心腦通絡液對腦梗死大鼠腦組織Glu、Asp含量的影響

吳限，徐瑩，陳鵬

(黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040)

腦血管疾病是神經內科最為常見疾病，也是成人致殘的常見因素，在世界范圍內已成為繼心臟病、癌癥之后第3位的致死性疾病，這不僅嚴重地影響著老年人的生活質量，也給社會和家庭帶來沉重的負擔。谷氨酸(Glu)和天門冬氨酸(Asp)是興奮性氨基酸(EAA)的遞質，廣泛存在中樞神經系統(CNS)中。當發生腦缺血時，Glu和Asp會異常升高，在神經元缺血損傷中起重要作用［1］。本實驗是通過觀察各組的腦梗死大鼠的腦組織中Glu、Asp含量，探討心腦通絡液治療腦梗死的作用機理。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 動物及藥物

健康SD大鼠，體質量250～300g(黑龍江中醫藥大學藥物安全性評價中心提供)。制備濃度分別為0.54ml/ml(高劑量組)和0.27ml/ml(低劑量組)的心腦通絡液(黃芪 50g，地龍 20g，桃仁 20g，紅花 20g，當歸尾 20g，赤芍 20g，川芎 20g，太子參 20g，水蛭 10g，菟絲子20g等，黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院制劑室提供)。用生理鹽水制備成濃度為0.033g/ml的步長腦心通(咸陽步長制藥有限公司生產，每粒0.4g)藥液。

1．1．2 試劑及儀器 低溫離心機;ASP試劑盒;Glu試劑盒等。

1．2 方法

1．2．1 分組及給藥 將健康雄性SD大鼠編號后隨機分為5組，分別為心腦通絡液高劑量組(高劑量組)、心腦通絡液低劑量組(低劑量組)、步長腦心通對照組(對照組)、假手術組和模型組。假手術組和模型組予同等體積的0.9%生理鹽水灌胃，1日1次。治療組大鼠分別于術前5天至處死前予灌胃給藥，劑量標準為:高劑量組5.40ml/kg，低劑量組2.70ml/kg，對照組0.33g/kg，每日1次。在造模后每時間點(6h、12h、24h、48h)各取8只大鼠用高效液相色譜儀檢測Asp和Glu的含量指標。

1．2．2 模型的復制 參照文獻［2－3］，用線栓法制備大腦中動脈局灶性腦缺血的大鼠模型。

1．2．3 檢測指標及方法 按照試劑盒說明，將各組大鼠的腦組織去除小腦和延髓，制備好10%腦組織勻漿，用離心機離心10min，提取腦勻漿的上清液。用高效液相色譜儀測定其Glu、Asp的含量。

2 結果

2．1 心腦通絡液對腦梗死大鼠腦組織中Glu含量的影響

見表1可知，腦梗塞6h，模型組大鼠腦組織Glu含量開始顯著增加，12h有所下降，但仍有顯著性差異(P ＜0.01)，24h、48h無統計學意義(P ＞0.05);各治療組與同時間點模型組相比，腦梗塞6h、12h時大鼠腦組織中Glu含量均有不同程度降低，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05)，以高劑量組降低最明顯;24h、48h各治療組腦組織Glu含量有所增加，但除48h對照組、高劑量組外，均無統計學意義;高、低劑量組與同點對照組比較，各高劑量組(除48h)有統計學意義(P＜0.01或P＜0.05);各治療組與同點假手術組比較，6h、12h(除高劑量組)各組均有顯著性差異(P＜0.01)。

2．2 心腦通絡液對腦梗死大鼠腦組織中Asp含量的影響 見表2。

表1 各組大鼠的腦組織中Glu的含量(±s)

表1 各組大鼠的腦組織中Glu的含量(±s)

注:各組相比:假手術組、各治療組與同時間點模型組相比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;治療組與同時間點假手術組比較，※P＜0.05，※※P＜0.01;高、低劑量組與同時間點的對照組相比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別Glu(μmol/g·prot)6h12h24h48h假手術組 8 257．78±29．13▲▲ 261．52±36．63▲▲n 277．00 ±26．69 272．82 ±31．19模型組 8 464．01 ±36．83 384．88 ±31．76 268．59 ±30．02 250．64 ±36．42對照組 8 375．56±31．42▲▲※※ 336．45 ±36．31▲※※ 289．15±27．14 296．87 ±36．14▲▲低劑量組 8 370．30±29．50▲▲※※ 313．18 ±46．65▲▲※※ 281．43±26．06 278．73 ±29．87高劑量組 8 327．97±32．25▲▲※※＊＊ 296．95 ±28．11▲▲＊ 255．63±28．42* 286．66 ±29．76▲

表2 各組大鼠的腦組織中Asp的含量(±s)

表2 各組大鼠的腦組織中Asp的含量(±s)

注:各組相比:假手術組、各治療組與同時間點模型組相比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;治療組與同時間點假手術組比較，※P＜0.05，※※P＜0.01;高、低劑量組與同時間點的對照組相比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別Asp(μmol/g·prot)6h12h24h48h假手術組 8 307．73±27．57▲▲ 315．30 ±33．35▲▲ 313．58 ±26．23▲▲ 318．11±23．79 n▲▲模型組 8 525．61 ±22．81 542．03 ±33．72 558．71 ±28．65 570．08 ±27．15對照組 8 461．25±34．96▲▲※※ 478．33 ±33．47▲▲※※ 491．22 ±29．77▲▲※※ 500．76±22．99▲▲※※低劑量組 8 469．09±26．59▲▲※※ 482．81±37．54▲▲※※ 494．32±33．13▲▲※※ 505．12±25．00▲▲※※高劑量組 8 436．99±37．69▲▲※※ 447．37 ±29．04▲▲※※ 456．09 ±26．90▲▲※※ 465．40±22．12▲▲※※＊

在腦梗塞6h時，模型組大鼠腦組織中Asp含量開始增加，腦梗死后48h時Asp含量達到頂峰(P＜0.01);給藥后各治療組與同時間點模型組相比，大鼠腦組織中的Asp含量有不同程度地下降，且有顯著性差異(P＜0.01)，尤其以高劑量組下降最為明顯;高、低劑量組(除48h高劑量組外)與同時間點對照組相比均無顯著性差異(P＞0.05);各治療組與同時間點假手術組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。

3 討論

現代醫學有研究表明，興奮性氨基酸遞質的興奮毒性參與了缺血發作及其再灌流損傷的病理過程，腦缺血發作初期Glu、Asp含量第一次升高可造成缺血灶周圍半暗區的細胞膜去極化，Ca2+內流增加，造成腦組織損傷;起病后5h～5天時，損傷的周圍組織進一步釋放Glu、Asp，導致Glu、Asp含量的第二次升高，這種可擴播的神經興奮毒性導致半暗區的擴大，引起梗塞灶體積增加［4］。本實驗結果表明，心腦通絡液可有效降低腦缺血發作時和缺血后再灌注時Glu和Asp的濃度，抑制興奮性氨基酸遞質的興奮毒性，從而控制腦梗塞病情的進一步惡化，對腦梗塞的恢復起到積極有效地治療作用。

心腦通絡液是李延教授根據中醫理論，在汲取歷代著名醫家經驗的基礎上，根據多年臨床經驗，在補陽還五湯基礎上加水蛭、太子參和菟絲子等藥組成。方中重用黃芪為君，大補脾胃之元氣，令氣旺血行，瘀去絡通［5］。太子參、菟絲子、當歸、水蛭四藥共為臣藥。其中太子參性甘平，味微苦，補氣健脾，生津潤肺;菟絲子性甘平，味辛，補腎益精，養肝明目。兩藥合用可助黃芪補虛固本，補而不燥。當歸尾活血通絡不傷血、水蛭破血消癥不留瘀，兩藥合用使補而不滯。川芎活血祛瘀，兼有行氣作用，赤芍清熱涼血，散瘀止痛，紅花活血通經，祛瘀止痛，桃仁可活血祛瘀。赤芍、川芎、桃仁、紅花四藥合用助當歸尾、水蛭活血祛瘀，在本方為佐藥;地龍通經活絡，力專善走，周行全身，以行藥力，亦為佐藥。本方重用補氣藥與少量活血藥相配，氣旺則血行以固本，化瘀通絡以治標，使補氣不壅滯，活血而不傷正，標本兼治，共奏益氣活血之功效。

［1］ 許紹芬．神經生物學［M］．上海:上海醫科大學出版社，1998:154－155．

［2］ 吳限，陳鵬，陳曦．心腦通絡液對腦梗死大鼠腦組織IL－8、IGF－1含量的影響［J］．中醫藥信息，2010，27(6):49－52

［3］ Zea－Longa E，Weinstein PR，Carlson，et al．Reversible middle artery occlusion without craniectomy in rats［J］．Stroke，1989，20(1):84－91．

［4］ 王哲，劉麗波，劉暢，等．腦梗塞患者血及腦脊液中興奮性氨基酸遞質的改變及意義［J］．中國實驗診斷學，2002，6(6):369－371．

［5］ 李巖，李丹，李書霖．心腦通絡液預處理聯合針刺后處理對缺血再灌注大鼠心肌梗死范圍的影響［J］．中醫藥學報，2011，39(5):36－39．