唾液富組蛋白5的原核表達(dá)\\純化與抗菌活性鑒定
2012-12-31 00:00:00金科華
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年8期
摘要：設(shè)計(jì)一對(duì)３′端互補(bǔ)、５′端帶酶切位點(diǎn)的引物，用ＰＣＲ擴(kuò)增唾液富組蛋白５（Ｈ５）基因（ｈ５），將載體ｐＧＥＸ４Ｔ－２和ｈ５雙酶切、連接、轉(zhuǎn)化ＤＨ５α，將篩選鑒定的重組質(zhì)粒ｐＧＥＸ４Ｔ－２-ｈ５轉(zhuǎn)化ＢＬ２１（ＤＥ３）。誘導(dǎo)重組菌ＢＬ２１（ＤＥ３）－ｐＧＥＸ４Ｔ－２－ｈ５表達(dá)，純化融合蛋白ＧＳＴ－Ｈ５，用Thrombin切去ＧＳＴ標(biāo)簽獲取重組Ｈ５（ｒＨ５），測(cè)試rH5抗白色念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）活性。試驗(yàn)成功構(gòu)建了重組載體ｐＧＥＸ４Ｔ－２－ｈ５，在３７ ℃重組菌ＢＬ２１（ＤＥ３）－ｐＧＥＸ４Ｔ－２－ｈ５生長(zhǎng)至ＯＤ６００ ｎｍ＝０．６時(shí)用１ ｍｍｏｌ／Ｌ ＩＰＴＧ于２０ ℃誘導(dǎo)９ ｈ，可獲得高水平表達(dá)的融合蛋白GST-H5；酶切后獲得的ｒＨ５對(duì)白色念珠菌生長(zhǎng)有較強(qiáng)的抑制作用，ｒＨ ５產(chǎn)率約２ ｍｇ／Ｌ。
關(guān)鍵詞：唾液富組蛋白５（Ｈ５）；融合蛋白ＧＳＴ－Ｈ５；原核表達(dá)；白色念珠菌（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）
中圖分類號(hào)：Q78文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）08－1696-03
