精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚含量的測定

摘要：建立了精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚含量的HPLC檢測方法。采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）為流動相，流速為1 mL/min，檢測波長為249 nm，進樣量10 μL，外標法定量，結果顯示，該法專屬性好、簡便、快速、準確、重現性好，適合于精制銀翹解毒片的質量分析。對乙酰氨基酚在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范圍內峰面積與測定濃度呈良好的線性關系，R2=0.999 9（n=5），平均回收率為96.2%，RSD為8.0%（n=9）。

關鍵詞：HPLC；精制銀翹解毒片；對乙酰氨基酚；測定

中圖分類號：R969.1；TS255.36 文獻標識碼：A 文章編號：0439—8114（2012）19—4358—03

精制銀翹解毒片收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第三冊[1]，是由對乙酰氨基酚、桔梗、連翹、淡豆豉、甘草、淡竹葉、金銀花、牛蒡子、荊芥穗、薄荷腦等組成的復方制劑，現行標準中對乙酰氨基酚的含量測定采用丙酮提取后蒸干，再用無水乙醇溶解，用紫外分光光度計測定，此方法由于操作繁瑣、時間長、所用試劑揮發性較大，造成測定誤差較大。為了保證測定結果的準確性，根據現行藥品質量標準和大量試驗的基礎上，對精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚含量的測定方法進行了改進。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀（威瑪龍LC9000）。

1.2 材料

對乙酰氨基酚（中國藥品生物制品檢定所，批號為100018—200408，供含量測定用）；精制銀翹解毒片（廣西大力神制藥股份有限公司提供，批號為100601）；甲醇（色譜純，天津四友）；水為重蒸餾水；冰乙酸（分析純）。

1.3 試驗方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱選用杭州環球色譜科技有限公司的C18（AP）色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）；流速為1 mL/min；檢測波長為249 nm[2]；進樣量為10 μL。在該色譜條件下，對乙酰氨基酚峰形良好，前、后均無雜峰影響。

考慮到樣品溶劑對色譜的干擾，根據《中國藥典》附錄中樣品溶劑宜盡量采用流動相作溶劑的要求[1，3]，采用本方法的流動相作為溶劑，而且經試驗證明該溶劑在該色譜條件下無干擾。

1.3.2 專屬性試驗（空白試驗） 按處方制成不含對乙酰氨基酚的樣品，按上述方法進行測定，結果表明在對乙酰氨基酚出峰處無吸收峰出現。

2 結果與分析

2.1 線性關系與范圍考察

稱取對乙酰氨基酚對照品8.13 mg，置100 mL容量瓶中加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為0.081 3 mg/mL的對照品溶液。精密量取5.0、10.0、12.5、20.0、25.0 mL上述溶液分別置于25 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10 μL，記錄峰面積。以對乙酰氨基酚的峰面積（y）對進樣量（x）進行線性回歸，得回歸方程為：y=5×107x—15 956，R2=0.999 9（n=5）。測定結果（表1）表明，在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范圍內峰面積與測定濃度呈良好的線性關系。

2.2 重復性試驗結果

取同一批號樣品（批號：100 601）6份，按含量測定項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下，測定對乙酰氨基酚的含量，結果顯示方法重復性良好，結果見表2。

2.3 精密度試驗結果

取對照品溶液（濃度為0.040 65 mg/mL）10 μL，連續進樣6次，測定對乙酰氨基酚的峰面積，結果顯示方法精密度良好，結果見表3。

2.4 穩定性試驗結果

取對照品溶液（0.040 65 mg/mL），于0、2、4、8、12 h分別進樣，依法測定對乙酰氨基酚峰面積值，結果顯示，溶液至少在12 h內是穩定的。結果見表4。

2.5 加標回收試驗結果

精密稱取已知含量的同一批供試品（批號：100 601，含量為100.4%）3份，各精密加入一定量的對乙酰氨基酚對照品，研磨均勻后精密稱取3份做平行試驗，計算加樣回收率。測定結果（表5）較好。

3 小結與討論

為了保證藥品的質量，準確對對乙酰氨基酚的含量進行監控，本研究在參考有關報道和大量試驗的基礎上，對精制銀翹解毒片中含量測定方法進行改進。確定最佳條件為：采用Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）為流動相，流速為1 mL/min，檢測波長為249 nm， 進樣量為10 μL，以外標法測定含量，對乙酰氨基酚在0.016 26～0.081 30 mg/mL的范圍內峰面積與測定濃度呈良好的線性關系，R2=0.999 9（n=5），平均回收率為96.2%，RSD為8.0%（n=9）。試驗結果顯示該方法靈敏、專屬性強、操作簡便、結果準確，完全可應用于精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚的質量分析。

流動相的選擇上，有關文獻報道不盡相同，如甲醇—水（體積比35∶65）、甲醇—水（體積比20∶80）等。由于精制銀翹解毒片與銀翹片的處方組成基本一致，因此選擇銀翹片質量標準（國家藥品標準WS3—B—4000—98—2003）中的流動相甲醇—水—冰乙酸（體積比為20∶80∶0.5）作為流動相，得到較好的結果。

對乙酰氨基酚的溶劑選擇上，因對乙酰氨基酚易溶于熱水、乙醇，分別采用乙醇、水、甲醇及流動相溶解，其中流動相和乙醇、甲醇的效果較好[4]。用乙醇做溶劑時所得峰形較差，用甲醇作溶劑峰形有所改善，但各項條件均不能滿足《中國藥典》的要求；而用流動相作溶劑得到的色譜峰峰形好，各項條件均滿足《中國藥典》的要求，因此選流動相作為溶劑。

相關報道對乙酰氨基酚在200～400 nm處有最大吸收[5]，取對照品溶液進樣在此波段進行掃描，結果發現在249 nm處有最大吸收，且此波長處其他輔料沒有吸收[2]，同時參考維C銀翹片質量標準（《中國藥典》2010年版一部，其處方組成除多了馬來酸氯苯那敏和維生素C外，其余與精制銀翹解毒片一樣），確定249 nm為檢測波長且得到較好的檢測結果[2，6]。

參考文獻：

[1] WSB 2574—1997，中藥成方制劑（第三冊）[S].

[2] 謝笑英，黃文峰.中成藥中對乙酰氨基酚含量測定的4種方法及比較[J].河北醫學，2005（6）：563—565.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社，2005.

[4] 唐 駿，章 晶. HPLC法測定精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚的含量[J].湖北中藥雜志，2008，30（3）：58—59.

[5] 趙希賢.高效液相色譜法測定精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚的含量[J].首都醫藥，2005（22）：50—51.

[6] 程萬清，許景東，潘 帆.復方制劑中對乙酰氨基酚含量測定方法概述[J].中國醫院藥學雜志，2005（10）：967—968.