小鼠成纖維細胞飼養(yǎng)層的制備及C57BL／6小鼠胚胎干細胞系的建立

張小梅，方廖瓊，王智彪

（重慶醫(yī)科大學生物醫(yī)學工程學院 省部共建超聲醫(yī)學工程國家重點實驗室超聲醫(yī)學工程重慶市市級重點實驗室，重慶400016）

小鼠成纖維細胞飼養(yǎng)層的制備及C57BL／6小鼠胚胎干細胞系的建立

張小梅，方廖瓊，王智彪

（重慶醫(yī)科大學生物醫(yī)學工程學院 省部共建超聲醫(yī)學工程國家重點實驗室超聲醫(yī)學工程重慶市市級重點實驗室，重慶400016）

目的：制備小鼠成纖維細胞飼養(yǎng)層并建立C57BL／6小鼠胚胎干細胞（ESC）系，為進一步建立人ESC系提供依據(jù)。方法：取妊娠12.5～14.5 d的胎鼠，組織消化法分離培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）；收集C57BL／6小鼠3.5 d的囊胚培養(yǎng)于小鼠制作的飼養(yǎng)層上；分離內(nèi)細胞團（ICM），擴增傳代40代以上。觀察ESC集落的生長情況。采用堿性磷酸酶（AKP）染色、免疫組織化學早期胚胎特異性表面抗原（SSEA－1）、八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4（OCT－4）染色和體內(nèi)分化實驗對ESC集落進行鑒定。結(jié)果：分離培養(yǎng)后得到的ESC可穩(wěn)定傳代至40代以上，且均呈集落樣生長。經(jīng)AKP、SSEA－1和OCT－4染色后ESC均呈紅褐色陽性表達，接種于裸鼠均可形成畸胎瘤；HE染色，有3個胚層組織成分。結(jié)論：成功建立了C57BL／6小鼠ESC系。

胚胎成纖維細胞；C57BL／6小鼠；胚胎干細胞；堿性磷酸酶

胚胎干細胞（embryonic stem cell，ESC）是從早期胚胎內(nèi)細胞團和原始生殖細胞中分離出來的全能干細胞，具有無限增殖和全能分化的潛力。由于小鼠ESC具有胚胎嵌合和生殖系嵌合能力［1］以及在特定條件下可定向分化［2－3］等的特性，因此近年來ESC在早期胚胎發(fā)育研究［4］、基因打靶技術(shù)的改進［5］和利用細胞移植進行疾病的治療［6］等研究領(lǐng)域得到了廣泛的應用。……