008年9月～2011年3月川北醫學院附屬醫院胸外科收治，有明確病理依據，未行放化療，其中，男93例，女32例，平均年齡58.0歲，所有患者均為四川北部地區境內漢族人，并在當地長期居住20年以上，其中吸煙者76例（60.8%）。對照組為125例本院骨科骨折外傷非腫瘤患者，其中，男89例，女36例，平均年齡56.4歲，吸煙者43例（34.4%）。兩組人群來自南充及其區縣、廣元、遂寧和巴中等四川北部地區。兩組既往均無慢性支氣管炎、肺結核、肺氣腫、矽肺等呼吸系統疾病及家族腫瘤病史。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。兩組一般資料詳見表1。

1.2 方法

1.2.1 提取DNA取兩組人群外周血2 mL，置入加有EDTA的抗凝試管中，標本置入-20℃低溫冰箱保存備用或立即按試劑盒操作步驟行DNA提取。DNA試劑盒和D2000 Marker由天根生化科技（北京）有限公司提供。

1.2.2 PCR-RFLP 實驗 PCR 體系（總體積為 25 μL）：12.5 μL2×Taq PCR MasterMix，2 μLDNA（60～100 ng），hOGG1 上下游引物各 1 μL （10 μmol/L），去離子水補足總體積至 25 μL。每個標本設β-Globin陽性對照，反應條件一致。反應條件：95℃變性 3 min，95℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s， 共 35 個循環，72℃延伸10 min。實驗所用的PCR儀、凝膠成像儀和電泳儀、高速冷凍離心機、紫外透射分析儀和 PCR MasterMix均由天根生化科技（北京）有限公司提供。hOGG1Ser326Cys及對照β-Globin基因引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。

表1 肺癌組及對照組一般資料情況[n（%）]

hOGG1 基因序列：HOGG1_F 5′-CAGTGGATTCTCATTGC CTTC-3′，G+C 含 量 47.60% ，Tm 值 59.7℃ ；HOGG1_R 5′-TGT GCAAACTGACTGCTTGAT-3′，G+C 含量 42.90%，Tm 值 59.5℃。PCR產物大小為 505 bp。β-Globin基因引物序列：5′-CAACTTCATCCACGTTCACC-3′和 5′GAAGAGCCAAGGAC AGGTAC-3′，PCR 產物大小為 268 bp。

RFLP 反應：PCR 產物 5 μL+10XBufferG 2 μL+StaI酶1 μL+無核酸酶水18 μL。該體系放入37℃水浴鍋內酶切5 h。酶切產物用1.5%～2.0%瓊脂糖凝膠電泳（125 V，50 mA，30 min）檢測，并用凝膠掃描成像系統觀測結果及拍照。

1.3 統計學分析

兩組年齡情況對比采取t檢驗；性別、吸煙狀況、不同基因型頻率分布差異采用χ2檢驗；基因多態性分析采用Logistic Regression；相對危險度用比值比OR（odds ratio）和95%CI（confidential interval）可信區間表示；應用 SPSS 13.0 軟件進行統計學分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

PCR-RFLP實驗結果顯示，DNA標本均有PCR產物，產物經StaI消化后產生3種不同的電泳條帶，即為不同基因型。純合子Ser/Ser基因型由于沒有酶切位點，經StaI酶消化后仍為505 bp。突變型產生酶切位點，純合子Cys/Cys經StaI酶消化后成為153 bp和352 bp兩個片段，而雜合子Ser/Cys產生153 bp、352 bp和505 bp 3個片段。病例組和對照組經檢驗基因頻率均處于Hardy-Weinberg平衡狀態（P>0.05）。

兩組人群hOGG1 Ser326Cys基因型頻率的差異，病例組的 Ser/Ser、Ser/Cys、Cys/Cys的基因型頻率分別為 15.2%、27.2%、57.6%，而對照組分別為 32%、42.4%、25.6%。 χ2檢驗顯示兩組基因型分布差異有統計學意義（P<0.05）。Logistic回歸分析顯示，與攜帶Ser/Ser基因型者相比，攜帶Ser/Cys基因型肺癌風險增加（OR=1.351，95%CI=0.674～2.707，P=0.397），但差異無統計學意義。而攜帶Cys/Cys基因型肺癌風險增加 3 倍 （OR=4.737，95%CI=2.384～9.413，P=0.000）。具體結果見表2。

表2 hOGG1基因型分布及其與肺癌的關系[n（%）]

將Ser/Ser和Ser/Cys基因型合并與Cys/Cys基因型進行比較，發現兩組間差異有統計學意義（χ2=26.34，P=0.000），攜帶Cys/Cys基因型者患肺癌的危險增加近3倍 （OR=3.948，95%CI=2.310～6.747），提示 Cys/Cys 基因型是肺癌的易感因素。見表3。另外，統計分析顯示吸煙明顯增加肺癌易感性（P<0.05）。

表3 hOGG1Cys/Cys型基因與肺癌的關系[n（%）]

3 討論

DNA修復基因hOGG1Ser326Cys的突變或多態可能導致DNA修復能力低下繼而導致肺癌易感性增加。Liu CJ等[2]和Chang CH等[3]報道在臺灣hOGG1基因多態性與吸煙肺癌易感性有關，其中Cys/Cys基因型明顯增加肺癌易感性，且與吸煙有協同作用。國內王威等[4]報道hOGG1Ser326Cys多態與中國人肺癌易感性相關，與Zienolddiny S等[5]和Okasaka T等[6]的研究結果相同。四川北部地區人口眾多，逾2 000萬，以漢族人群為主。該地區經濟較不發達，礦產及工業資源少，工業污染致癌作用較輕，研究本地區腫瘤發生、發展及其他相關因素干擾因素較少。本研究顯示，校正年齡、性別、吸煙等因素后攜帶Cys/Cys基因型者患肺癌風險較Ser/Ser增加3倍，而Ser/Cys風險略微增加，提示hOGG1基因多態性可能成為四川北部地區肺癌易感性指標。

最近的一項Meta分析[7]指出：hOGG1基因Ser326Cys多態性與肺癌風險之間的顯著關聯 （Cys/Cys vs Ser/Ser：OR=1.29，95%CI=1.16～1.44，P<0.001；Cys/Cys vs Cys/Ser+Ser/Ser：OR=1.22，95%CI=1.12～1.33，P<0.001）。亞組分析還發現與亞洲人的整體癌癥風險相關，這與Guan P等[8]的meta分析一致。但也有不同結論，Qian B等[9]和Lee CH等[10]報道該基因多態性與肺癌無關。而比利時De Ruyck K等[11]卻報道Ser 326Cys雜合基因型降低肺癌風險。Li H等[12]的一項Meta分析也指出：攜帶Cys/Cys基因型者并不顯著增加患肺癌風險（OR=1.15，95%CI=0.94～1.41 vs Ser/Ser）， 但在亞洲人群中與Ser/Ser基因型相比攜帶等位基因Cys人群肺癌風險增加（OR=1.18，95%CI=1.01～1.38）， 需要今后更大樣本的多種族基因研究。

探討川北地區漢族人群肺癌易感、高發的可能的遺傳機制，可能為該地區肺癌的病因預防和個體化防治提供理論依據，對肺癌高危人群的行為干預和化學預防可能更具有針對性。

[1]錢乾，劉仍允，雷哲，等.hOGG1基因Ser326Cys多態性與肺癌易感性的 meta分析研究[J].中國肺癌雜志，2011，14（3）：205-210.

[2]Liu CJ，Hsia TC，Tsai RY，et al.The joint effect of hOGG1 single nucleotide polymorphism and smoking habit on lung cancer in Taiwan[J].Anticancer Res，2010，30（10）：4141-4145.

[3]Chang CH，Hsiao CF，Chang GC，et al.Interactive effect of cigarette smoking with human 8-oxoguanine DNA N-glycosylase 1 （hOGG1）polymorphisms on the risk of lung cancer：a case-control study in Taiwan[J].Am J Epidemiol，2009，170（6）：703-707.

[4]王威，吳擁軍，吳逸明.DNA修復基因hOGG1多態與肺癌遺傳易感性[J].癌變·畸變·突變，2005，17（2）：101-103.

[5]Zienolddiny S，Campa D，Lind D，et al.Polymorphisms of DNA repair genes and risk of non-small cell lung cancer[J].Carcinogenesis，2006，27（3）：560-567.

[6]Okasaka T，Matsuo K，Suzuki T，et al.hOGG1 Ser326Cys polymorphism and risk of lung cancer by histological type[J].J Hum Genet，2009，54（12）：739-745.

[7]Wei B，Zhou Y，Xu Z，et al.The effect of hOGG1 Ser326Cys polymorphism on cancer risk： evidence from a meta-analysis[J].PLoS One，2011，6（11）：e27545.

[8]Guan P，Huang D，Yin Z，et al.Association of the hOGG1 Ser326Cys polymorphism with increased lung cancer susceptibility in Asians：a meta-analysis of 18 studies including 7592 cases and 8129 controls[J].Asian Pac J Cancer Prev， 2011，12（4）：1067-1072.

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[11]De Ruyck K，Szaumkessel M，De Rudder I，et al.Polymorphisms in base-excision repair and nucleotide-excision repair genes in relation to lung cancer risk[J].Mutat Res，2007，631（2）：101-110.

[12]Li H，Hao X，Zhang W，et al.The hOGG1 Ser326Cys Polymorphism and LungCancerRisk：AMeta-analysis[J].CancerEpidemiolBiomarkersPrev，2008，17（7）：1739-1745.

Research of relationship between genetic polymorphism of hOGG1 gene and susceptibility to lung cancer in the population of northern Sichuan of China

DU Guobo TAN Bangxian LIU MiMA Daiyuan SHU Xiaohong
Department of Oncology,First Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College,Nanchong 637000,China

Objective To explore the relationship between Ser326Cys polymorphism in hOGG1 gene and susceptibility to lung cancer in the population of northern Sichuan of China.Methods A case-control study was conducted.Polymerise chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)was used to detect the genotype′s frequency of hOGG1 Ser326Cys gene in 125 lung cancer patients and 125 non-cancer disease patients(control group).Results The data showed that the frequencies of Ser/Ser、Ser/Cys、Cys/Cys genotype were 15.2%,27.2%and 57.6%in cases,and 32.0%,42.4%and 25.6%in controls respectively.There was statistical significance between two groups(P<0.05).Furthermore,Cys/Cys vs Ser/Ser:OR=4.737,95%CI=2.384-9.413,P=0.000;Cys/Ser vs Ser/Ser:OR=1.351,95%CI=0.674-2.707,P=0.397.Conclusion The hOGG1 Ser326Cys polymorphism may be associated with lung cancer risk,hOGG1 Cys/Cys genotype increase risk of lung cancer.

Lung cancer;Gene ticpolymorphism;Human 8-hydroxyguanine glycosylase(hOGG1);Susceptibility

R734.2

A

1674-4721（2012）11（c）-0005-03

2012-08-13 本文編輯：陳 俊）