寧夏海原縣馬鈴薯脫毒苗切段擴繁技術要點

　　[摘 要] 海原縣作為寧夏區(qū)內(nèi)馬鈴薯生產(chǎn)大縣，每年繁育馬鈴薯原原種2000萬粒以上，這主要是經(jīng)過多年的馬鈴薯試管苗切段快繁技術試驗，成功培養(yǎng)了更多的脫毒馬鈴薯種苗，從而使脫毒馬鈴薯種薯源源不斷地應用于生產(chǎn)當中。
　　[關鍵詞] 馬鈴薯；種苗；擴繁技術
　　馬鈴薯脫毒試管苗的工廠化生產(chǎn)快繁，由于其技術和設備條件均要求很高，脫毒試管苗的切段快繁技術的好壞，直接關系到馬鈴薯種苗脫毒的成功與否，所以把握好每一個環(huán)節(jié)的技術要點非常關鍵。
　　一、洗瓶
　　擴繁的苗瓶可用三角瓶或小灌頭瓶，按需要量準備充足。用清潔熱水加入適量的洗衣粉，用試管刷涮洗苗瓶，達到瓶壁水珠分布非常均勻，透明感強，然后倒置在網(wǎng)架上涼干水珠待用。
　　二、配制培養(yǎng)基
　　1.稱藥品
　　根據(jù)培養(yǎng)基配方的用量，用托盤天平稱瓊脂（按每升蒸餾水加7g瓊脂）、蔗糖（按每升蒸餾水加20-30g蔗糖）；用電光分析天平按下列配方（MS配方）稱出藥品，并編號。
　　2.配母液
　　將稱量的藥品分類按排號溶在器皿的蒸餾水中，蒸餾水能充分溶解藥品為宜，藥品加入的順序為：大量元素以先單價后雙價加入，最后加入鈣鹽，即配成母液。
　　3.制作培養(yǎng)基
　　（1）首先用量筒量出所需的蒸餾水，用大鋁鍋盛裝，將稱得的瓊脂侵在大鋁鍋的蒸餾水中，然后將大鋁鍋邊加熱邊攪動使瓊脂充分溶解后再加入蔗糖使其溶解。
　?。?）在充分溶解的瓊脂和蔗糖溶液中分別加入母液1、母液2、母液3、母液4，母液5用小火繼續(xù)加熱使其充分溶解，再用沸蒸餾水定容。
　　（3）調(diào)節(jié)配養(yǎng)基pH值。用pH試紙檢驗，顯酸性時，用滴管滴加NaOH；或KOH顯堿性時滴加磷酸或鹽酸溶液，直至pH試紙測得pH值為5.7為宜，即培養(yǎng)基已配制完備。
　　三、裝瓶
　　將配制好的培養(yǎng)基分別裝在洗凈的苗瓶中，每瓶定容15-20mL，然后用封口膜封口，將其送到消毒室待消毒。
　　四、高壓消毒
　　用高壓滅菌鍋進行滅菌消毒。在120-124℃下，消毒25min，即消毒結束，停止加熱后約過20-30min取出苗瓶。
　　五、無菌操作室內(nèi)消毒滅菌
　　1.熏蒸
　　無菌室剛開始工作或間隔2-3個月未進行消毒時，先熏蒸消毒。熏蒸按每立方米空間計算，即1m3空間按10：7的高錳酸鉀溶液放盆中，馬上關閉門窗，間隔1-2d后即可在室內(nèi)工作。
　　2.紫外線消毒
　　將工作服、口罩、拖鞋、盛裝75%的酒精瓶、剪刀、鑷子、酒精燈、苗源瓶、擴繁瓶、封口膜、線繩或皮筋、干凈紗布等無菌室所需物品放在無菌室固定位置，啟動超凈工作臺，通風殺菌，室內(nèi)紫外燈打開消毒，工作人員快速離開無菌室，滅菌25-30min即可。
　　六、試管苗切段擴繁
　　工作人員按無菌操作程序進入無菌室，穿戴好消毒服裝，用75%的酒精將雙手消毒，再用酒精侵濕干凈的紗布擦拭超凈工作臺面、苗源瓶、擴繁瓶、將剪刀、鑷子插入酒精瓶，就可進行切斷接苗。方法是：關閉超凈工作臺殺菌開關，點亮酒精燈，取掉擴繁瓶的封口膜，瓶口稍斜，離酒精燈芯0.5cm用手輕輕轉動，直至瓶底以上部全部消毒一遍，然后放在超凈工作臺的右邊，再取掉苗源瓶的封口膜用同樣的方法在酒精燈上消毒一遍，防止小苗被燒傷，然后放在超凈工作臺左邊；最后把剪刀和鑷子從盛75%的酒精瓶內(nèi)取出，放在酒精燈離燈芯0.5cm處上下轉動消毒一遍，稍涼片刻，用鑷子將苗源瓶中的小苗夾出瓶口，只留根部在瓶內(nèi)，用剪刀剪掉根部，然后再用鑷子夾小苗離擴繁瓶口1-2cm處（注意不要讓小苗挨上擴繁瓶口，以防感染），剪帶一片小葉的莖段放在擴繁瓶中，一般擴繁瓶可接15-20個莖段。封口膜在酒精燈上稍消毒后封口，然后在瓶外壁注明接苗品種、年月日、切苗人員姓名。
　　七、培養(yǎng)
　　把切斷接好苗的擴繁瓶送到培養(yǎng)室進行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度控制在25℃，光照2000—3000勒克斯，如用日光燈為光源，每天光照16h為宜；相對濕度保持在75-80%之間，切段擴繁后3-4d如果發(fā)現(xiàn)有污染瓶，須馬上將污染瓶移離培養(yǎng)室。健康苗50-60d就可以再擴繁或作扦插的基礎苗。