TGF－β1/Smads 和ERK 表達異常在高鹽飲食誘導的大鼠血管重構中的作用*

劉 嬋， 商黔惠，△， 閔曉強， 陳劍玲， 毛萬姮

(遵義醫學院1臨床醫學研究所，2附屬醫院心內科，貴州 遵義563000)

高鹽是導致心血管疾病發生的重要環境因素之一。流行病學調查發現每天多進食100 mmol/L NaCl 可增加腦卒中、冠心病及心血管疾病發生率［1］。長期高鹽飲食不僅導致血壓升高，而且有獨立于血壓之外的多重作用，可直接導致血管、心臟及腎臟等組織器官纖維化［2－4］，但其機制尚未完全明了。轉化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF－β1)被認為是最重要的細胞外基質調節因子之一，可促進細胞外基質沉積，抑制降解細胞外基質酶的活性［5］，參與了包括高血壓、血管成形術后再狹窄、動脈粥樣硬化等心血管疾病的發病過程，與血管重構有著密切的關系。TGF－β1/Smads 信號通路是血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)、醛固酮(aldosterone，ALD)、炎癥因子等所致器官纖維化的共同通路，調節成纖維細胞分化、增殖及膠原合成，TGF－β1通過其受體及下游的胞內效應分子Smad 蛋白家族實現調節細胞生物功能的細胞膜到細胞核的信息傳遞。高鹽可使組織局部腎素－ 血管緊張素系統(renin－angiotensin system，RAS)激活，誘導高血壓大鼠動脈組織血管緊張素Ⅱ1 型(angiotensinⅡtype 1，AT1)受體密度和mRNA 表達增加、動脈壁增厚和膠原沉積［6－8］。已有研究表明，給予AngⅡ可促進腎臟，心臟TGF－β1的產生和激活，AT1受體拮抗劑(angiotensin receptor blocker，ARB)能抑制其過表達［9］。TGF－β1除通過Smad 通路，也通過介導細胞外信號調節激酶(extracellular signal－regulated kinase，ERK)等通路傳遞信號至細胞核內［10］。Wang等［11］和Tharaux 等［12］證實ERK 阻斷劑影響AngⅡ介導的Ⅰ型膠原合成從而緩解血管纖維化，TGF－β1介導的ERK 通路與血管重構關系密切，絲裂原激活蛋白激酶(mitogen－activated protein kinase，MAPK)超家族能通過與TGF－β1/Smads 通路的交互通話影響Smads 活性參與血管纖維化過程［13－14］。但TGF－β1/Smads 與ERK 信號通路在高鹽飲食致血管重構中的作用及相互影響尚未完全明了。因此，本實驗通過對TGF－β1/Smads 與ERK 信號通路中關鍵性信號分子表達的研究，進一步探討高鹽飲食引發血管重構的機制及ARB 干預的效應。

材 料 和 方 法

1 材料

雄性Wistar 大鼠由重慶第三軍醫大學大坪醫院實驗動物中心提供，許可證號為SCXK－(渝)2007－005;含NaCl 分別為0.5%和8%的顆粒飼料購自廣東省醫學實驗動物中心，許可證號為SCXK－(粵)2008－0002;替米沙坦由海南賽力克藥業有限公司惠贈;TGF－β1、磷酸化Smad2/3(phospho－Smad2/3，p－Smad2/3)和Smad7Ⅰ抗購自Santa Cruz，增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和磷酸化ERK1/2 (phospho－ERK1/2，p－ERK1/2)Ⅰ抗購自武漢博士德生物技術有限公司，通用型免疫組化檢測試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)，濃縮型DAB 顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)，Trizol 試劑購自Invitrogen，Qiagen RNeasy mini kit(Qiagen)。

2 方法

2.1 模型的建立及分組 Wistar 大鼠適應性飼養1周后，隨機分為3 組:正常對照組(C 組)13 只，高鹽模型組(M 組)24 只，替米沙坦干預組(T 組)13 只。C 組飼以正常鹽飼料(0.5%NaCl)，M 組飼以8%高鹽飼料，T 組飼以8%高鹽飼料，同時給予替米沙坦灌胃，替米沙坦起始劑量2 mg/kg，隨后根據血壓情況每2 周調整1 次劑量，使血壓盡量控制在正常范圍內，替米沙坦最大劑量至40 mg/kg。各組大鼠均在相同標準環境下飼養，自由飲用自來水，飼養24周。

2.2 血壓測定 用BESN－Ⅱ多通道動物無創測壓儀測量大鼠尾動脈壓，每只大鼠測量3 次，取其平均值作為該大鼠該次的尾動脈壓。大鼠適應性飼養1周后開始測壓，作為基礎壓，隨后每2 周測量1 次。實驗結束后測定大鼠頸總動脈壓。根據實驗終末尾動脈壓與基礎壓的比較及頸動脈壓水平，將M 組分為模型高血壓組(MH 組)12 只和模型血壓正常組(MN 組)12 只，共飼養24 周。高血壓大鼠判定標準:處理后血壓增加20 ～30 mmHg 并＞120 mmHg［15］。

2.3 HE 染色 組織經固定24 h 后，進行脫水、透明及石蠟包埋。脫蠟至水→蘇木素染液3 ～4 min→自來水(流水)沖洗30 s→1%鹽酸乙醇分化返蘭2 ～3 s→自來水(流水)沖洗5 ～10 min→伊紅染液2 min→自來水(流水)沖洗30 s →95%乙醇數秒→95%乙醇數秒→無水乙醇數秒→烤箱烤干，60 ℃3 ～5 min→中性樹膠封片。統一在400 倍的顯微鏡下觀察并拍片，每個標本選取5 個橫切面，用Image Pro－ Plus 6.0 圖像分析系統測量主動脈和腸系膜動脈中膜厚度(media thickness，MT)(按順時針方向測5 個值取均值)。

2.4 Masson 染色 取主動脈、腸系膜動脈一級分支固定24 h 后，進行脫水、透明及石蠟包埋。Masson染色步驟:石蠟切片脫蠟至水→蘇木素染液7 min→流水沖洗→1%鹽酸酒精分化→流水沖洗→麗春紅酸性復紅染色5 min→0.5%冰乙酸沖洗→1%磷鉬酸數秒→0.5%冰乙酸沖洗→2%亮綠染色1 min →烤箱烤干(60 ℃3 ～5 min)→中性樹膠封片。Masson染色使膠原纖維呈綠色，肌纖維和彈力纖維呈紅色。每個標本隨機取5 個視野，拍照記錄。用Image－Pro Plus 6.0 軟件進行分析，測量血管膠原容積分數(collagen volume fraction，CVF)，CVF 為膠原面積與記錄區域總面積的比值，每個標本取5 個視野的均值作為其結果。

2.5 主動脈Smad2、Smad3 和Smad7 實時熒光定量

PCR 用Trizol 試劑提取大鼠主動脈中膜總RNA，隨后按Qiagen RNeasy Mini Kit 說明書對RNA 進行純化，紫外分光光度計測定樣本在260 和280 nm 的吸光度值(A260和A280)，所得A260/A280在1.80 ～2.20之間認為純度符合要求。配置40 μL 50 mg/L RNA逆轉錄液，逆轉錄合成cDNA 后，進行PCR 反應。結果以目的基因/β－actin 的比值進行統計分析。

2.6 免疫組化染色檢測主動脈和腸系膜動脈PCNA、p－ERK1/2、TGF－β1、p－Smad2/3和Smad7 表達 主動脈、腸系膜動脈石蠟切片常規脫蠟至水，3%過氧化氫封閉10 min，然后進行抗原修復，檢測TGF－β1和Smad7 的切片置入裝有檸檬酸鹽緩沖液(pH9.0)的微波盒中，微波中火修復12 min，取出微波盒自然冷卻至室溫;檢測PCNA、p－ERK1/2 和p－Smad2/3 的切片放入裝有檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)的高壓鍋中，修復90 s，關閉電源，冷卻15 min后放氣，打開鍋蓋，自然冷卻至室溫，取出玻片置于濕盒中，PBS 沖洗3 次，每次3 min，將組織周圍的水擦干，滴加Ⅰ抗將整個組織覆蓋(Ⅰ抗的濃度:PCNA 1∶100，p－ERK1/2 1∶50，TGF－β11∶100，p－Smad 2/3 1∶50，Smad7 1∶50)，4 ℃冰箱過夜，將濕盒從冰箱取出，室溫下復溫20 min，PBS 沖洗，滴加Ⅱ抗聚合物，37 ℃孵育30 min，PBS 沖洗，滴加Ⅱ抗37 ℃孵育30 min，PBS 沖洗，DAB 顯色，鏡下控制反應時間，流水沖洗10 min，蘇木素復染3 ～5 min，流水沖洗10 min，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。使用Leica DM2500 光學顯微鏡照相記錄圖片，每張切片在固定的曝光時間、固定的光圈數和固定的顯微鏡亮度情況下，400 倍鏡下進行圖片的采集。利用Image－Pro Plus 6.0 圖像分析軟件，校正好光密度，隨機對每個標本的5 幅圖片進行分析平均吸光度(胞漿表達)或陽性細胞表達率(胞核表達)，每組分析6 個標本。平均吸光度計算方法:即主動脈或腸系膜動脈中膜中陽性染色的積分吸光度(IA)與其動脈中膜面積的比值;陽性細胞表達率計算方法:即主動脈或腸系膜動脈中膜中陽性染色細胞核的數量與其動脈中膜總細胞核數量的比值。

3 統計學處理

應用SPSS 13.0 統計軟件進行數據處理。計量數據用均數±標準差(±s)表示，兩兩比較采用t 檢驗;多組間比較采用方差分析，方差齊使用LSD 法，方差不齊使用Tamhane’s T2 法，以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

結 果

1 大鼠血壓和主動脈、腸系膜動脈中膜厚度變化

實驗結束后，與C 組、MN 組和T 組相比，MH 組尾動脈收縮壓和頸動脈平均壓明顯升高，差異有統計學意義(P ＜0.05)，其余各組之間比較無統計學差異。TMH 組和MN 組主動脈和腸系膜動脈MT 與C組相比顯著增高(P ＜0.05)，T 組MT 降低(P ＜0.05)，MH 組和MN 組比較無統計學差異，見表1。

表1 各組大鼠血壓及主動脈、腸系膜動脈中膜厚度比較Table 1. The comparison of blood pressure and media thickness(MT)of aorta and mesenteric artery in various groups(±s)

表1 各組大鼠血壓及主動脈、腸系膜動脈中膜厚度比較Table 1. The comparison of blood pressure and media thickness(MT)of aorta and mesenteric artery in various groups(±s)

C:control group;MH:high－salt model with hypertension group;MN:high－salt model without hypertension group;T:high－salt + telmisartan group. * P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs C;#P ＜0.05，##P ＜0.01 vs T;△P ＜0.05 vs MN.

Group n Systolic blood pressure(mmHg)Carotid blood pressure(mmHg)Aorta MT(μm)Mesenteric artery MT(μm)12±7.20 MH 12 161.21±21.65* #△ 145.82±5.84* #△ 115.29±16.25＊＊## 71.87±15.93* #MN 12 123.25±11.20 125.04±6.16 103.22±7.98* # 63.75±2.23* #T 13 126.37±7.23 121.60±11.07 80.95±10.89 50 C 13 123.97±6.39 118.12±8.33 84.91±11.61 52..75±6.12

2 各組大鼠主動脈和腸系膜動脈HE 染色和Masson 染色

與對照組相比，MH 組和MN 組主動脈、腸系膜動脈中膜細胞層數增加，細胞核數量增加，平滑肌細胞排列紊亂，彈性膜彎曲、紊亂，T 組這些現象均明顯減輕，見圖1。

主動脈、腸系膜動脈中膜血管平滑肌細胞胞漿呈紅色，膠原纖維呈綠色，細胞核呈棕紫色。與C 組比較，MH 組和MN 組中膜膠原容積分數顯著增高(P ＜0.01);T 組主動脈和腸系膜動脈中膜膠原容積分數顯著低于MH 和MN 組(P ＜0.01);MH 組與MN 組間比較無統計學意義(P ＞0.05)，見圖2。

Figure 1. HE staining of aorta (A)and mesenteric artery (B)in various groups (×400).圖1 各組大鼠主動脈和腸系膜動脈的HE 染色

Figure 2. Masson staining of aorta (A)and mesenteric artery(B)in various groups (×400). ± s. n =5. ＊＊P ＜0.01 vs C;##P ＜0.01 vs T.圖2 各組大鼠主動脈和腸系膜動脈Masson 染色

3 各組大鼠主動脈、腸系膜動脈PCNA 蛋白表達

免疫組化圖片顯示血管中膜平滑肌細胞中PCNA 蛋白被染成棕黃色，在胞核內表達。與C 組比較，MH 組和MN 組主動脈和腸系膜動脈中膜PCNA表達增高(P ＜0.05)，表明主動脈和腸系膜動脈中膜血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖;經替米沙坦干預后，PCNA 表達下降;與MN 組相比，MH 組表達無顯著差異，見圖3。

4 各組大鼠主動脈TGF－β1、Smad2、Smad3 及Smad7 mRNA 的表達情況

通過real－time PCR 檢測大鼠主動脈中膜TGF－β1、Smad2、Smad3 及Smad7 mRNA 的表達，結果發現:與C 組比較，MH 組和MN 組主動脈的TGF－β1和Smad2 mRNA 表達增高(P ＜0.05)，MN 組Smad3表達降低(P ＜0.05)，MH 組Smad7 表達升高(P ＜0.05);經替米沙坦干預后，TGF－β1、Smad2 及Smad7 mRNA 表達下降(P ＜0.05);與MN 組相比，MH 組Smad3 和Smad7 mRNA 表達較高(P ＜0.05)，而TGF－β1和Smad2 表達無顯著差異，見圖4。

Figure 3. Immunohistochemical staining showed the expression of PCNA in aorta (A)and mesenteric artery (B). ±s.n =6. * P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01 vs C;#P ＜0.05 vs T.圖3 免疫組化染色顯示主動脈和腸系膜動脈中PCNA 的表達

Figure 4. The expression of TGF－β1，Smad2，Smad3 and Smad7 mRNA in aorta from various groups. ±s.n =8. * P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs C;#P ＜0.05 vs T;△P＜0.05 vs MN.圖4 各組大鼠主動脈中TGF－β1、Smad2、Smad3 和Smad7 mRNA 的表達

5 各組大鼠主動脈和腸系膜動脈TGF－β1、p－Smad2/3、Smad7 和p－ERK1/2 蛋白表達情況

免疫組化圖像可見血管中膜平滑肌細胞中TGF－β1蛋白呈棕黃色表達在胞漿內，p－Smad2/3 蛋白呈棕黃色在胞核內表達，Smad7 蛋白在胞核及核周圍均有棕黃色表達。與C 組比較，MH 組和MN 組主動脈中膜的TGF－β1、p－Smad2/3 和p－ERK1/2 表達增高(P ＜0.05)，而Smad7 表達減少(P ＜0.05);經替米沙坦干預后，TGF－β1、p－Smad2/3 和p－ERK1/2 表達下降，Smad7 表達上升(P ＜0.05);與MN 組相比，MH 組TGF－β1表達較高(P ＜0.05)，Smad7 表達較低(P ＜0.05)，而p－Smad2/3 和p－ERK1/2 表達無顯著差異，見圖5、表2。

Figure 5. Immunohistochemical staining showed the expression of TGF－β1，p－Smad2/3，Smad7 and p－ERK1/2 in aorta (×400)圖5 免疫組化染色顯示主動脈中TGF－β1、p－Smad2/3、Smad7 和p－ERK1/2 的表達

表2 各組大鼠主動脈中膜TGF－β1、p－Smad2/3、Smad7和p－ERK1/2 陽性表達百分比Table 2. The percentages of the positive expression of TGF－β1，p－Smad2/3，Smad7 and p－ERK1/2 in rat aorta from various group (±s.n=6)

表2 各組大鼠主動脈中膜TGF－β1、p－Smad2/3、Smad7和p－ERK1/2 陽性表達百分比Table 2. The percentages of the positive expression of TGF－β1，p－Smad2/3，Smad7 and p－ERK1/2 in rat aorta from various group (±s.n=6)

＊＊P ＜0.01 vs C;##P ＜0.01 vs T;△P ＜0.05 vs MN.

Group TGF－β1 p－Smad2/3 Smad7 p－ERK1/2 C 7.22±1.31 9.52±3.11 33.80±6.28 7.18±2.82 MH 14.20±3.21＊＊##△24.60±7.51＊＊## 6.21±1.52＊＊##△29.30±5.77＊＊##MN 9.98±1.76＊＊## 21.40±6.92＊＊## 20.10±3.64＊＊ 25.10±5.06＊＊T 8.35±1.83 14.40±4.59 25.70±3.44 13.50±4.73

與C 組比較，MH 組、MN 組腸系膜動脈中膜的TGF－β1、p－Smad2/3 和p－ERK1/2 表達增高(P ＜0.01)，Smad7 表達下降(P ＜0.01);經替米沙坦干預后，TGF－β1、p－Smad2/3 和p－ERK1/2 表達下降，Smad7 表達升高(P ＜0.01);與MN 組相比，MH 組TGF－β1表達較高(P ＜0.05)，p－Smad2/3 有升高趨勢(P ＞0.05)，但無顯著差異，而Smad7 和p－ERK1/2 表達無顯著差異(P ＞0.05)，見圖6，表3。

討 論

Figure 6. Immunohistochemical staining showed the expression of TGF－ β1，p－Smad2/3，Smad7 and p－ERK1/2 in mesenteric artery (×400).圖6 免疫組化染色顯示腸系膜動脈中TGF－β1、p－Smad2/3、Smad7 和p－ERK1/2 的表達

表3 各組大鼠腸系膜動脈中膜TGF－β1、p－Smad2/3、Smad7 和p－ERK1/2 陽性表達百分比Table 3. The percentages of the positive expression of TGF－β1，p－Smad2/3，Smad7 and p－ERK1/2 in rat mesenteric artery from various groups (±s.n=6)

表3 各組大鼠腸系膜動脈中膜TGF－β1、p－Smad2/3、Smad7 和p－ERK1/2 陽性表達百分比Table 3. The percentages of the positive expression of TGF－β1，p－Smad2/3，Smad7 and p－ERK1/2 in rat mesenteric artery from various groups (±s.n=6)

＊＊P ＜0.01 vs C;##P ＜0.01 vs T;△P ＜0.05 vs MN.

Group TGF－β1 p－Smad2/3 Smad7 p－ERK1/2 C 4.34±0.90 6.21±0.85 23.30±3.51 8.34±3.59 MH 10.40±2.01＊＊##△29.80±6.21＊＊## 14.60±3.25＊＊## 21.60±3.84＊＊##MN 8.95±1.98＊＊## 25.40±4.97＊＊## 14.20±3.13＊＊## 18.10±3.99＊＊##T 5.72±1.83 16.10±3.32 20.50±4.04 12.50±3.76

在高血壓等病理狀態下，VSMCs 功能發生改變，細胞由收縮表型向合成表型轉變，細胞合成與分泌功能增強，導致細胞外基質含量增加，成分改變，尤其是膠原堆積，是導致血管重構的重要原因之一。慢性鹽負荷可通過血壓或獨立于血壓影響血管及心臟的結構和功能，增加心血管疾病的發生率和死亡率。7%NaCl 高鹽飼養自發性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)4 個月，其血壓升高幅度較正常鹽飼養的SHR 明顯增大，血管明顯增厚，彈性纖維和膠原纖維增多［16］;用高鹽喂養(8% NaCl)鹽敏感性高血壓大鼠后，其主動脈和腸系膜動脈管壁也明顯增厚［17］;Simon 等［10］研 究發 現高鹽(2%NaCl)飲食雖不能引起SD 大鼠血壓升高，但卻可以引起血管明顯的重構現象，故推測高鹽飼養可直接致血管重構，而血壓升高并非主要因素。目前國內外研究主要針對于鹽敏感性高血壓大鼠、SHR 及部分腎切除鹽敏感性大鼠，而本實驗以無遺傳易感性或解剖生理學缺損的正常Wistar 大鼠為研究對象，給予長期(6 個月)高鹽(8% NaCl)飼養后，無論大鼠是否形成高血壓，均發生主動脈和腸系膜動脈中膜厚度增加，VSMCs 增殖，層數增多，排列紊亂，膠原纖維沉積，說明長期高鹽飲食可以獨立于血壓導致正常Wistar 大鼠血管重構。

Smads 蛋白家族是TGF－β1信號轉導途徑中參與胞內信號轉導或調節的重要分子。TGF－β 與受體結合后，使其下游信號通道蛋白Smad2 分子和Smad3 分子磷酸化，進而與Smad4 蛋白形成復合物，活化的復合物轉移到核內與其它同時合成的核轉錄因子相互作用調節相關基因的轉錄。Smad2/3 是TGF－ β1致纖維化作用的主要信號轉導蛋白，而Smad7 是TGF－β1/Smads 信號轉導通路中的主要抑制性調控蛋白，可抑制TGF－ β1激活的Smad2/3 磷酸化和核轉位，從而對TGF－ β1信號轉導通路起負反饋抑制作用，降低TGF－β1信號的強度和持續時間［14］。Smad7 過度表達還能明顯減少血管外膜膠原含量，延緩球囊成形術后血管纖維化過程［18］，提示Smad7 可以延緩血管纖維化過程。本實驗結果顯示，高鹽模型組主動脈TGF－β1、Smad2、Smad3 及Smad7 mRNA 水平均較對照組升高，這與有關文獻［19］報道在肝纖維化初期，TGF－β1可促進Smad7 mRNA 升高，但抑制作用仍不足以拮抗由Smad2 和Smad3 mRNA 升高所產生的肝纖維化進展的結論相符合;與正常鹽對照組相比，高鹽模型組TGF－β1及下游分子p－Smad2/3 蛋白表達上升，Smad7 蛋白表達減少，提示高鹽飲食可以促進血管中膜TGF－β1和p－Smad2/3 表達，抑制Smad7 表達，TGF－β1/Smad 信號通路可能參與調控高鹽所致大鼠血管重構過程。此外，有研究發現血漿TGF－β1水平升高與高血壓的發生密切相關［20］，我們的研究觀察到，模型高血壓組主動脈和腸系膜動脈TGF－β1表達高于模型正常血壓組，提示TGF－β1在高鹽誘導血壓升高過程中發揮一定作用;模型高血壓組主動脈Smad7 表達低于模型正常血壓組，模型高血壓組腸系膜動脈p－Smad2/3 蛋白表達較模型正常血壓組有升高趨勢。TGF－β1效應的發揮主要與TGF－β1和受體調節性Smad2/3 或抑制性Smad7 結合有關［21］，在主動脈Smad7 表達減少，對TGF－β1信號轉導途徑起負反饋作用，增高TGF－β1信號的強度和持續時間，而在腸系膜動脈TGF－β1通過Smad2/3 使得信號轉導路徑激活，提示TGF－β1在主動脈和腸系膜動脈分別通過調節Smad7 和Smad2/3 表達共同參與高鹽致高血壓的發生發展。

TGF－β1激活的信號通路主要有以下幾種，Smads 通路、MAPK 通路、NF－κB 通路、磷脂酰肌醇3－激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3－kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)通路等。MAPK 超家族包括3 個亞家族:p38 MAPK、ERK 和c－Jun 氨基末端激酶。MAPK/ ERK 的阻斷劑可通過影響AngⅡ介導的Ⅰ型膠原合成從而緩解血管纖維化［12］。p38 MAPK 阻斷劑可以抑制TGF－β1誘導的血管平滑肌細胞增殖，但并未影響Smads 的表達與功能，提示該阻斷劑抑制TGF－β1誘導的細胞增殖不依賴Smads而通過MAPK 發揮作用［22］。MAPK 超家族激活可以促進膠原合成和VSMCs 增殖，但其中ERK 在高鹽引起血管重構中的作用知之甚少。本實驗結果表明在高鹽飲食下，ERK1/2 蛋白磷酸化水平顯著升高，說明ERK 通路也參與了高鹽飲食誘導血管重構過程。MAPK 與TGF－β1/Smads 通路之間存在交互通話，Rodriguez－Vita 等［13］及Wang 等［11］分別應用p38 MAPK 或ERK1/2 抑制劑阻斷AngⅡ介導的Smads活化及下游促血管重構相關基因轉錄與表達，證實MAPK 超家族通過與TGF－β1/Smads 通路的交互通話而影響Smads 活性最終參與血管重構過程。我們的結果顯示高鹽可使p－ERK1/2、p－Smad2/3 和Smad7 表達均發生改變，提示ERK 通路與Smads 通路共同參與了高鹽飲食致血管重構的發生，但ERK1/2 與TGF－β1/Smads 交互對話機制，有待利用ERK 阻斷劑進一步研究。

血管重構是高血壓等心血管疾病共同的病理生理特征之一，與RAS 活性表達異常密切相關，AngⅡ可通過其AT1 受體介導慢性心血管疾病中心肌及血管膠原增生，導致膠原比例失調與心血管重塑。高鹽可以使鹽敏感大鼠組織局部RAS 激活，動脈組織AT1受體mRNA 和密度增加，血管緊張素轉換酶(angiotensin converting enzyme，ACE)mRNA 和蛋白表達增加，動脈壁增厚和膠原沉積，AT1受體阻斷劑和ACE 抑制劑能阻止高鹽飲食誘導動脈膠原沉積和結構重塑［9，23－25］。從本實驗結果可以看出替米沙坦能在一定程度內下調TGF－β1、p－Smad2/3 和p－ERK1/2 表達，上調Smad7 表達，有效抑制高鹽所致大鼠主動脈和腸系膜動脈重構過程，表明替米沙坦可部分通過阻斷AT1受體影響TGF－β1/Smads 和ERK 通路發揮抗血管重構作用。

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