十精丸改善卵巢功能及美容作用的研究

陳麗娟，李偉，王加志，張麗宏，趙晶，馬偉

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007;2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

皮膚是雌激素的敏感靶器官。雌激素通過與皮膚細(xì)胞上的雌激素受體(estrogen receptor，ER)結(jié)合而發(fā)揮生理作用。隨著年齡增長，女性最早從30歲后即會出現(xiàn)雌激素水平下降的趨勢，加之各種因素的干擾，使皮膚出現(xiàn)自然老化和光老化，表現(xiàn)為皮脂分泌量減少，表皮干燥，皮膚膠原和水份含量下降，彈性降低，特別是絕經(jīng)后雌激素的低水平，更加重了這種情況。從系統(tǒng)性雌激素療法首次應(yīng)用以來，人們即發(fā)現(xiàn)雌激素除了治療多種婦科疾病外，對皮膚功能還有明顯的改善作用，特別表現(xiàn)在抗皮膚老化和改善更年期綜合征上。但雌激素替代療法所帶來的負(fù)作用如增加子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌的發(fā)病率等［1］，使其使用的安全性受到了限制。而用中醫(yī)藥來維護(hù)卵巢內(nèi)分泌功能，調(diào)整雌激素水平，對延緩皮膚衰老、維護(hù)皮膚健美狀態(tài)則有著無可比擬的優(yōu)勢。

十精丸出自明代《普濟(jì)方·諸虛門》，有“溫腎滋腎，益精填髓，養(yǎng)心益智、平肝明目……烏須發(fā)，悅?cè)蓊仭钡淖饔茫?］，是中醫(yī)養(yǎng)生美容保健的傳統(tǒng)名方。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

14～16月齡wistar雌性大鼠40只，體質(zhì)量(280±20)g，購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1．2 實(shí)驗(yàn)藥物

十精丸方組:枸杞子、熟地黃、桂心、杭菊花、山茱萸、菟絲子、肉蓯蓉、川椒、柏子仁、白茯苓各等份。購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)佳木斯學(xué)院附屬醫(yī)院中藥局。

尼爾雌醇:北京四環(huán)制藥有限公司生產(chǎn)，批號20100401。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 自然衰老模型建立

14～16月齡Wistar雌性大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成4組，每組10只，即模型組、十精丸高、低劑量組、陽性對照組。

2．2 藥物制備

十精丸(各等份，200g/劑)，加水浸泡1h，文火煎煮2h，每煎取汁200ml，共2次，將兩煎混合后濃縮至50ml，為高劑量組(含生藥4.0g/ml);濃縮至100ml，為中藥低劑量組(含生藥2.0g/ml)。置4℃冰箱保存，灌胃給藥，實(shí)驗(yàn)周期6周。

2．3 標(biāo)本制備

2．3．1 血清制備 于最后一次給藥后，禁食水12h，乙醚吸入麻醉后，摘取眼球采血3ml，以3000r/min離心15min，吸取血清0.5ml于eppenelorf管中。

2．3．2 形態(tài)學(xué)取材和光鏡檢查

于大鼠背部正中，剪取1cm×1cm皮膚，去除脂肪，生理鹽水清洗后，以4%甲醛固定待檢;摘取卵巢，去除脂肪，以4%多聚甲醛固定待檢。將經(jīng)4%多聚甲醛固定24h以上的各組大鼠皮膚、卵巢標(biāo)本，經(jīng)酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，常規(guī)切片(5um)，HE染色，供光學(xué)顯微鏡觀察。

2．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3．1 大鼠血清雌二醇(E2)含量測定結(jié)果 見表1。

表1 各組大鼠血清中E2含量測定結(jié)果(±s)

表1 各組大鼠血清中E2含量測定結(jié)果(±s)

注:與空白組比較，※P＜0．01，◆P＜0.05;與陽性對照組比較，★P ＜0.01，●P＞0.05。

組別 n劑量 E2(pg/ml)模型組10 13．156 ±4．880陽性對照組 10 0．15mg/100g25．791 ±13．920※十精丸低劑量組 10 2．0g/ml18．630 ±2．650◆▲★十精丸高劑量組 10 4．0g/ml21．877 ±3．780※▲●

各給藥組E2含量明顯高于空白對照組，十精丸高劑量組與空白對照組相比差異極顯著(P＜0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;低劑量組與空白對照組相比，差異較為顯著(P＜0.05)。結(jié)果表明，十精丸對受試大鼠血清E2水平有不同程度地提高，提示十精丸具有提高生殖內(nèi)分泌功能、改善卵巢狀態(tài)的作用。

3．2 組織形態(tài)學(xué)結(jié)果

3．2．1 不同給藥組大鼠皮膚組織形態(tài)學(xué)觀察(光鏡200×)見圖1～圖4。

圖1 十精丸高劑量組(光鏡200×)

圖2 十精丸低劑量組(光鏡200×)

圖3 尼爾雌醇對照組(光鏡200×)

圖4 模型組(光鏡下200×)

模型組:表皮角質(zhì)層角化增厚，基底層有明顯色素沉著，真皮層膠原纖維稀疏，呈玻璃樣變，皮脂腺汗腺導(dǎo)管改變不顯著。

十精丸組:以高劑量改變明顯，表皮角質(zhì)層變薄，基底層色素沉著明顯減輕;真皮層變厚，膠原纖維致密豐富，皮脂腺腺管擴(kuò)張，分泌旺盛。

陽性藥對照組:表皮角質(zhì)層較厚，基底層色素沉著明顯，真皮膠元纖維細(xì)胞稍多，汗腺、皮脂腺變化不明顯。

可見十精丸能促進(jìn)皮膚真皮膠原纖維細(xì)胞增殖，減少基底層色素沉著，角化層變薄，從而改善皮膚衰老狀態(tài)，具有延緩皮膚衰老的作用。

3．2．2 各組大鼠卵巢光鏡觀察結(jié)果(光鏡200×)見圖5～圖8。

圖5 十精丸高劑量(光鏡200×)

圖6 十精丸低劑量組(光鏡200×)

圖7 尼爾雌醇對照組(光鏡200×)

圖8 模型組(光鏡200×)

模型組:成熟卵細(xì)胞1個(gè)，初級卵細(xì)胞2個(gè)，次級卵細(xì)胞3個(gè);黃體6組，間質(zhì)細(xì)胞少，有少量纖維細(xì)胞，說明卵巢功能降低。

十精丸組:以高劑量組有明顯改善:成熟卵細(xì)胞多3個(gè)，初級卵細(xì)胞6個(gè)，次級卵細(xì)胞4個(gè);黃體13組，間質(zhì)細(xì)胞增生明顯，卵巢功能活躍。

陽性藥對照組:可見成熟卵細(xì)胞1個(gè)，初級卵細(xì)胞3個(gè)，次級卵細(xì)胞3個(gè);黃體7組，間質(zhì)細(xì)胞輕度增生。較空白對照組有所改善。

可見十精丸能改善卵巢功能，促進(jìn)卵巢細(xì)胞增殖。

4 討論

現(xiàn)代神經(jīng)內(nèi)分泌功能減退學(xué)說認(rèn)為，隨著年齡增加，激素分泌異常，機(jī)體靶組織對某些激素或活性物質(zhì)的反應(yīng)明顯降低(如受體表達(dá)下調(diào))，可造成機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)嚴(yán)重破壞［3］。尤其對即將進(jìn)入圍絕經(jīng)期的女性而言更是如此。雌激素能使女性產(chǎn)生并維持第二性征，具有生育能力。而且其受體存在于多處器官和組織中，如子宮、陰道、乳房、皮膚、大腦等，尤其對皮膚具有保護(hù)作用［4］，所以皮膚是雌激素作用的靶器官之一。若雌激素水平下降，女性就會表現(xiàn)出體表皮膚的外在衰老征象如皮膚松弛、皺紋增多、脂肪堆積等;所以，保養(yǎng)和調(diào)整卵巢的內(nèi)分泌功能，保持血中雌激素水平的穩(wěn)定即能延緩女性皮膚衰老，起到美容養(yǎng)顏?zhàn)饔谩?/p>

補(bǔ)肝腎藥物能改善神經(jīng)內(nèi)分泌免疫從而延緩衰老。中醫(yī)補(bǔ)腎法正是通過調(diào)節(jié)垂體－性腺功能來改善內(nèi)源性激素分泌而產(chǎn)生美容抗衰作用的［5］，可見中醫(yī)補(bǔ)肝腎、益精血的治療法則正是這一思想的集中體現(xiàn)。所以，通過探討機(jī)體衰老機(jī)制與卵巢的分泌功能和形態(tài)變化的相關(guān)性，將中醫(yī)藥學(xué)相關(guān)理論及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)手段相結(jié)合，成為中醫(yī)美容學(xué)學(xué)術(shù)研究的思路之一。十精丸能有效地改善皮膚和卵巢的衰老狀態(tài)，具有恢復(fù)其年輕狀態(tài)、延緩衰老的活性作用。其通過整體調(diào)節(jié)，多靶點(diǎn)作用，恢復(fù)卵巢分泌功能，提高機(jī)體雌激素水平，從而使與之相作用的靶組織受到保護(hù)，不僅保證更年期女性健康，還能達(dá)到美容駐顏的目的。

本研究通過對自然老齡大鼠的卵巢和皮膚形態(tài)學(xué)觀察、血清雌二醇(E2)水平測定，初步探討了補(bǔ)腎方藥十精丸調(diào)整卵巢內(nèi)分泌功能、延緩皮膚衰老的作用機(jī)制，為十精丸進(jìn)一步的研究和應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

［1］ 廖慧娟．復(fù)方尼爾雌醇片預(yù)防去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中國骨質(zhì)疏松雜志，2003，9(1):57－59．

［2］ 明·朱木肅．普劑方［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1983．

［3］ 李衛(wèi)．皮膚衰老及抗衰老研究進(jìn)展［J］．中華醫(yī)學(xué)美學(xué)美容雜志，2004，10(1):60－62．

［4］ 袁靜，陳全珠，侯正明，等．養(yǎng)血調(diào)肝方對初老雌性大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌免疫影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2005，11(1):34－36．

［5］ 楊萬章．補(bǔ)腎法作用機(jī)理的臨床及實(shí)驗(yàn)研究近況［J］．浙江中醫(yī)雜志，1994，39(2):84－87．