ACP215去甘油洗滌過程的“沖紅”現象的調查與分析

徐芳 孫韻 陳峰 李阿中 周華平

●輸血專題

ACP215去甘油洗滌過程的“沖紅”現象的調查與分析

徐芳 孫韻 陳峰 李阿中 周華平

冰凍紅細胞是紅細胞加40%甘油作為保護劑冰凍后的制品，貯存于-65℃以下，已廣泛用于稀有血型血液的保存。當臨床急需時，冰凍紅細胞在40℃解凍，通過系列的洗滌而制成解凍紅細胞應用于臨床。目前洗滌的方式有手工洗滌和機器自動洗滌，國內現大多數采用機器自動洗滌。我中心近2年采用ACP215洗滌機自動洗滌，發現洗滌剛開始廢液顏色為粉紅，繼續洗滌幾分鐘后廢液顏色突然變為深紅，溶血很明顯，繼續洗滌廢液顏色會逐漸變淡，這個現象被稱為“沖紅”，本文對此進行原因分析，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 冰凍紅細胞、9%氯化鈉溶液和0.9%氯化鈉溶液（上海血液技術公司）、水浴箱、接管機和熱合機（泰爾茂公司）、ACP215洗滌機（美國血液技術公司）、HAEMONETICS比色卡。

1.2 方法 將常規冰凍的紅細胞20袋，依次40℃循環水浴融化，融化后即刻取出留樣。然后與235耗材無菌連接，藍色管連接9%氯化鈉溶液，黃色管接0.9%氯化鈉溶液。根據機器程序和細胞單位數設置參數，1U解凍紅細胞設9%氯化鈉溶液80ml，NaCl Dilute Vol 1/2為170ml，NaCl Dilute Vol 2/2為20ml；2U解凍紅細胞設9%氯化鈉溶液160ml，NaCl Dilute Vol 1/2為340ml，NaCl Dilute Vol 2/2為400ml；自動洗滌后采用0.9%氯化鈉溶液充當保養液。當機器運行到屏幕顯示（a）“Dilutie 2 of 2 Filling Bowl”、（b）“Wash 1 of 6”、（c）“Wash 2 of 6”、（d）“Wash 3 of 6”、（e）“Wash 4 of 6”、（f）“Wash 5 of 6”、（g）“Wash 6 of 6”、（h）“Add Preservation 1/1”等8個階段程序時，分別取末尾流出的廢液和標準比色卡進行對比，找出對應游離血紅蛋白接近目視含量（g/L），介于兩個值之間的取平均值。

1.3 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件，計量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析。

2 結果

20袋血液樣本平均采集量（1.4±0.50）U，最終洗滌完畢后h點各樣本游離血紅蛋白含量均值為（0.49± 0.21）g/L，符合國家有關標準（0.25～1.00g/L）。洗滌液游離血紅蛋白含量在a、b點呈現增高趨勢，大多在c、d點達到最高值，分別是（6.42±1.44）g/L和（5.60±1.61）g/L，然后開始逐步降低。與e點（3.79±1.25）g/L、f點（2.46±0.93）g/ L、g點（1.24±0.25）g/L和h點（0.49±0.21）g/L比較，差異有統計學意義（P＜0.01），與洗滌過程中廢液顏色突然變為深紅的時點相一致。

3 討論

甘油可作為冰凍紅細胞的保護劑，添加甘油后紅細胞制品呈現高滲狀態，因此冰凍紅細胞制品必須經過洗滌后才能用于臨床使用。本研究采用ACP215洗滌機，依次加入濃氯化鈉溶液、0.9%氯化鈉溶液對冰凍紅細胞進行自動去甘油洗滌，可分為8個不同時間點。從程序上看，a點之前主要為濃氯化鈉溶液、解凍紅細胞、甘油和極少量0.9%氯化鈉溶液的混合液。由于該混合液總體上仍處于高滲狀態，基本上與原冰凍紅細胞等滲，細胞未被破壞。a點時的廢液則是由濃氯化鈉溶液、解凍紅細胞、甘油和部分0.9%氯化鈉溶液的混合液經離心后產生，由于滲透壓下降幅度較少，故紅細胞破壞少，游離血紅蛋白濃度低，而且此時總體積相對較大，因此經離心流出的廢液顏色較淡。b點開始到h點則邊加0.9%氯化鈉溶液邊洗滌，此時總體積即固定為275ml，相對前期大大減小，而且滲透壓逐漸下降，導致少量紅細胞破壞出現游離血紅蛋白。結果顯示b、c兩點存在“沖紅”現象，其原因可能與滲透壓下降有關。研究[1]顯示紅細胞的慢速冷凍損傷主要是水結冰時紅細胞內外產生的高濃度電解質作用于細胞膜，引起脂蛋白復合物的變性和部分類脂質的丟失，增加細胞對陽離子的通透性，并使細胞膜上形成一些小孔。冰融化時水進入細胞內引起滲透休克，導致紅細胞失去活性。a點時紅細胞周圍有大量濃氯化鈉溶液產生高滲鹽析作用，高滲作用使紅細胞外水分子不會立即大量進入細胞內而產生快速溶血，鹽析作用使細胞內甘油大量游到細胞外，所以a點時廢液的甘油濃度較高。隨著后續洗滌過程中0.9%氯化鈉溶液的加入，滲透壓發生改變，水分子通過部分變性紅細胞的細胞膜上小孔漸漸進入細胞內而產生溶血，故c、d兩點時廢液的游離血紅蛋白濃度増高。繼續加入0.9%氯化鈉溶液，含變性細胞膜的紅細胞漸漸減少，溶血的紅細胞減少，導致游離血紅蛋白減少，廢液顏色變淡。

國家標準《全血及成分血質量要求》GB18469-2012[2]規定冰凍解凍去甘油洗滌紅細胞的游離血紅蛋白含量≤1g/L，廢液顏色淡于比色卡3號標準品。實際工作中我們要求h點時廢液應接近標準品1～2號水平，如未達到將選擇程序繼續洗滌。ACP215機器洗滌過程存在“沖紅”現象，而廢液的顏色能較準確反映游離血紅蛋白含量，因此在實際洗滌過程中應及時采用比色卡監測游離血紅蛋白含量，以保障制備的血液制品符合國家標準。

[1]安萬新.輸血技術學 [M].1版.北京:科學技術文獻出版社,2006: 189-190.

[2]中華人民共和國衛生部.全血及成分血質量要求,GB18469-2012:8.

2012-11-15）

（本文編輯：胥昀）

310006 杭州，浙江省血液中心血液制備供應科