氣質(zhì)聯(lián)用法測定空心膠囊中的鄰苯二甲酸酯

曾金紅，江濤，焦新萍，鄭云峰，林海娃，宋海燕，黃曉麗

（紹興市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測院國家黃酒產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心,浙江 紹興 312071）

鄰苯二甲酸酯（phthalate esters）是鄰苯二甲酸形成的酯的統(tǒng)稱，又稱酞酸酯，縮寫PAEs，俗稱塑化劑，作為塑料的增塑劑，可增大產(chǎn)品的可塑性和柔韌性，廣泛地應用于藥物載體、驅(qū)蟲劑、染料助劑、涂料以及潤滑油中[1-3]。研究表明，PAEs具有雌激素的特征及抗雄激素生物效應[4-6]，會干擾動物和人體正常的內(nèi)分泌功能,引起動物與人體內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂,在體內(nèi)長期積累會對人體的生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)帶來危害[7-9]。PAEs可通過飲水、進食、皮膚接觸和呼吸等途徑進入人體[10-12]，這類化合物已成為全球性的主要環(huán)境有機污染物。

傳統(tǒng)空心膠囊的成分為明膠、食用色素及其它材料等；它是一種特殊的藥物和食品輔料，隨藥物制劑或食品一起進入人體消化系統(tǒng)，為人體所吸收[13-14]。曾報道過藥品及保健品檢測出含有鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）及鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）等鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)。《中華人民共和國藥典》（2010版）第二部藥用輔料中將鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯3種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)列為藥用輔料。據(jù)了解，上述物質(zhì)在藥品生產(chǎn)過程中主要作為輔料使用，多用于片劑包衣、空心膠囊等[15]。

2011年6月，中華人民共和國衛(wèi)生部辦公廳發(fā)布了《衛(wèi)生部辦公廳關于通報食品及食品添加劑鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)最大殘留量的函（衛(wèi)辦監(jiān)督函[2011]551號）》，其中明確指出“食品容器、食品包裝材料中使用鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，應當嚴格執(zhí)行《食品容器、包裝材料用添加劑使用衛(wèi)生標準》（GB9685-2008）規(guī)定的品種、范圍和特定遷移量或殘留量，不得接觸油脂類食品和嬰幼兒食品，食品、食品添加劑中的鄰苯二甲酸二（α-乙基已酯）（DE-HP）、鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）和鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）最大殘留量分別為 1.5、9.0、0.3 mg/kg。”歐盟指令 2007/19/EC 規(guī)定了DEHP、DBP、DINP等幾種PAEs在食品中的特定遷移量限值，如 DEHP、DBP、DINP 的限值分別為 1.5、0.3、9 mg/kg[16]。

國家食品藥品監(jiān)督管理局在《關于含鄰苯二甲酸酯類保健食品有關輔料替代事宜的通知》（國食藥監(jiān)保化[2011]337號）中，要求保健食品配方中含鄰苯二甲酸酯類（塑化輔料）物質(zhì)的，申請人應當申請使用枸櫞酸三乙酯、三乙酸甘油酯或其他符合相關規(guī)定的物質(zhì)，替代鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，或者申請從配方中去除鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)。

目前，明膠在許多食品、藥品和保健品中被廣泛應用，因此其質(zhì)量安全性直接關系到食品、藥物成品或保健品的質(zhì)量安全。為了解市場上食品、藥品及保健品包衣材料空心膠囊中塑化劑的情況，本實驗對25批市售的空心膠囊進行鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)檢測，結(jié)果顯示氣相色譜-質(zhì)譜法靈敏度高，操作簡便、精確且針對性強、效率高。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 6890N-5973GC/MS氣相色譜-質(zhì)譜儀：美國安捷倫公司；離心機：上海天美；超聲波發(fā)生器：上海科導公司；均質(zhì)器：美國SBI公司，Milli-Q純水儀，微孔膜：美國Milipore公司；等。

鄰苯二甲酸二甲酯（DMP），鄰苯二甲酸二乙酯（DEP），鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP），鄰苯二甲酸二丁酯（DBP），鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP），鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP），苯二甲酸二（2-乙氧 基）乙酯（DEEP），鄰苯二甲酸二戊酯（DPP），鄰苯二甲酸二己酯（DHXP），鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP），鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP），鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（DCHP），鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP），鄰苯二甲酸二苯酯（DPhP），鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP），鄰苯二甲酸二壬酯（DNP）標準品來自德國Dr,Ehrenstorfer公司；正己烷，色譜純。水由Milli-Q超純水系統(tǒng)制備，其他試劑均為重蒸餾分析純或色譜純，儲存于棕色玻璃瓶中。空心膠囊為市場上任意挑選。

所用玻璃器皿洗凈后用重蒸水淋洗3次，丙酮浸泡1 h，在200℃下烘烤2 h，冷卻至室溫備用。

1.2 標準溶液的配制和樣品處理

標準儲備溶液：分別準確稱取適量的鄰苯二甲酸酯標準品，用正己烷溶解并定容，配制成100 mg/L的混合儲備液，于4℃冰箱中避光保存。

前處理方法的優(yōu)化：借鑒文獻[17]的方法并加以改進，取空心膠囊適量，剪碎，稱取1.0010 g，浸泡在50mL的超純水中于室溫下腫脹，然后在50℃水浴直至溶解；加乙醚50 mL，小心振搖，靜置分層，量取乙醚層置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干；用正己烷轉(zhuǎn)移并定容至1.0mL，搖勻，微孔膜過濾，濾液供氣相色譜-質(zhì)譜檢測。

空白試驗：空白實驗使用的試劑按樣品前處理方法處理后，進行GC/MS分析；為保證試驗數(shù)據(jù)的準確度，對所用溶劑進行本底空白扣除。

1.3 GC-MS檢測條件

色譜條件：選用HP-25毛細管色譜柱（30m×0.32mm×0.25 μm）；載氣為氦氣（純度）≥99.999%；進樣口溫度：250℃；程序升溫：100℃保持1 min，以15℃/min的速度升溫至120℃，再以5℃/min的速度升溫至280℃保持2 min。后運行溫度300℃；傳輸線溫度：280℃；進樣量：1 μL；柱流速：1.2 mL/min。

質(zhì)譜條件：溶劑延遲：5min；離子源溫度（EI）：230℃。掃描模式：全掃描模式。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方法的優(yōu)化

空心膠囊的主要成分-明膠在冷水中溶解度低，可緩慢吸水膨脹軟化，且在此過程易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，即使超聲也出現(xiàn)溶解不充分；因此，本實驗對前處理進行優(yōu)化：首先待空心完全膨脹后再用水浴加熱，有助于加速膠體組織的解題溶解，可以大大改善這種狀況；其次，用乙醚進行液-液萃取后，水浴蒸干，可減少空白膠囊中雜質(zhì)干擾。實驗結(jié)果表明圖譜上雜質(zhì)干擾現(xiàn)象明顯改善。

2.2 鄰苯二甲酸酯標準品出峰譜圖

以16種混合PAEs標準品的溶液為樣品進行液-液萃取，經(jīng)氣相色譜GC/MS分離測定，總離子流色譜圖（TIC）見圖1；保留時間、質(zhì)譜特征離子及定量離子如表1所示。

2.3 線性回歸方程及檢出限

圖1 16種鄰苯二甲酸酯標準品溶液掃描總離子流色譜圖Fig.1 The TIC picture of 16 mixed PAEs standard solutions

表1 16種鄰苯二甲酸酯類化合物的保留時間及特征離子Table 1 Retention time and characteristic ions of 16 PAEs

配制一系列濃度為 0.5、2、4、8、10 mg/L 的鄰苯二甲酸酯的混合標準溶液，以濃度為橫坐標，定量離子的峰面積為縱坐標，繪制校準曲線，標準線性回歸方程和相關系數(shù)如表2所示。

表2 16種鄰苯二甲酸酯類化合物線性方程、相關系數(shù)及檢出限Table 2 Linear equation,correlation coefficient and limits of detection for each of sixteen kinds of PAEs

以10倍信噪比（S/N=10）和扣除溶劑空白后計算定量檢測下限，16種鄰苯二甲酸酯的檢出限如表2所示。

2.4 回收率和精密度

分別進行0.5和4.0 mg/L濃度水平的加標回收試驗，每個添加濃度按照確定的分析方法做6次平行測定，考察峰面積、精密度和回收率（扣除溶劑空白）。測得的回收率和相對標準偏差見表3。

表3 16種鄰苯二甲酸酯類化合物加標回收率(n=6)Table 3 Recovery of sixteen kinds of PAEs at different concentrations added(n=6)

由表3可知，樣品的回收率為72.52%～106.37%，相對標準偏差為2.25%～8.86%；表明儀器精密度良好，能夠滿足實際檢測的要求。

2.5 樣品測試

按1.2所述的優(yōu)化方法處理空心膠囊樣品，經(jīng)檢測（扣除溶劑空白），市售的25批空心膠囊中，4批空心膠囊檢出含有DIBP和DBP兩種鄰苯二甲酸酯類化合物，1批空心膠囊檢出含有DBP，數(shù)據(jù)見表4。

表4 空心膠囊中鄰苯二甲酸酯類化合物平均含量Table 4 Contents of PAEs in vacant capsules

3 結(jié)論與討論

用GC-MS聯(lián)用分析技術(shù)測定了空心膠囊中鄰苯二甲酸酯類化合物的含量，該方法在測定濃度范圍內(nèi)線性關系好，回收率和重現(xiàn)性良好，結(jié)果表明，在25批空心膠囊樣品中，有4批空心膠囊檢測含有鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）和鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）；1批空心膠囊中檢出含有DBP。

鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)對健康的影響取決于其攝入量，雖然偶然食用少量的鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)不會對健康造成危害，但是在藥品生產(chǎn)領域，應在產(chǎn)品說明書中標明藥用輔料或包衣材料中鄰苯二甲酸酯類等物質(zhì)的含量，保證消費者的知情權(quán)。

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